利用改进的高效液相色谱法测定葡萄酒中山梨酸钾含量

祁新春，杨晓雁（山西戎子酒庄有限公司，山西乡宁 042100）



利用改进的高效液相色谱法测定葡萄酒中山梨酸钾含量

祁新春，杨晓雁
（山西戎子酒庄有限公司，山西乡宁 042100）

摘 要：通过对国标GB/T 23495-2009食品中山梨酸钾含量方法的改进，建立一种简单稳定性好的方法，用于检测葡萄酒中山梨酸钾含量。结果表明，山梨酸浓度与液相色谱仪出峰峰面积呈线性回归，相关系数r为0.9998，回收率为91%~115.8%；检测葡萄酒样品时，RSD为2.08，稳定性和重复性好。

关键词：山梨酸钾；高效液相色谱仪；葡萄酒

山梨酸，化学名为2,4-己二烯酸或2-丙烯基丙烯酸，是一种直链不饱和脂肪酸，结构式如图1所示。可参与人体内的正常代谢，同化产生二氧化碳和水，但山梨酸过量，会对人体有害处[1]。由于其具有抑制微生物生长特性，而且毒性低，被国际粮农组织和卫生组织推荐为高效安全的防腐剂。山梨酸的溶解度比较低，常制成溶解度较大的山梨酸钾，添加到食品中[2-3]。山梨酸钾为无色-白色鳞片状结晶，或白色粉末，熔点270 ℃，溶于水而难溶于乙醇[4]。山梨酸钾和山梨酸具有同样的防腐功能，能够有效地抑制霉菌、酵母菌和好养性细菌的活性，还能防止肉毒杆菌、葡萄球菌、沙门氏菌等有害微生物的生长和繁殖，其抑制发育的作用比杀菌作用更强，从而能够有效延长食品的保存时间[5-7]。

我国国家标准GB 15037-2006《葡萄酒》规定葡萄酒中山梨酸及山梨酸钾的最大使用限量为0.2 g/kg。当山梨酸与山梨酸钾同时使用时，以山梨酸计，不得超过最大使用量[8]。为了检测葡萄酒中山梨酸或山梨酸钾的含量，国家标准GB/T 5009.29-2003《食品中山梨酸、苯甲酸的测定》规定检测方法为气相色谱法、薄层色谱法以及高效液相色谱法[9]，国家标准GB/T 23495-2009《食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定 高效液相色谱法》提出利用高效液相色谱仪检测不同食品中的山梨酸含量[10]。

图1　山梨酸结构式

上述两个标准使用高效液相色谱法测定山梨酸的检测方法存在不一致与不够详细的问题。（1）制备山梨酸标准储备液的不同：国家标准GB/T 5009.29-2003制备为准确称取0.1000 山梨酸，加碳酸氢钠（20 g/L）5 mL，加热溶解，移入100 mL容量瓶中，加水定容至100 mL；而GB/T 23495-2009制备为准确称取0.2680 g山梨酸钾，加水溶解并定容至200 mL；（2）样品处理：对葡萄酒样品水浴加热除醇的时间和温度并未做详细规定。

因此，本方法选择了一种比较快速制备山梨酸标准储备液和一种快速准确的样品处理方法。

1 试验材料与方法

1.1 试验材料

高效液相色谱仪（Agilent 1260，安捷伦科技（中国）有限公司），附紫外吸收检测器（VWD），色谱柱（HYPERSIL 150 mm×4.6 mm，5 μm）。

甲醇（色谱级，Mreda Technology inc，USA），乙酸铵（分析纯，洛阳市化学试剂厂），氨水（洛阳市化学试剂厂），山梨酸标准溶液（浓度为1 mg/mL，中国计量科学研究院），所有的溶液均由Millipore 纯水机（美国）制备的超纯水配制。

葡萄酒样品为2014年戎子酒庄3款鲜酒：轻柔红葡萄酒，酒度为9.0%，含糖量为52.0 g/L；轻柔桃红葡萄酒酒度为10.5%，含糖量为39.2 g/L；浓甜红葡萄酒酒度为12.5%，含糖量为106 g/L。

1.2 试验方法

1.2.1 山梨酸标准曲线制作

按照表1所示，吸取不同体积的山梨酸标准溶液，并将其稀释到10 mL的容量瓶中，对应浓度如表所示，过滤待用。上述步骤重复三次。

1.2.2 样品前处理

用移液枪取葡萄酒样品10 mL于小烧杯中，100 ℃水浴加热20 min或80 ℃水浴30 min去除乙醇，加水稀释，并用稀氨水（氨水与超纯水1:1混合配制）准确调节pH值为7.00，最后定容到100 mL容量瓶中，用一次性滤器过滤后待用。

1.2.3 高效液相色谱条件

配制0.02 mol/L乙酸铵溶液。取1.54 g乙酸铵，溶于1 L超纯水中，过滤待用。

高效液相色谱条件：流动相，甲醇:乙酸铵=5:95；波长230 nm，流速1 mL/min，柱温30 ℃，进样体积10 μL。

表1　山梨酸标准曲线

2 结果与分析

2.1 标准曲线制作

由图2可以看出，山梨酸出峰时间为4.7 min左右。

山梨酸标准溶液用超纯水配制成浓度分别为5 mg/L，10 mg/L，15 mg/L，20 mg/L，25 mg/L，30 mg/L，按仪器工作条件进行测定，以各自峰面积对标准溶液的质量浓度绘制标准曲线，检测的化合物在5～30 mg/L呈线性，线性回归曲线见图3，相关系数r为0.9998。

2.2 回收试验

在葡萄酒样品中加入1 mg/mL的山梨酸标准溶液1 mL，检测样品中山梨酸含量，结果如表2所示：进行回收试验，平行3次，按试验条件测定，加标回收率在93.03%～107.15%之间。

