miR-200b在胃癌中的表达及其临床意义

易礼智邓学杰王琴钟显飞

乐山市人民医院消化内科 四川乐山 614000

miR-200b在胃癌中的表达及其临床意义

易礼智1邓学杰1王琴1钟显飞1

乐山市人民医院消化内科 四川乐山 614000

目的 检测miR-200b在胃癌(GC)细胞和组织中的表达，探讨miR-200b的异常表达与胃癌发生、发展的关系及其临床意义。方法 实时定量PCR法检测miR-200b在胃癌细胞株及活检组织及相应癌旁正常组织中mRNA表达水平的差异，并分析其与胃癌的临床病理因素的关系。结果 在胃癌组织中miR-200b mRNA表达水平显著低于正常胃黏膜组织；此外，miR-200b的表达水平与胃癌分化程度、浸润深度以及远处转移呈正相关性(P＜0.05)。结论 miR-200b在胃癌中低表达，其表达水平与胃癌进展密切相关，可作为预测胃癌进展和转移的分子标记物之一。

胃癌；miR-200b;表达;分子标记

胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，全世界排名第四位[1,2]。胃癌的发生是一个复杂的多步骤的过程，包括上皮细胞的异常增生，凋亡自然程序的紊乱，异常分化等 GC[3,4]。近些年来，随着临床早期诊断和治疗方法的改进，早期胃癌患者的生存率要明显高于晚期胃癌患者。然而，胃癌的整体生存率仍然很低。传统的治疗方法已经不能准确预测胃癌患者的预后，因此，发现和研究有效的、具有潜在价值的新的标志物对于胃癌的预后评估具有重要意义。

微小RNA（microRNA 或者miRs）是一种小的非编码RNA，它能在转录后水平上调节基因表达[5，6]。microRNA在肿瘤的发生发展中具有重要的作用[7]。研究显示，它通过靶定癌基因或肿瘤抑癌基因，参与了肿瘤的凋亡，增殖，分化，发挥着类似肿瘤抑制因子或癌基因的作用[8-10]。已经有文献报道显示miR-200b参与一些肿瘤的增殖、凋亡和周期，如乳腺癌[11]，肝癌[12]，卵巢癌[13]，宫颈癌[14]，肺癌[15]等，但在胃癌中尚未有相关的研究报道。因此这篇文章主要研究miR-200b在胃癌中的表达情况。

1 材料与方法

1.1 材料 收集乐山市人民医院手术切除的58对新鲜的胃癌组织和癌旁正常肠黏膜组织置于液氮中保存备用，其中男性33例，女性25例；年龄23～67岁，平均年龄57.5岁。反转录试剂盒(Takara公司)，Trizol、SYBR GREEN MIX(Toyobo公司)，

1.2 方法 实时定量PCR采用Trizol裂解相应的组织和细胞，按常规方法提取RNA，测其浓度，按照miRNA反转录试剂盒说明书反转录成cDNA后，采用特异的引物扩增，进行实时定量PCR检测。U6基因作为参照基因，反应条件50%2 min，95℃10 min预变性，95℃15 s，60cc 1 min，72℃34 S，30个循环，反应结束后得ct值。根据公式26[(ctof miR-200b)一(ct of GAPDH)]计算目的基因相对含量，实验重复3次。miR在胃癌组织中N/T值＞2为高表达，0-2为低表达。

1.3 统计学分析 采用SPSS20.0进行数据分析，miR-200b的mRNA表达水平和临床病理因素的相关性采用Wilcoxon Signed Ranks检验分析和Spearman相关分析。

2 结果

2.1.在细胞及胃癌组织中的检测 miR-200b在GSE(永生化胃正常上皮细胞株)中含量最高，在 6株胃癌细胞株中，miR-200b在转移能力较低的AGS中水平最高，在转移能力较强的SGC中含量最低（图1）。miR-200b在58例配对组织中，mRNA水平上，CRC组织中miR-200b的表达水平要低于正常胃黏膜组织中的表达量，P值为0.0012，具有统计学差异。其中有43例CRC组织中miR-200b蛋白的表达显著低于正常黏膜组织，15例高于正常黏膜组织（图2）。

图1 miR-200b在7株胃癌细胞株中的表达

图2 miR-200b在58例胃癌配对组织中的表达

2.2 胃癌组织中miR-200b mRNA含量与临床病理参数的关系 癌组织中miR-200b含量高低与胃癌分化程度、是否有远处转移、淋巴结转移相关，（均P＜0.05），而与肿瘤患者的性别、年龄、浸润深度无关（P＞0.05）（表 1）。结果显示，癌组织中miR-200b含量越低，肿瘤分化程度越低，有远处转移和淋巴节转移的患者癌组织中miR-200b含量要低于无远处转移患者。

