水杨酸对平菇细菌性褐斑病的防治效果试验

徐岩岩　刘晓光　李铁军　宋晓燕　武晓

摘要：通过平皿抑菌试验和活体药效试验研究不同浓度的水杨酸对由托拉斯假单胞杆菌（Pseudomonastolasii）引起的平菇（Pleurotus ostreatus）细菌性褐斑病的防治效果。结果表明，浓度为5.00 mg/mL水杨酸可有效防治平菇细菌。性褐斑病，且可以促进平菇菌丝的生长。

关键词：水杨酸；平菇（Pleurotus ostreatus）；细菌性褐斑病；托拉斯假单胞杆菌（Pseudomonas tolaasii）

中图分类号：S436.46⁺1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）09-2247-02

平菇（PLeurotus ostreatus）是中国栽培量最大的食用菌，随着栽培规模的逐渐扩大。平菇细菌性褐斑病的发病率也在逐年升高。平菇细菌性褐斑病又名为细菌性斑点病，主要为害平菇、香菇等食用菌。平菇细菌性褐斑病的病原菌为托拉斯假单胞杆菌（Pseudomonas tolaasii），该病原菌可以生长在木质索、纤维索丰富的基质中，并可直接寄生于平菇菌丝上及其子实体上，对平菇生产造成很大威胁。平菇细菌性褐斑病可能发生在平菇子实体生长的任何时期。在高温高湿的条件下，子实体腐烂速度较快，散发出一种难闻的气味。这种病菌不仅为害生长着的平菇。采摘后的平菇也易感染这种病菌，影响平菇的产量和质量。

水杨酸（Salicvlic acid）化学名称为邻羟基苯甲酸，属于简单的酚类化合物，在植物体内合成。对植物生长代谢具有广泛的调控作用，是一种高效、廉价、无毒的植物生长调节剂。由于水杨酸在植物体内合成，含量很低。并且可以在韧皮部运输。故把水杨酸看作是一种新的植物内源激素。大量研究表明。水杨酸可作用于植物的多种生理作用，能够显著提高高等植物的抗性。

目前针对平菇细菌性褐斑病常用的一些物理和药物防治方法治标不治本，不仅耗费人力和物力，常用的化学试剂农用链霉素对人体还有一定的危害。且达不到预期目的和效果。前人研究表明，水杨酸对平菇菌丝的生长有一定的影响，本研究旨在通过测定不同浓度的水杨酸对托拉斯假单胞杆菌的抑菌作用及对平菇菌丝生长的影响，为食用菌细菌性褐斑病的安全、高效防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试菌种 供试病原菌托拉斯假单胞杆菌强致病菌从发病平菇子实体上分离获得，平菇品种为新育冬丰，由平泉县希才应用菌科技发展有限公司提供。

1.1.2 培养基 LB培养基：胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl10g、去离子水1000mL、pH7.0、琼脂16g。用于培养细菌。LB液体培养基：去除琼脂，其余同LB培养基，用于培养细菌。PDA培养基：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂16g、去离子水1000mL、pH7.0，用于培养平菇菌丝。

1.1.3 试剂 水杨酸为天津市北辰方正试剂厂产品，硫酸链霉素可溶性粉剂为江西博莱大药厂产品。

1.2 方法

1.2.1 托拉斯假单胞杆菌菌悬液的制备 挑取托拉斯假单胞杆菌单个菌落，接种在LB液体培养基中，30℃、170r/min振荡培养24h，无菌水配制成3×10⁸cfu/mL的托拉斯假单胞杆菌菌悬液，备用。

1.2.2 平板扩散法抑菌试验 取100mLLB培养基微波炉融化后，待温度降至65℃，倒平板，每皿25mL，冷却。将100μL的3×10⁸cfu/mL的托拉斯假单胞杆菌菌悬液加到平板上，涂布均匀，晾干，打孔8mm×8mm，每皿1孔，每孔加入100μL药剂，30℃黑暗培养4d，每隔24h调查1次，测定抑菌圈直径。设置无菌水对照和0.5mg/mL硫酸链霉素对照处理，每个处理3个重复。