图2　山梨酸标准样品出峰图

图3　山梨酸标准曲线

2.3 样品中山梨酸钾含量测定

如图4所示为葡萄酒中山梨酸钾含量的测定图谱，出峰时间为4.8 min左右，干扰峰少。检测葡萄酒中山梨酸钾含量，样品检测重复3次，轻柔红葡萄酒检测数据依次为110.7 mg/L，109.67 mg/L，111.94 mg/L，检测平均值为110.77 mg/L，RSD为1.86；轻柔桃红红葡萄酒检测数据依次为103.10 mg/L，102.93 mg/L，101.20 mg/L，检测平均值为102.41 mg/L，RSD为1.03；浓甜红葡萄酒检测数据依次为94.57 mg/L，93.21 mg/L，96.52 mg/L，检测平均值为94.77 mg/L，RSD为1.76。说明利用该方法检测低醇葡萄酒中山梨酸钾含量，准确性高，重复性好。

表2　加标回收率

3 讨论

样品前处理试验表明，经过加热去醇，稀释并调节pH后，样品出峰状况稳定，检测结果更精准[11-12]。通过pH调节后，消除不同溶液pH值对结果的影响[13]。

样品测定结果显示，利用高效液相色谱能够将低醇葡萄酒中山梨酸钾与葡萄酒中其他物质完美的分离[14-15]，定量分析重现性好，结果基本一致。因此，在实际样品测定中，该方法更简单准确。

4 结论

本文建立了葡萄酒中山梨酸钾含量的测定方法，利用高效液相色谱仪，设置仪器条件为流动相，甲醇:乙酸铵=5:95，波长230 nm，流速1 mL/min，柱温30 ℃，进样体积10 μL。样品进样之前加热去醇，稀释以及pH调整处理，结果稳定性更好。山梨酸浓度与液相色谱仪出峰峰面积呈线性回归，相关系数r为0.9998，回收率为93.03%～107.15%；检测葡萄酒样品时，RSD＜2.00，方法简单而且稳定性好，灵敏度高，可以用于实际样品的测定。

参考文献

[1]田玉平,舒晓莲,顾玲玲,等.高效液相色谱法测定含乳饮料中苯甲酸,山梨酸钾,水杨酸[J].化学世界,2012,53(1):24-25.

[2]邱朝坤,范露,罗玉艳,等.可见分光光度法测定食品中的山梨酸钾[J].食品与机械,2013,29(6):85-88.

[3]汪显阳,冯伟,胡岩岩,等.两种吸收光度法同时测定果味饮料中苯甲酸钠和山梨酸钾含量的比较研究[J].食品科学,2009(24):337-339.

[4]钟云红,李龙.饮料中山梨酸钾的测定研究[J].四川化工,2013,16(5):30-32.

[5]梁海燕.关于饮料中山梨酸钾的测定方法的研究[J].黑龙江医药,2012,25(2):197-198.

[6]郭友珍,王志宏.同时测定碳酸饮料中苯甲酸钠,山梨酸钾和安赛蜜的高效液相色谱法[J].分析测试学报,2001,20(4):67-68.

[7]PYLYPIW H M,GRETHER M T.Rapid high-performance liquid chromatography method for the analysis of sodium benzoate and potassium sorbate in foods[J].Journal of chromatography A,2000,883(1):299-304.

[8]中国食品发酵工业研究院.葡萄酒:GB 15037-2006[S].北京:中国标准出版社,2007.

[9]卫生部食品卫生监督检验所.食品中山梨酸、苯甲酸的测定:GB/T 5009.29-2003[S].中国标准出版社,2004.

[10]重庆市计量质量检验研究院.食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定 高效液相色谱法:GB/T 23495-2009[S].北京:中国标准出版社,2009.

[11]李秋萍,卓婧,周淑晶.吸收光谱法同时检测食品中的苯甲酸钠与山梨酸钾[J].分析测试学报,2013,31(12):1556-1561.

[12]闫家伟.紫外分光光度法测定饮料中山梨酸钾的含量[J].南阳师范学院学报,2007,6(6):47-48.

[13]丘慧澄,杨达生,王希在.纸色谱法快速分离液相色谱法测定食品中苯甲酸钠和山梨酸钾[J].理化检验:化学分册,2003,39(7):417-418.

[14]CAN NO,ARLI G,LAFCI Y.A novel RP-HPLC method for simultaneous determination of potassium sorbate and sodium benzoate in soft drinks using C18-bonded monolithic silica column[J].Journal of separation science,2011,34(16/17):2214-2222.

[15]陈海春,余萍,王颖,等.饮料中防腐剂苯甲酸钠和山梨酸钾的同时测定[J].沈阳工业学院学报,2002(2):98-100.

The determination of potassium sorbate in wine by modified HPLC

QI Xinchun,YANG Xiaoyan
(Shanxi Chateau Rongzi Limited Company,Xiangning,Shanxi,042100)

Abstract:The study established a simple method of determination potassium sorbate in wine by modifying the GB/T 23495-2009.The results showed that the concentration of potassium sorbate and peak area were conforming to linear regression,and correlation index was 0.9998,the recoveries were 91% to 115.8%.The Relative standard deviation (RSD) was 2.08 when detect wine sample and the results were stable and repeatable.

Key words:potassium sorbate,High performance liquid chromatography (HPLC),wines

作者简介：祁新春（1983-），男，学士，酿酒师，山西戎子酒庄有限公司技术中心。E-mail:qxc0814@163.com

收稿日期：2015-08-24

DOI：10.13414/j.cnki.zwpp.2016.01.006

中图分类号：S663.1

文献标识码：A