庆城县秋季牛口蹄疫免疫抗体水平检测与分析

李静静　高技科

摘 要：为准确掌握2015年庆城县秋季牛口蹄疫防疫工作成效，客观评价防疫质量，确保全县养牛业健康、稳定、持续发展，在庆城县17个乡镇随机采集部分牛血清，用间接血凝方法检测牛口蹄疫免疫抗体。结果表明，庆城县秋季牛口蹄疫整体免疫水平较好，但各乡镇散养牛免疫抗体水平不均衡，免疫效果差距明显，仍存在发生流行口蹄疫疫情的隐患。通过分析个别乡镇免疫质量不佳的原因，对提高牛口蹄疫免疫水平措施进行了探讨，以期能为有效提高牛口蹄疫免疫抗体水平提供依据。

关键词：牛口蹄疫；间接血凝试验；免疫抗体水平；庆城县

中图分类号 S855.3 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2016）07-109-03

Abstract：In order to accurately grasp the effectiveness of the autumn bovine foot-and-mouth disease prevention，evaluate the quality of immunization，and ensure the healthy，stable and sustainable development of cattle industry，some bovine serum were collected randomly in 17 townships of Qingcheng County，with indirect hemagglutination method for detecting bovine foot-and-mouth disease immune antibody.The results showed that the whole immune level of the cattle foot-and-mouth disease was better，but scattered cattle antibody level was not balanced，the gap between the immune effect was obvious，there still existed the epidemic of foot-and-mouth disease risks.By analyzing the causes of the poor quality of immunity in individual villages and towns，the measures to improve the level of immune bovine FMDV were discussed in order to provide some reference for the research of improve immunity the antibody level of foot-and-mouth disease in cattle.

Key words：Bovine foot-and-mouth disease；Indirect hemagglutination test；Immune antibody level；Qingcheng County

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的急性、热性、高度接触性传染性疫病，其易感动物多达70多种，主要以牛、猪、羊等偶蹄动物为主，发病率和死亡率均非常高，经济损失巨大，是目前危害养殖业健康发展的主要疫病之一[1]。近年来通过贯彻实施预防为主的防制策略，牛口蹄疫大面积流行和暴发流行已经得到了有效控制。庆城县以春秋集中免疫和适时补针相结合，规模场按程序免疫等方法对健康成年牛每头2mL肌注进行免疫接种，达到预防为主，控制口蹄疫疫情发生的目的。接种疫苗为口蹄疫O型、亚洲I型二价灭活疫苗（生产厂家为中农威特生物科技股份有限公司，生产批号为N150504J，2～8℃保存）。为掌握基层秋季集中免疫效果，庆城县预防控制中心于2015年10月在庆城县17个乡镇随机采集部分牛血清，用间接血凝方法检测牛口蹄疫抗体，旨在为今后防疫决策提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料来源 牛血清335份（其中散养户170份，养殖场165份），随机采集于庆城县17个乡镇的农村散养户和3个规模养殖场（其均用口蹄疫O型、亚洲I型二价灭活疫苗免疫。血清无胶冻、无溶血、血清经离心吸取上层血清液备用。

1.1.2 诊断液 口蹄疫O型间接抗体检测试剂盒（口蹄疫O型血凝抗原、口蹄疫O型阳性对照血清、口蹄疫O型阴性对照血清、稀释液、封板膜），购自于中国农业科学院兰州兽医研究所。生产批号：20150924201。

1.1.3 试验器材 96孔110°V型血凝板、单道移液器及枪头、8道移液器及枪头、离心机、微量振荡器等。

1.2 方法 根据《口蹄疫诊断技术》（GB/T18935—2003），严格按照说明书操作，室温静置观察结果。

1.2.1 加稀释液 在96孔110V型血凝板上1～7排的1～10孔、第8排的1～4孔和5～7孔，加稀释液50μL/孔。

1.2.2 稀释待检血清 取经56℃水浴灭活30min灭活的待检血清样品50μL，分别加入反应板1～6排的第一孔中，与稀释液混匀后，吸取50μL，加于第2孔中，以此做2倍系列稀释至第10孔，第10孔混匀后取出50μL弃去。

1.2.3 稀释阳性对照血清 在血凝板的第7排第1孔加阳性血清50μL，2倍系列稀释至第10孔，混匀后从该孔取出50μL丢弃。此时被检血清和阳性血清的稀释倍数依次为1∶2～1∶1 024。

1.2.4 稀释阴性对照血清 在血凝板的第8排第1孔加阴性血清50μL，对倍稀释至第4孔，混匀后从该孔取出50μL丢弃。此时阴性血清的稀释倍数依次为1∶2、1∶4、1∶8、1∶16，第5～7孔为稀释液对照，每孔加入50μL稀释液。

1.2.5 加血凝抗原 血清稀释孔和对照孔加血凝抗原（充分摇匀，瓶底应无血球沉淀）25μL/孔。将反应板置微型振荡器上震荡2～3min，直至血球分布均匀。封板膜封板，室温下静置2～3h，在对照孔合格的前提下，再观察待检血清各孔，记录各孔凝集情况。

1.2.6 判定标准 将血凝板放在白纸上，阳性血清抗体效价≥1∶256、阴性血清≤1∶16、稀释液对照孔无自凝现象时，试验成立。观察待检血清各孔，以呈现“++”血凝反应的血清最高稀释度作为该份血清的间接血凝抗体效价。接种牛口蹄疫免疫效价≥1∶256为免疫合格。

