胃窦黏膜肠上皮化生腺体中LAPTM4B蛋白的表达及其意义

马广贞　滕玲玲　刘鲁英

【摘 要】本研究通过免疫组织化学染色方法检测了80例胃窦黏膜中LAPTM4B蛋白表达情况，并结合形态学观察判断肠上皮化生的类型及程度。80例标本中28例检测到LAPTM4B蛋白在肠上皮化生腺体表达（35%），52例未检测到LAPTM4B蛋白在肠上皮化生腺体表达（65%）。LAPTM4B蛋白在不同类型、不同程度肠上皮化生中的表达有显著性差异（P<0.01）。LAPTM4B基因的异常表达可能在胃癌发生的早期阶段发挥重要作用。

【关键词】胃黏膜；肠上皮化生；LAPTM4B

【Abstract】We detected the LAPTM4B protein expression by immunohistochemical staining in 80 cases of gastric antrum mucosa which were diagnosed as chronic gastritis with intestinal metaplasia. Combining with morphological observation， we determined the type and degree of intestinal metaplasia. We detected LAPTM4B protein expression in intestinal metaplasia glands in 28 cases of specimens （35%）. The expression of LAPTM4B protein in different types， different degrees of intestinal metaplasia had significant difference（P<0.01）. The increased expression of LAPTM4B indicated that LAPTM4B play an important role in the early stages of gastric carcinogenesis.

【Key words】Gastric mucosa； Intestinal metaplasia； LAPTM4B

肠上皮化生是胃黏膜的重要病理改变，多发生在慢性萎缩性胃炎基础上，有研究显示，胃黏膜发生肠型分化与细胞表达同源异形盒基因CDX2 有关。LAPTM4B基因是近年来发现的与肿瘤发生发展关系密切的基因[1]。本研究通过检测胃窦黏膜肠上皮化生的类型、程度以及LAPTM4B蛋白表达情况及其相互关系，探讨胃黏膜肠上皮化生的发生机制。

1 材料与方法

1.1 病例资料

收集聊城市第二人民医院2010年1月至2013年6月存档的胃镜活检标本80例。所有标本均自胃窦部取材，经病理诊断为慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生，其中男性51例，女性29例，中位年龄59 岁（38～79岁）。全部活检标本经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，4μm厚度切片备用。

1.2 方法

免疫组织化学染色采用PowerVision二步法。4μm厚的石蜡切片经二甲苯脱蜡、梯度酒精水化，3%双氧水阻断内源性过氧化物酶（室温孵育10分钟），组织抗原修复后，加一抗4℃过夜。滴加辣根过氧化物酶标记的通用型二抗（PV-6000，Dako），DAB显色，苏木素复染，封片后显微镜下观察。

1.3 试剂

LAPTM4B多克隆抗体（1：50稀释），由北京大学医学部周柔丽教授惠赠，sulfo-Lewisa单克隆抗体（克隆号F2，1：50稀释）购自Cell Sciences公司， 免疫组织化学染色试剂盒购自Dako公司。

1.4 结果判定

LAPTM4B免疫组织化学染色定位于细胞质或细胞膜，依据染色强度和染色面积共同评分。（1）根据染色的范围分为3级，0分：不显色或<10%，1分：11～50%，2分：>50%；（2）根据染色强度分为3级，无染色0分，淡黄色1分，棕黄色2分，然后把染色范围和染色强度分值相加，得分为0或1者为阴性，得分2以上者为阳性。sulfo-Lewisa 免疫组织化学染色定位于胞质，在胞质中出现棕黄色颗粒为染色阳性。

1.5 统计学分析

应用SPSS 16. 0统计软件进行数据分析。样本率之间比较采用χ2检验，P<0.05 认为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 胃窦黏膜肠上皮化生的类型

按照sulfo-Lewisa染色结果与组织结构特点对肠上皮化生进行分类：Ⅰ型肠化：肠化腺体不表达sulfo-Lewisa；Ⅱ型肠化：仅深部肠化的腺体表达sulfo-Lewisa；Ⅲ型肠化：sulfo-Lewisa在深部及表面的肠化腺体同时表达[2]。本研究中，80 例标本根据染色结果分为I 型肠化16 例（20.0%），Ⅱ型肠化37 例（46.2%），Ⅲ型肠化27 例（33.8%）。