1.2.3 最佳抑菌浓度筛选 将水杨酸利用无菌水分别稀释2、4、6倍，然后利用平板扩散法筛选出抑菌剂的最佳抑菌浓度。

1.2.4 抑菌剂对平菇菌丝生长的影响 采用平板抑菌法检测抑菌剂最大浓度对平菇菌丝生长的影响，将平菇菌丝打成8mm×8mm菌饼。备用。取100mLPDA培养基微波炉融化后，待温度降至65℃，倒平板，每皿25mL，冷却。取100μL抑菌剂均匀涂布在平板上，晾干，将菌饼放置在平板中央，25℃培养8d，测定菌丝直径，设置无菌水和链霉素药剂对照处理。每个处理3个重复。

1.2.5 活体药效试验 在平皿抑菌试验中对托拉斯假单胞杆菌抑制效果较强而对平菇菌丝生长影响较小的药剂浓度进行药效试验。分别在病原菌接种后2h和4h喷施2次水杨酸。另设只接病原菌的对照、不接病原菌的空白对照以及只喷药剂对照，每处理3个重复。采用微量喷雾器将配制好的药液均匀喷施在子实体表面，每袋子实体喷施2mL。

病原菌接种采用灭菌的刷子蘸取1mL的菌悬液（3×10⁸cfu/mL）。均匀涂抹在生长一致的出菇2d的平菇子实体菌盖上（直径为1-2cm）。

调查方法：接病原菌24h后每隔12h进行病级调查，并进行病情指数计算。参考Rodriguez等的分级标准调查病情指数及防治效果。

2 结果与分析

2.1 水杨酸对托拉斯假单胞杆菌的抑菌活性

水杨酸对托拉斯假单胞杆菌有一定的抑菌活性，但相对于硫酸链霉素抑菌活性较弱，浓度为5.00、2.50、1.25mg/mL水杨酸均对托拉斯假单胞杆菌具有一定的抑制作用，其中浓度为5.00mg/mL的水杨酸的抑菌作用较其他浓度显著（P<0.05）。

2.2 水杨酸对平菇菌丝生长的促进作用

不同浓度的水杨酸对平菇菌丝的生长具有一定的促进作用，其中浓度为5mg/mL的水杨酸对平菇菌丝生长促进作用最为显著（P<0.05）。浓度为0.83mg/mL的水杨酸对平菇菌丝的生长几乎没有促进作用，即表现为随着水杨酸浓度的增加其促进平菇菌丝生长的效果越强。

2.3 活体药效试验

水杨酸5mg/mL大田防治效果与硫酸链霉素防治效果相当，较离体药效试验效果强。在仅施用药剂的处理中未发现药害现象。

3 小结与讨论

目前，对于平菇细菌性褐斑病的防治主要是使用化学试剂，但药物残留比较严重，对平菇和人体健康均不利。对于平菇细菌性褐斑病的防治应采取对平菇和人体较安全的方法。水杨酸是植物体内产生的一类生长调节剂，与农用链霉素等化学药物相比。对人体和平菇相对更安全。水杨酸具有廉价、高效的特点，应用水杨酸防治平菇细菌性褐斑病，可以减少菇农的生产成本，提高经济效益。

本试验结果表明，浓度为5.00mg/mL的水杨酸对托拉斯假单胞杆菌的抑菌活性最佳，且可以促进平菇菌丝的生长。建议生产上用浓度为5.00mg/mL的水杨酸对平菇细菌性褐斑病进行防治。此外，水杨酸可诱导植物提高对非生物逆境的防御能力，是否具有提高平菇菌丝体抗逆性、促进子实体发育等还需要进一步研究。