地肤子总黄酮含量测定及其抗氧化活性

李培源　卢汝梅　苏炜　滕明敏　郭娜娜　吴采颖

摘要：研究地肤子不同溶剂提取物的总黄酮含量及其抗氧化活性。用冷浸法得到地肤子乙醇、丙酮和乙酸乙酯提取物。测定了三种提取物的总黄酮含量，并通过测定其对DPPH自由基的清除能力和还原能力来研究其抗氧化能力。地肤子不同溶剂提取物均表现出很强的抗氧化性能，其抗氧化能力随提取物浓度增大而增强。地肤子提取物具有作为天然抗氧化剂的潜力。

关键词：地肤子；DPPH；还原能力；抗氧化；总黄酮含量

地肤（Kochia scoparia）是藜科一年生草本植物，高50-100 am。地肤子为地肤的果实，扁球状五角星形，直径1～3 mm，具有清热利湿、祛风止痒等功效，主治小便涩痛、阴痒带下、风疹、湿疹、皮肤瘙痒等疾病。地肤子在民间使用广泛，但其抗氧化方面的研究鲜见报道。抗氧剂可以清除人体内过量的自由基，预防动脉硬化、关节炎、糖尿病、肌肉萎缩和老年痴呆等多种疾病。目前，使用较多的合成抗氧化剂如2.6-二叔丁基4-甲基苯酚等具有较多副作用，因此近年来科研工作者致力于寻找来源于植物的天然抗氧化剂。本试验通过测定地肤子3种溶剂提取物（乙醇提取物、丙酮提取物和乙酸乙酯提取物）对DPPH自由基的清除能力和还原能力来对其抗氧化能力进行研究，为地肤子作为一种天然高效抗氧化物的推广利用提供理论依据。

1.材料与方法

1.1材料、试剂和仪器

地肤子来源于广西玉林。芦丁标准品购于百灵威试剂公司（北京）。所有试剂均为分析纯。UV1901型紫外可见分光光度计（北京普析电子科技有限公司）。

1.2方法

1.2.1地肤子不同溶剂提取物制备 称取20 g地肤子粉末，加入200 mL乙醇（95%），冷浸72 h。重复上述操作3次，合并提取液。旋转蒸发回收溶剂，得到地肤子乙醇提取物（EE）0.8 g，得率为4.0%。采用相同方法，用丙酮及乙酸乙酯提取，得到丙酮提取物（AE）0.6 g和乙酸乙酯提取物（EAE）0.8 g，得率分别为3.0%和4.0%。

1.2.2地肤子总黄酮含量的测定

1）标准曲线的绘制。精确吸取芦丁对照品溶液（1 mg/mL）于10 mL量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠0.4 mL，静置6 min，加入5%硝酸铝0.4 mL，静置6 min。再加入5%氢氧化钠试液4.0 mL，用95%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置15 min，在510nm处测定其吸光度。以吸光度对溶液浓度进行回归分析，绘制标准曲线，求出回归方程。

2）地肤子提取物总黄酮含量测定。将芦丁标准溶液换为固定浓度提取物溶液，同上操作测定其吸光度，多次测量求平均值。根据标准曲线计算总黄酮的芦丁当量，总黄酮含量以每克干物质的芦丁当量（mg）表示，并计算提取得率。

1.2.3地肤子提取物对DPPH 自由基的清除能力测定取不同浓度地肤子提取物溶液（0.5、0.8、1.0、1.2、1.5、1.8、2.0 mg/mL）加入8 mL DPPH（0.004%）溶液中。在最大波长处（517 nm）测定其吸光度，直到平衡为止。清除率计算公式为s=（1-A样品）/A空白×100%。其中，A空白为未加药液的DPPH溶液的吸光度，A样品为加入药液的DPPH溶液的吸光度。

1.2.4还原能力测定 取上述不同浓度地肤子提取物溶液0.2 mL，加入2.5 mL PBS溶液（pH 7.4），2.5 mL KFe（CN）4（1%）。于50℃恒温20 min后，加入2.5 mL三氯乙酸溶液（10%），离心10 min。取上清液2.5 mL，加入2.5 mL蒸馏水、0.5 mL FeCl3（1%），混匀。在700 nm处测定其吸光度，以蒸馏水为参比。

