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地肤子总黄酮含量测定及其抗氧化活性

2016-05-14李培源卢汝梅苏炜滕明敏郭娜娜吴采颖

湖北农业科学 2016年7期
关键词:清除率光度黄酮

李培源 卢汝梅 苏炜 滕明敏 郭娜娜 吴采颖

摘要:研究地肤子不同溶剂提取物的总黄酮含量及其抗氧化活性。用冷浸法得到地肤子乙醇、丙酮和乙酸乙酯提取物。测定了三种提取物的总黄酮含量,并通过测定其对DPPH自由基的清除能力和还原能力来研究其抗氧化能力。地肤子不同溶剂提取物均表现出很强的抗氧化性能,其抗氧化能力随提取物浓度增大而增强。地肤子提取物具有作为天然抗氧化剂的潜力。

关键词:地肤子;DPPH;还原能力;抗氧化;总黄酮含量

地肤(Kochia scoparia)是藜科一年生草本植物,高50-100 am。地肤子为地肤的果实,扁球状五角星形,直径1~3 mm,具有清热利湿、祛风止痒等功效,主治小便涩痛、阴痒带下、风疹、湿疹、皮肤瘙痒等疾病。地肤子在民间使用广泛,但其抗氧化方面的研究鲜见报道。抗氧剂可以清除人体内过量的自由基,预防动脉硬化、关节炎、糖尿病、肌肉萎缩和老年痴呆等多种疾病。目前,使用较多的合成抗氧化剂如2.6-二叔丁基4-甲基苯酚等具有较多副作用,因此近年来科研工作者致力于寻找来源于植物的天然抗氧化剂。本试验通过测定地肤子3种溶剂提取物(乙醇提取物、丙酮提取物和乙酸乙酯提取物)对DPPH自由基的清除能力和还原能力来对其抗氧化能力进行研究,为地肤子作为一种天然高效抗氧化物的推广利用提供理论依据。

1.材料与方法

1.1材料、试剂和仪器

地肤子来源于广西玉林。芦丁标准品购于百灵威试剂公司(北京)。所有试剂均为分析纯。UV1901型紫外可见分光光度计(北京普析电子科技有限公司)。

1.2方法

1.2.1地肤子不同溶剂提取物制备 称取20 g地肤子粉末,加入200 mL乙醇(95%),冷浸72 h。重复上述操作3次,合并提取液。旋转蒸发回收溶剂,得到地肤子乙醇提取物(EE)0.8 g,得率为4.0%。采用相同方法,用丙酮及乙酸乙酯提取,得到丙酮提取物(AE)0.6 g和乙酸乙酯提取物(EAE)0.8 g,得率分别为3.0%和4.0%。

1.2.2地肤子总黄酮含量的测定

1)标准曲线的绘制。精确吸取芦丁对照品溶液(1 mg/mL)于10 mL量瓶中,分别加入5%亚硝酸钠0.4 mL,静置6 min,加入5%硝酸铝0.4 mL,静置6 min。再加入5%氢氧化钠试液4.0 mL,用95%乙醇稀释至刻度,摇匀,静置15 min,在510nm处测定其吸光度。以吸光度对溶液浓度进行回归分析,绘制标准曲线,求出回归方程。

2)地肤子提取物总黄酮含量测定。将芦丁标准溶液换为固定浓度提取物溶液,同上操作测定其吸光度,多次测量求平均值。根据标准曲线计算总黄酮的芦丁当量,总黄酮含量以每克干物质的芦丁当量(mg)表示,并计算提取得率。

1.2.3地肤子提取物对DPPH 自由基的清除能力测定取不同浓度地肤子提取物溶液(0.5、0.8、1.0、1.2、1.5、1.8、2.0 mg/mL)加入8 mL DPPH(0.004%)溶液中。在最大波长处(517 nm)测定其吸光度,直到平衡为止。清除率计算公式为s=(1-A样品)/A空白×100%。其中,A空白为未加药液的DPPH溶液的吸光度,A样品为加入药液的DPPH溶液的吸光度。