2.2 胃窦粘膜肠上皮化生的程度

胃窦粘膜肠上皮化生的严重程度根据以下标准判定。选择3～5个视野（或整个视野，×400），轻度肠化：胃黏膜发生肠化区域占腺体和表面上皮总面积的1/3以下；中度肠化：1/3～2/3之间；重度肠化：2/3以上至全层[3]。80例胃镜标本包括轻度肠化10 例（12.5%）、中度肠化44例（55%）和重度肠化26例（32.5%）。

2.3 胃窦粘膜LAPTM4B蛋白表达情况

80例标本中28例检测到LAPTM4B蛋白在肠上皮化生腺体表达（35%），52例未检测到LAPTM4B蛋白在肠上皮化生腺体表达（65%）。

2.4 胃窦粘膜LAPTM4B蛋白表达与肠上皮化生严重程度、类型之间的关系

LAPTM4B蛋白在不同类型、不同程度肠上皮化生中的表达有显著性差异，其中LAPTM4B蛋白在发生Ⅲ型肠化的腺体中表达显著高于I型、Ⅱ型肠上皮化生，其差异具有统计学意义（P=0.018）；随着肠上皮化生程度的加重，LAPTM4B蛋白表达也显著增加（P=0.045）（表1）。

表1 胃窦粘膜LAPTM4B表达与肠上皮化生的类型、程度的关系

3 讨论

Correa等提出的肠型胃癌形成机制己被大家普遍接受，即正常胃黏膜经过慢性萎缩性胃炎及肠上皮化生，逐步进展到异型增生，最终导致肠型胃癌发生。研究发现多种基因在胃癌前病变的早期阶段已经发挥作用，但是胃癌发生发展的机制尚未明确。LAPTM4B基因是最近发现的与多种肿瘤发生、发展密切相关的癌基因。在大多数的肿瘤中检测到LAPTM4B蛋白表达升高，包括肝癌[4]、胃癌、结肠癌[5]及乳腺癌[6]等。本研究通过免疫组化染色，发现在肠上皮化生腺体中35%检测到LAPTM4B蛋白表达（28/80），LAPTM4B蛋白在不同类型、不同程度肠上皮化生中的表达有显著性差异（P<0.05）。LAPTM4B蛋白在发生Ⅲ型肠化的腺体中表达显著高于I型、Ⅱ型肠上皮化生，其差异具有统计学意义（P=0.018）；随着肠上皮化生程度的加重，LAPTM4B蛋白表达也显著增加（P=0.045）。本研究结果提示LAPTM4B蛋白表达升高可能在胃癌发生过程中较早发挥作用，但是本研究仅从蛋白表达的水平反映了LAPTM4B与胃癌发生的关系，其确切作用机制尚不十分明确，不同类型肠化黏膜中LAPTM4B表达变化的意义有待于进一步研究。

【参考文献】

[1]刘军建，张杰，周柔丽，等.用荧光差异显示法分离新的肝细胞癌相关基因[J].北京医科大学学报，2000，32（5）：411-414.

[2]Bodger K， Campbell F， Rhodes J M. Detection of sulfated glycoproteins in intestinal metaplasia： a comparison of traditional mucin staining with immunohistochemistry for the sulfo-Lewis（a） carbohydrate epitope[J]. J Clin Pathol， 2003， 56（9）：703-8.

[3]Rugge M， Correa P， Dixon M F， et al. Gastric dysplasia： the padova international classification[J]. Am J Surg Pathol， 2000， 24（2）：167-76.

[4]Yang H， Zhai G， Ji X， et al. LAPTM4B allele*2 is a marker of poor prognosis following hepatic tumor resection for hepatocellular carcinoma[J]. PLoS One. 2012；7（4）：e34984.

[5]Kang Y， Yin M， Jiang W， et al. Overexpression of LAPTM4B-35 is associated with poor prognosis in colorectal carcinoma[J]. Am J Surg. 2012；204（5）：677-83.

[6]Li X， Kong X， Chen X， et al. LAPTM4B allele*2 is associated with breast cancer susceptibility and prognosis[J]. PLoS One. 2012；7（9）：e44916.

[责任编辑：汤静]