2 结果与分析

2.1 各乡镇牛口蹄疫免疫抗体水平不均衡，免疫效果差距明显 由表1可以看出，庆城县整体牛口蹄疫免疫抗体水平较好，达到77.65%，高于农业部规定的70%标准；驿马、赤城、桐川和南庄4个乡镇免疫抗体合格率达到100%，马岭、玄马、熊家庙3个乡镇免疫合格率达到90%以上，但太白梁、卅铺、葛崾岘、蔡家庙4个乡镇抗体合格率未达到国家规定标准，而庆城镇牛口蹄疫免疫水平只有30%的合格率。由此可以看出，各乡镇之间牛口蹄疫抗体免疫水平不均衡，免疫效果差距明显，抗体水平低的乡镇仍然存在发生流行牛口蹄疫疫情的风险。

2.2 规模养殖场存在安全隐患 从表2可以看出，2个养殖场免疫合格率达到国家规定标准以上，丽园和庆贤养殖场达到100%和80%以上，而越达合格率仅仅只有40%，表明部分养殖场仍然存在发牛口蹄疫疫情的隐患。

2.3 庆城县牛口蹄疫检测抗体免疫效价分析 从表3可以看出，牛口蹄疫抗体效价≥1∶256的有176份，占82.39%，说明秋季集中牛口蹄疫免疫效果较好；抗体效价≤1∶64的有36份，占10.75%，1∶128的有23份，占6.87%。说明部分乡镇免疫效果依然很差，需要进一步采取补免等措施，提高免疫抗体水平，确保免疫效果。

3 讨论与建议

3.1 讨论 通过本次调查研究表明，庆城县大部分乡镇抗体免疫效果均较好，但仍存在个别乡镇免疫效果较差的情况，其免疫抗体效果与质量需进一步加强与提高。究其原因：（1）疫苗因素：疫苗运输、贮藏等不符合要求，造成疫苗失效，从而降低免疫质量；（2）接种人员因素：集中免疫期间，防疫员少、养殖分散、工作任务大，免疫操作不规范，例如疫苗接种剂量、“打飞针”、注射部位不正确、注射部位未消毒等因素影响免疫质量；（3）免疫程序不合理，未制定正确免疫程序，不进行二次加强免疫等导致免疫效果差；（4）动物因素：免疫时动物本身不健康，有病或免疫力低下导致免疫不成功。

3.2 建议

3.2.1 坚持集中免疫与适时补针相结合，切实提高免疫密度 庆城县牛养殖方式目前仍以农户散养为主，必须提高散养牛群口蹄疫免疫密度与质量，才能有效地控制该疫病的发生与流行，尤其是新补栏、免疫不合格和漏免牛，一定要落实村级防疫员“适时补针”政策。狠抓春秋两防，及时掌握集中免疫进展情况，各乡镇要认真填写《动物免疫进度表》，每周星期四向市兽医局上报一次免疫进展情况，直至春秋防疫工作结束为止。同时，做到常年免疫、定期补针，必要时二次加强免疫，使免疫真正达到“村不漏户，户不漏畜，畜不漏针”。

3.2.2 全面规范免疫档案管理，积极推行疫病可追溯制度 要认真推行动物标识制度，建立健全免疫档案，严格按照《庆阳市重大动物疫病免疫档案》的规范要求，认真填写免疫信息，切实做好免疫档案的规范管理。作好养殖场户和养殖小区的养殖档案管理，指导畜禽养殖场户全面、准确地记录养殖信息，努力实现“全程监管、有据可查”，从源头上保证牛及其产品质量安全。

3.2.3 加强技术培训，加大投入力度 各乡镇在春季集中免疫开始前，必须对村级防疫员进行岗前培训，采取集中培训和现场演示相结合的方法，就各类疫苗的稀释比例、注射剂量、注射部位、保存要求、耳标佩带、档案填写、注意事项等方面进行详细的培训和演示，直到防疫员全部熟练掌握为止，以保证集中免疫实现高密度、高质量。同时，加大对基层防疫工作的投入，增加财政预算，落实经费，完善乡镇、村级防疫冷链设备，使疫苗贮藏与运输都要按规定的要求进行，保证疫苗质量。

3.2.4 加强动物疫情监测和报告工作，及时掌握疫情动态 坚持日常监测与应急监测相结合，全面监测和定点监测相结合的方法，进一步加强对口蹄疫的监测工作，加大对规模养殖户、养殖小区、活畜交易市场、定点屠宰场等重点部位和区域的监测频次，客观评价免疫效果，及时掌握牛流行动态，及时补免和消除疫情隐患，并指导养殖户制定切实有效的免疫程序[2]。

3.2.5 加强动物检疫工作，严格监督执法检查 落实基层检疫人员开展散养与规模场的产地检疫工作，从源头上遏制未经免疫、免疫不合格的牛流入市场。对没有执行国家重大动物强制免疫政策或免疫抗体水平检测不达标牛，要严格按照“不出证、不容许流通、不容许屠宰”的原则严把检疫关口，促使牛养殖户全面落实免疫，达到“以检促防”的目的[3]。

参考文献

[1]董志强，张志，李晓成，等.口蹄疫检测技术研究进展[J].中国动物检疫杂志，2007，24（3）.

[2]王辉，刘伟，贾松涛，等.对动物免疫抗体检测工作的几点建议[J].中国动物检疫杂志，2014，31（8），63-64.

[3]李常挺，牛金涛，彭群明，等.2009年隆安县春防猪瘟抗体水平监测[J].广西农业科学，2010，41（1），74-76.

（责编：张宏民）