1.2.4还原能力测定 取上述不同浓度地肤子提取物溶液0.2 mL,加入2.5 mL PBS溶液(pH 7.4),2.5 mL KFe(CN)4(1%)。于50℃恒温20 min后,加入2.5 mL三氯乙酸溶液(10%),离心10 min。取上清液2.5 mL,加入2.5 mL蒸馏水、0.5 mL FeCl3(1%),混匀。在700 nm处测定其吸光度,以蒸馏水为参比。

2.结果与分析

2.1地肤子提取物总黄酮含量

以吸光度对溶液浓度进行回归分析,绘制标准曲线,得到回归方程y=9.677 8x+0.016 7(R=0.9992)。根据线性方程得出地肤子乙醇提取物(EE)、丙酮取物(AE)和乙酸乙酯提取物(EAE)的总黄酮含量测定结果。结果表明,3种提取物的总黄酮含量在29.5~43.5 mg/g之间,均具有较高的黄酮含量,具有作为自由基清除剂应用的潜力。

2.2地肤子提取物对DPPH自由基的清除能力

地肤子3种溶剂提取物对DPPH自由基清除能力的测定结果如图1所示。3种提取物对DPPH自由基的清除能力均随其浓度的升高而增强。对于AE,浓度为0.5和0.8 mg/mL时,清除率分别为27.8%和37.7%,浓度增加到1.2、1.5 mg/mL时,清除率增大为47.9%和57.6%。当AE浓度增加到1.8、2.0 mg/mL时,清除率增大到64.8%和70.2%。对于EAE,当浓度从0.5 mg/mL增加到2.0 mg/mL,清除率从23.9%增加到72.4%。

当提取物浓度较低时(0.5和0.8 mg/mL),AE和EE表现出相近的DPPH自由基清除能力。而在较高提取物浓度(1.8和2.0 mg/mL)时,EE表现出最强的清除能力,在1.8 mg/mL时清除率为73.6%,在最高浓度2.0 mg_/mL时清除率为85.8%。结果表明,地肤子的3种提取物对于DPPH自由基均具有很强的清除能力。

2.3不同溶剂提取物EC50值

EG50代表抗氧化剂对自由基达到半抑制时的质量浓度。EG50的数值越大,则表明抗氧化剂对自由基的清除能力越强。地肤子3种提取物EE、AE和EAE对DPPH自由基的EC值分别为1.13、1.28、1.15 mg/mL。因此,3种提取物的EGo值大小顺序为AE、EAE、EE。即,地肤子不同溶剂提取物对DPPH自由基的清除能力顺序为EE>EAE>AE。

2.4地肤子提取物的还原能力

地肤子不同溶剂提取物的还原能力如图2所示。抗氧化剂通过自身的还原作用给出电子从而达到清除自由基的效果,还原能力越强,则抗氧化性越强。测定结果以吸光度表示,吸光度越高表示还原能力越强。地肤子3种提取物的还原能力均与提取物浓度呈正相关,即提取物浓度越高,其还原能力越强。对于AE,浓度为0.5和0.8mg/mL时吸光度分别为0.29和0.33,浓度为1.0和1.2mg/mL时吸光度分别为0.46和0.53,当浓度增大为1.8和2.0mg/mL时,吸光度分别为0.73和0.89。对于EE,按浓度由低至高其吸光度分别为0.21、0.41、0.51、0.61、0.63、0.80和0.86,其还原能力随浓度增大而增强。在较高浓度时(2.0 mg/mL),3种提取物的还原能力接近,AE、EE和EAE的吸光度分别为0.89、0.86和0.88。

3.小结

本试验测定了常用中药地肤子不同溶剂提取物的总黄酮含量,并通过DPPH自由基体系和还原能力来研究其抗氧化性能。结果表明,地肤子不同溶剂提取物对DPPH自由基均显现出较强的清除能力,浓度为2.0 mg/mL时EE的清除率为85.8%。EC值分析结果表明,不同溶剂提取物对DPPH自由基的清除能力顺序为EE>EAE>AE。不同地肤子提取物均具有很强的还原能力,且还原能力随提取物浓度增大而增强。研究结果表明,地肤子不同溶剂提取物,特别是EAE,具有优良的清除自由基能力和抗氧化能力,有望作为天然抗氧化剂在工业上应用。

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