表1：miR-200b在癌组织中的含量与临床病理特征的关系

3 讨论

本文我们主要探讨了miR-200b在胃癌中的作用。miR-200b，作为微小非编码RNA的一种，和其他大多数的miRNAs一样，在疾病的发生发展中具有重要的作用。它的高表达能促进瘢痕的增生[16]、能调节 EB病毒的潜伏及溶解复制[17]。而在肿瘤的演进过程中miR-200b也发挥着重要的作用[7]。目前为止，仅有几篇文章报道 miR-200b在肿瘤中的作用[11-15]，在胃癌中尚未报道。在这篇文章中，我们首先检测了miRNA在正常的胃上皮细胞株GSE和6株胃癌细胞株中的含量。检测发现miR-200b在正常的胃上皮细胞中含量最高，在胃癌细胞株中，在转移能力较强的细胞中含量相对较低，转移能力较低的细胞中含量较高。这一结果初步证明，miR-200b在胃癌中的含量高低与转移相关。随后，我们在58例配对的胃癌新鲜组织中检测了miR-200b的含量。我们发现，正常胃粘膜上皮中miR-200b的含量明显高于胃癌组织中的含量，P值小于0.001，且miR-200b在癌组织中的含量的高低与胃癌的分化程度、淋巴结转移和远处转移相关。

以上结果显示，miR-200b与胃癌的转移是密切相关的。但其参与胃癌转移的作用机制尚不清楚。众所周知，microRNA能通过靶定癌基因或肿瘤抑癌基因，调节其转录后的蛋白水平，发挥着类似肿瘤抑制因子或癌基因的作用，参与肿瘤的凋亡、增殖、分化和转移[8-10]。有研究报道显示，miR-200b能够靶向作用于ZEB2抑制胶质瘤的生长和转移[18]。它还能够通过靶向作用于FSCN1抑制非小细胞肺癌的侵袭和转移[14]。另外，miR-200b还能靶向作用于 RhoE抑制宫颈癌细胞的上皮向间质转化和转移[15].除此之外，miR-200b还能通过抑制其启动子或DNA的甲基化来抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭、转移[19,20]。这些研究机制在我们下一步研究阐述miR-200b在胃癌中的作用机制中有很重要的参考价值。

综上所述，本实验结果表明，miR-200b在胃癌肿瘤组织中低表达，其表达水平在肿瘤分化程度、淋巴结转移和远处转移的病例中有差异，且呈负相关关系，故其可能参与结直肠癌的发生、进展和转移。本研究为miR-200b在胃癌肿瘤转移分子标证物提供了理论依据，也为结胃癌的治疗提供一个新的思路。

[1]Jemal A, Bray F， Center MM, Ferlay J, Ward E, et al.Global cancer statistics.CA Cancer J Clin 2011; 61: 69–90

[2]Catalano V, Labianca R, Beretta GD, et al.Gastric cancer.Crit Rev Oncol Hematol 2009; 71: 127-164.

[3]hand metastasis of glioma cells via targeting ZEB2.Int J Oncol 2016;48:541-550.

Expression of miR-200b and its clinical pathologic significance in gastric cancer

Yi Lizhi1Deng Xuejie1Wang Qin1Zhong Xianfei1
Department of gastroenterology，People’s hospital of Leshan City, 614000,Sichuan Province，China; Corresponding author：Zhong Xianfei (E—mail：651218437@qq.com)

Purpose To investigate the expression and clinicopathologic significance of miR-200b in gastric cancer.MethodsThe mRNA expression level of miR-200b in GC cell lines and biopsies and their matched adjacent tissues were detected by real time RT—PCR.ResultsmiR-200b mRNA expression levels was significantly lower in gastric cancer biopsies than that in their matched adjacent tissues.Additionally，low expression of miR-200b was significantly associated with GC differentiation, the depth of serosal invasion and distant metastasis(P＜0.05).ConclusionmiR-200b is lowly expressed in gastric cancer.low expression of miR-200b is closely related to progression of GC.miR-200b may serve as a novel molecular marker for prediction of gastric cancer progression and metastasis.

gastric cancer；miR-200b；Expression；Biomarker

R735.2

A

1672-5018（2016）11-006-02