试论HPLC法测定阿苯片中苯巴比妥含量

朱岩

哈药集团三精儿童大药厂 150000

试论HPLC法测定阿苯片中苯巴比妥含量

朱岩

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目的：建立一种使用高效液相色谱法进行阿苯片中苯巴比妥的含量的测定方法。方法：使用液相色谱柱；流动相为醋酸盐缓冲液-甲醇，醋酸盐缓冲液中的PH值是4.5，甲醇的比重是60:40，检测的波长是254mm，在流速上也是1.0ml/min。结果：苯巴比妥在浓度范围内与峰面积呈现出良好的关系，r=0.9984，苯巴比妥的浓度范围是0.08—0.48mg/ml，精确度是0.32%，平均的回收率是98.63%。结论：这种方法在检测的过程中，方便、快捷，在结果上也比较准确。

HPLC法，高效液相色谱法；苯巴比妥，含量测定

阿苯片中的苯巴比妥含量测定是非常重要的，这种测定方法主要使用的是滴定法，在本次研究的过程中，使用的含量测定方法是高效液相色谱法，在测定的过程中，一定要了解测定的细节，具体的了解高效液相色谱法，这样在阿苯片中苯巴比妥含量测定的过程中，才能够保证含量测定的准确性和便捷性，对测试结果也有着严格的要求，现在这种测定方式已经取得了满意的效果。除此之外，还要在一起的测定上进行具体的分析，这样对相关的试验有着重要的作用。

一、仪器与试药

1）阿苯片，必须要是市售的。2）苯巴比妥的对照品，是中国药品生物制品检定所。3）苯巴比妥的批号是171222-200303。4）选用的甲醇是色谱醇，其他的试剂是分析纯。

二、实验的方法与结果

（一）色谱条件

流动相：需要使用醋酸盐缓冲液—甲醇，这种缓冲液的 PH值是4.5，其中甲醇使用的是60:40的含量。柱温是20℃，流速是1.0ml/min，检测的波长是254nm，进样量是20μl，理论板数需要按照苯巴比妥峰计不能够低于2500。

（二）线性关系考察

要称取一定数量的苯巴比妥的对照品，苯巴比妥的对照品含量是20mg，需要放在25ml的容量瓶中，使用流动相进行溶解，还要稀释到一定的刻度进行摇匀处理，直到达到相应的刻度值。之后在配置成为标准储备液，标准储备液要按照0.8mg/ml的标准进行配置，在配置之后，还要精密的量取相应的溶液：1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml和6.0ml，将这些溶液分别放置在10ml的容量瓶中，使用流动相进行稀释，达到相应的刻度配置成为一定浓度的对照品溶液，如果是按照上述色谱条件进行处理，精密进样 20μl，纵坐标是峰面积，横坐标是浓度，在计算的时候使用的回归方程是:

结果表明苯巴比妥在 0.08～0.48mg／ml浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。

（三）精密度实验

精密吸取对照品溶液(浓度为0.2mg／m1)，重复进样5次，每次2Ou1，测定苯巴比妥的峰面积，RSD为0.32%，说明该方法的精密度良好。

（四）稳定性实验

取同一批次供试品溶液，按本文色谱条件于0、2、4、6、8、10、16、24h进样2Ou1，测定苯巴比妥的峰面积，RSD为0．65 %：表明供试品溶液在24小时内稳定。

（五）重复性试验

精密称取同一批号的阿苯片样品6份，照含量测定方法测定含量，结果测得平均含量为98．6%，RSD为0．95%。

（六）加样回收试验

精密称取已知含量的样品9份，每份约重0．2g，置于lOml量瓶中，分 O别加入苯巴比妥对照品 lOg、12mg、14mg，加 m流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，分别取20u1注入液相色谱仪，计算苯巴比妥低、中、高三种浓度回收率(n=3)分别为98．87%(RSD=0.34%)，99．25%(RSD=0.56%)，98．63%(RSD=0.66 %)：平均回收率(n：9)为98．92%；说明此方法得到的测定结果准确可靠。

三、样品的测定

（一）供试品溶液的制备

取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉(约相当于苯巴比妥2O～g)置100M量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过。

（二）对照品溶液的制备

精密称取对照品20mg置l0ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

（三）测定法

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各201，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以外标法计算样品中苯巴比妥的含量。

（四）化学滴定法与高效液相色谱法对3批样品含量测定的比较

用化学滴定法对3批阿苯片中苯巴比妥的含量进行测定，并与高效液相色谱法的含量测定进行比较，结果显示3批样品含量测定的RSD值用化学滴定小于1．2%，用HPLC法时小于0.8%，具体数据见表1表1样品测定结果。

表1：样品测定结果

四、讨论

苯巴比妥主要是用于焦虑不安、高血压、烦躁嗜睡、固性失眠症、抗惊厥、治疗新生婴儿高胆红素血症，还有着抗癫痫的作用。这种药物的理化性性质如下：味道微苦、无臭，是白色的有光泽的结晶粉末。一般可以在乙醚或者是乙醇中被溶解，在水中是微溶，熔点是174.5—178℃。这种药物是长效巴比妥类，对于枢性抑制作用而言，与剂量有关。从药物的性质上来看，有着抗惊厥、催眠和镇静的作用，在抗癫痫上，如果是局部发作或者是大发作有用，其他的病症是没有任何的疗效的，如果是精神运动性的癫痫是不会起到作用的。苯巴比妥还可以从来解热镇痛，一般使用的方法是注射或者是口服。

苯巴比妥进入人脑组织会极慢，但是对于人脑组织中的浓度却是最高的。口服的时间是0.5—1h，如果是静脉注射，需要15min才能够有良好的疗效在，2—18h药物的浓度才能够达到相应的效果。由于规格不同，在使用的过程中，会产生很大的差异，具体的使用方法需要按照医生的嘱咐服用。这种药物也存在着一些不良反应：1）用药之后，可能会出现困倦、头晕等现象，如果使用的时间过长，会产生依赖性，如果多次使用，一定要注意蓄积性中毒现象的发生。2）有些患者还可能会出现剥脱性皮炎、皮疹和药热等现象。

（1)与对乙酰氨基酹合用可引起肝脏毒性。(2)与对乙酰氨基酚、双香豆素、氢化可的松、地塞米松、睾酮、雌激素、孕激素、口服避孕药、氯丙嗪、氯霉素、多西环素、灰黄霉素、地高辛、洋地黄毒苷、苯妥英钠及环孢素合用时，苯巴比妥使它们代谢加速，疗效降低。(3)合用时使环磷酰胺在体内活化的药物作用增加。(4)合用时使乙琥胺、卡马西平的血药浓度降低，t1/2缩短。(5)合用时使丙戊酸钠缩短，肝毒性增加，而苯巴比妥血药浓度增高。(6)合用时增强钙离子拮抗剂的降压作用。

阿苯片呼吸抑制及卟啉病患者禁用。喘息、鼻息肉综合征、对阿司匹林及对其他解热镇痛药过敏者禁用。血友病、血小板减少症、活动性出血性疾病患者禁用。严重肝肾功能不全患者禁用。较常见的有恶心、呕吐、上腹部不适或疼痛等不良反应。较少见的有支气管痉挛性过敏反应。皮肤过敏反应，表现为皮疹、荨麻疹、皮肤瘙痒等。某些儿童应用本药可能引起反常的兴奋。

本法采用高效液相法测定阿苯片中苯巴比妥含量，方法简便，快速，结果更准确，可以推广使用。

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1672-5018（2016）10-268-02