2.结果与分析

2.1地肤子提取物总黄酮含量

以吸光度对溶液浓度进行回归分析，绘制标准曲线，得到回归方程y=9.677 8x+0.016 7（R=0.9992）。根据线性方程得出地肤子乙醇提取物（EE）、丙酮取物（AE）和乙酸乙酯提取物（EAE）的总黄酮含量测定结果。结果表明，3种提取物的总黄酮含量在29.5～43.5 mg/g之间，均具有较高的黄酮含量，具有作为自由基清除剂应用的潜力。

2.2地肤子提取物对DPPH自由基的清除能力

地肤子3种溶剂提取物对DPPH自由基清除能力的测定结果如图1所示。3种提取物对DPPH自由基的清除能力均随其浓度的升高而增强。对于AE，浓度为0.5和0.8 mg/mL时，清除率分别为27.8%和37.7%，浓度增加到1.2、1.5 mg/mL时，清除率增大为47.9%和57.6%。当AE浓度增加到1.8、2.0 mg/mL时，清除率增大到64.8%和70.2%。对于EAE，当浓度从0.5 mg/mL增加到2.0 mg/mL，清除率从23.9%增加到72.4%。

当提取物浓度较低时（0.5和0.8 mg/mL），AE和EE表现出相近的DPPH自由基清除能力。而在较高提取物浓度（1.8和2.0 mg/mL）时，EE表现出最强的清除能力，在1.8 mg/mL时清除率为73.6%，在最高浓度2.0 mg_/mL时清除率为85.8%。结果表明，地肤子的3种提取物对于DPPH自由基均具有很强的清除能力。

2.3不同溶剂提取物EC50值

EG50代表抗氧化剂对自由基达到半抑制时的质量浓度。EG50的数值越大，则表明抗氧化剂对自由基的清除能力越强。地肤子3种提取物EE、AE和EAE对DPPH自由基的EC值分别为1.13、1.28、1.15 mg/mL。因此，3种提取物的EGo值大小顺序为AE、EAE、EE。即，地肤子不同溶剂提取物对DPPH自由基的清除能力顺序为EE>EAE>AE。

2.4地肤子提取物的还原能力

地肤子不同溶剂提取物的还原能力如图2所示。抗氧化剂通过自身的还原作用给出电子从而达到清除自由基的效果，还原能力越强，则抗氧化性越强。测定结果以吸光度表示，吸光度越高表示还原能力越强。地肤子3种提取物的还原能力均与提取物浓度呈正相关，即提取物浓度越高，其还原能力越强。对于AE，浓度为0.5和0.8mg/mL时吸光度分别为0.29和0.33，浓度为1.0和1.2mg/mL时吸光度分别为0.46和0.53，当浓度增大为1.8和2.0mg/mL时，吸光度分别为0.73和0.89。对于EE，按浓度由低至高其吸光度分别为0.21、0.41、0.51、0.61、0.63、0.80和0.86，其还原能力随浓度增大而增强。在较高浓度时（2.0 mg/mL），3种提取物的还原能力接近，AE、EE和EAE的吸光度分别为0.89、0.86和0.88。

3.小结

本试验测定了常用中药地肤子不同溶剂提取物的总黄酮含量，并通过DPPH自由基体系和还原能力来研究其抗氧化性能。结果表明，地肤子不同溶剂提取物对DPPH自由基均显现出较强的清除能力，浓度为2.0 mg/mL时EE的清除率为85.8%。EC值分析结果表明，不同溶剂提取物对DPPH自由基的清除能力顺序为EE>EAE>AE。不同地肤子提取物均具有很强的还原能力，且还原能力随提取物浓度增大而增强。研究结果表明，地肤子不同溶剂提取物，特别是EAE，具有优良的清除自由基能力和抗氧化能力，有望作为天然抗氧化剂在工业上应用。