海洋鱼低聚肽增强骨密度的作用

陈大伟　于兰

随着人类数量的增加，陆生资源的匮乏及污染，海洋渔业成为我国近年未发展速度最快的产业之一。我國是一个海洋大国，渔业资源非常丰富，水产品产量约占世界的1/3，海洋鱼加工过程中会产生的大量下脚料，包括皮、骨、鳞、鳍等，其重量占原料鱼的40%-60%。这些下脚料含有丰富的蛋白，如果不加以利用，不但造成资源的浪费，还会带来环境的污染。海洋胶原蛋白酶解技术是目前国内研究的热门领域，崔凤霞采用风味蛋白酶从仿刺参、墨西哥参及菲律宾刺参体壁中提取了胶原蛋白肽；祝靖等研究了海鲈鱼胶原蛋白肽的制备分离机对皮肤伤口的愈合作用。通过生物酶解技术，以海洋鱼下脚料为原料制备的海洋鱼低聚肽，相比蛋白质分子量更小，更易于被人体吸收，并且还可以提高海洋水产加工行业的附加值。本文旨在探究海洋鱼低聚肽对小鼠增加骨密度的作用，为其在补钙产品中的应用提供依据。

海洋鱼低聚肽的制备

海洋鱼下脚料中主要成分的为胶原蛋白，水解后制备的低聚肽，更易于被人体吸收，具有很多重要的生理功能。水解蛋白质有酸法、碱法和酶法三种方式，酶法水解制备低聚肽反应条件温和，其产物无任何毒副作用，安全可靠，本文选用鳕鱼皮为原料，高温高压进行蛋白质变性后，采购碱性蛋白酶和中性蛋白酶进行梯度酶解，其制备工艺如下：

海洋鱼下脚料→脱脂→高温变性→酶解→脱色脱腥→过滤→真空浓缩→瞬时灭菌→喷雾干燥。

海洋鱼低聚肽增强密度功能评价

材料

（1）实验动物：SPF级雌性SD大鼠，60-80g，由湖北省实验动物研究中心提供。实验动物生产许可证号：SCXK（鄂）2015-0018。

（2）动物饲料：低钙饲料按低钙饲料配方配制，钙质量分数约为0.1%。

（3）样品及配制：阳性对照组为碳酸钙，准确称取4g碳酸钙，加去离子水至100ml；样品组准确称取2.5g、5g、10g海洋鱼皮低聚肽（相当于人体剂量的5倍、10倍、20倍），加入去离子水至100ml。

（4）主要仪器：原子吸收分光光度计、SD-1000C骨矿物质测量仪，电子天平。

实验方法

分别给予受试动物灌胃，每天灌胃一次，灌胃体积为1.0ml/100g·bw，低钙对照组给予等体积的去离子水，连续灌胃三个月。

实验动物生长发育指标：每周称量体重和身长。

股骨重量级骨密度测定：实验结束时，断头处死大鼠，剥离右股骨，经105℃烘箱烤至恒重，冷却至室温后，称取股骨重量，测量股骨的骨密度。

骨钙含量的测定：用原子吸收分光光度法测定骨钙含量。

实验数据统计：采用SPSS（11.0）软件进行方差分析，结果以平均值±标准差标示（r±s）。

结果判定：阳性对照组的骨钙含量或骨密度显著高于低钙剂量组，给予受试物组的骨钙含量或骨密度显著高于阳性对照组，可判定受试物具有增加骨密度的作用。

结果

（1）海洋鱼低聚肽粉对大鼠体重的影响

由表1可知，各实验组大鼠起始重量体重无显著性差异（P>0.05）；各剂量组大鼠的末期体重和体重增加值与低钙相比差异没有显著性（P>0.05）。

（2）海洋鱼低聚肽对大鼠股骨的影响

由表2可知，碳酸钙组大鼠右股骨骨重、左股骨骨密度较低钙组有显著性差异（P<0.05）；各剂量组大鼠的右股骨骨重、骨钙含量和左股骨骨密度较低钙组具有显著性或极显著性差异（P<0.05，P<0.01），并且各剂量组大鼠的左股骨骨密度和右股骨骨钙含量与碳酸钙组对比有显著性差异（P<0.05）

（3）功能评价结果

由上述实验结果表明，海洋鱼低聚肽3个剂量组和碳酸钙阳性对照组实验后体重较低钙剂量组无显著性差异（P>0.05），说明海受试物对动物生长无不良影响；受试物的三个剂量组在右股骨骨重、骨钙含量和左股骨骨密度较低钙对照组相比有显著性差异（P<0.05，P<0.01），因此，根据评价标准，海洋鱼低聚肽具有增加骨密度的功能。

结论

在我国，海洋渔业资源相当丰富，通过酶解纯化技术从鱼下脚料中提取的低聚肽，具有多种功能活性。朱翠凤等通过观察海洋鱼胶原肽对高血压患者脂肪内分泌激素表达的影响，结果显示海洋鱼胶原肽可抑制或促进脂肪内分泌激素的表达而发挥降血压、抗动脉粥样硬化等作用；裴新荣等研究了海洋鱼低聚肽抗皮肤老化作用的实验研究，证明了具有抗皮肤老化的作用，王静凤等研究鱿鱼皮胶原蛋白肽对B16黑素瘤细胞黑素合成的影响，证明具有美白作用；王波军等对海洋胶原肽的分子组成及其降血脂和抗氧化作用研究发现其具有降血脂和抗氧化的做用。本文研究的海洋鱼低聚肽增加骨密度的作用，对于改善我国中老年人骨质疏松有十分重要的意义，也扩展了其在功能性食品中的应用。