猪感染牛病毒性腹泻病毒的诊断

潘承凤

牛病毒性腹泻病毒（bovineviraldiarrheavirus，BVDV）与猪瘟病毒（classicalswinefevervirus，CSFV）同属于黄病毒科瘟病毒属，二者在基因结构和抗原性上均有较高的同源性，存在交叉反应。CSFV和BVDV均可感染猪，猪感染BVDV后可导致母猪繁殖障碍以及仔猪腹泻、消瘦、败血症等类似慢性猪瘟的临床特征。2015年10月广西壮族自治区某猪场仔猪陆续出现消瘦、贫血、生长迟缓以及心外膜、肾、淋巴结有出血点等类似猪瘟的临床特征，猪瘟疫苗紧急免疫接种未能有效控制该疫病。为确定该疫病发生的致病原，本研究对其进行了BVDV感染的临床和实验室诊断，现介绍如下。

1.材料与方法

1.1临床诊断

询问并调查该猪场的发病情况，观察临床症状和病理变化。

1.2实验室诊断

1.2.1病料样品的采集与处理采集病死猪的脾脏、淋巴结等组织病料，将其与5倍体积灭菌生理盐水充分混合、碾磨、冻融后，12000r/min离心10min，吸取上清液，即得待检病料样品。

1.2.2引物设计与合成参照李晶梅等…的方法合成BVDV、CSFV的鉴别检测引物。

1.2.3病毒基因组RNA的提取按照病毒基因组RNA提取试剂盒的操作方法提取病料样品的基因组RNA。

1.2.4RT-PCR扩增与鉴定以提取的基因组RNA为模板，参照李晶梅等的方法进行RT-PCR扩增。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测后，回收纯化，连接至pMD18-T载体，构建重组质粒，送宝生物工程（大连）有限公司测序，将测序结果与GenBank中登录的序列进行同源性比较分析。

2.结果与分析

2.1临床诊断结果

2.1.1发病情况 仔猪陆续发病，虽有死亡但死亡率较低，用青霉素、链霉素等药物治疗无效，用猪瘟弱毒疫苗紧急免疫接种无效。

2.1.2临床症状 仔猪厌食、精神沉郁、被毛粗乱、消瘦、腹泻、贫血、生长迟缓，有个别的震颤、站立不稳。

2.1.3病理变化 剖检病死仔猪可见心外膜、肾脏及全身淋巴结均有大量出血点，脾脏边缘有锯齿状梗死灶，胃、结肠、盲肠黏膜溃疡，具有纽扣状溃疡灶。

2.2实验室诊断结果

2.2.1RT-PCR检测结果 病料样品经CSFV和BVDVRT-PCR鉴别检测方法扩增后，在153bp处具有特异性片段，其大小与李晶梅等的报道相符，表明BVDV阳性，CSFV阴性。

2.2.2核酸序列鉴定结果T-PCR阳性扩增产物的序列鉴定结果显示，与GenBank中登录号为AJ585412的BVDV毒株序列同源性达100.0%。

2.3综合诊断结果

经临床诊断和实验室诊断综合判定该猪场此次疫病由BVDV感染所致。

3.讨论

近几年，我国猪群中BVDV的发生与流行日益增多，戴爱玲等对闽西地区762份猪血清样品的检测阳性率为28.6%，徐磊等对福建省458份临床样品的检测阳性率为10.04%，本病例再次表明广西壮族自治区某猪场中存在BVDV的感染，可见BVDV在猪群中的流行已十分严重。且本研究中发现猪瘟疫苗免疫后，CSFV的核酸检测仍为阴性，表明BVDV可在一定程度上影响CSFV抗体水平，干扰猪瘟疫苗的免疫效果，造成猪瘟疫苗免疫失败。故应加强对猪感染BVDV的重视，加强猪群中BVDV的诊断与监测，及时发现和淘汰BVDV感染猪，保障养猪业稳定发展。

（编辑：狄慧）