滋肾双益复方对2型糖尿病大鼠糖代谢的影响及作用机制

李文浩　田春雨　薄海美　王　鸽　刘　泽　李承岸　周　正

华北理工大学　河北唐山　063000



滋肾双益复方对2型糖尿病大鼠糖代谢的影响及作用机制

李文浩田春雨薄海美王鸽刘泽李承岸周正

华北理工大学河北唐山063000

[摘要]①目的探讨滋肾双益复方对2型糖尿病大鼠糖代谢影响及作用机制。②方法将造模成功的2型糖尿病大鼠分为模型组，滋肾双益复方低、中、高剂量组[灌胃500、1000、2000 mg/(kg·d)]及二甲双胍组[灌胃100mg/(kg·d)]。持续给药60天后测空腹血糖(FBG)，糖化血红蛋白(HbAlc)，C-肽，胰高血糖素样肽-1(GLP-1)含量及游离脂肪酸(FFA)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)。③结果与正常组相比较，模型组的FBG、HbAlc显著升高(P<0.01)；与模型组相比较，滋肾双益复方可使2型糖尿病大鼠的FBG、HbAlc显著降低(P<0.05，P<0.01)，提高C-肽GLP-1含量(P<0.05，P<0.01)，抑制氧化应激。④结论滋肾双益复方能调节2型糖尿病大鼠的糖代谢，改善胰岛素抵抗(IR)，增加GLP-1含量及抑制氧化应激可能为其作用机制。

[关键词]滋肾双益复方2型糖尿病糖代谢

2型糖尿病患者(T2DM)大多存在着胰岛素抵抗(IR)现象。近些年来,中医药治疗2型糖尿病的临床和实验研究日益增多，寻求改善胰岛素抵抗、调节糖代谢的有效方药已成为中医防治2型糖尿病研究的热点[1]。滋肾双益复方由桑叶、桑葚、决明子、丹参、黄芪、葛根、黄连等组成。临床实践表明其具有良好的调节血糖、改善胰岛素抵抗作用。本实验主要进行该复方对2型糖尿病大鼠糖代谢、糖化血红蛋白(HbAlc)、C-肽、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)含量及游离脂肪酸(FFA)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的影响，为该复方的深层次研究奠定基础。

1仪器与材料

1.1仪器M200PRO酶标仪(瑞士TECAN公司)；血糖仪(三诺生物公司)；NycoCard Reader II糖化血红蛋白检测仪(挪威Axis-shield poc AS公司)。

1.2试药二甲双胍片(上海施贵宝制药有限公司，批号1407117)；糖化血红蛋白检测试剂盒(Axis-shield poc AS公司，批号：10174006)；C肽测定试剂盒(凯诺春天生物科技公司，批号：20150401A)；GLP-1试剂盒(批号：20150304)、MDA测试盒(批号：20150212)、SOD试剂盒(批号：20150226)南京建成生物工程研究所；血糖试纸(长沙三诺生物公司，批号2429EN)；滋肾双益复方(桑叶、桑葚、决明子、丹参、黄芪、葛根、黄连)加6倍量水加热提取2次，2h/次，滤过，水提物经喷雾干燥制得颗粒，动物灌胃给药时用纯净水制成混悬液。

1.3动物SPF雄性Wistar大鼠(220±10)g，上海斯莱克实验动物有限责任公司，合格证：SCXK(沪)2012-0002。

1.4方法

1.4.12型糖尿病大鼠模型实验选用清洁级健康雄性Wistar大鼠，适应性喂养7天，正常对照组普通饲料喂养；造模组给予高糖、高脂饲料喂养4周后，腹腔注射链脲佐菌素30mg/kg，并继续给予高糖高脂饲料2周，禁食12h后测定空腹血糖(FBG)，FBG≥11.1mmoL/L视为造模成功[2]。

1.4.2给药方法二甲双胍组(Met组)，灌胃100mg/(kg·d);滋肾双益复方低剂量组(ZL组)灌胃500mg/(kg·d);滋肾双益复方中剂量组(ZM组)灌胃1000mg/(kg·d),滋肾双益复方高剂量组(ZH组)灌胃2000mg/(kg·d)。每组10只，连续给药60天。

2结果

2.1滋肾双益复方对2型糖尿病大鼠FBG、HbAlc的影响与正常组比较，模型组大鼠FBG、HbAlc含量升高(P<0.01)；滋肾双益复方可显著降低糖尿病大鼠的FBG、HbAlc含量，表明滋肾双益复方可有效降低糖尿病大鼠的血糖，见表1。

表1　各组大鼠FBG 、HbAlc 的比较±s)

注：与正常组比,△△P<0.01；与模型组比,**P<0.01。

2.2滋肾双益复方对2型糖尿病大鼠C肽、Homa-IR及GLP-1分泌的影响与正常组比较，模型组大鼠GLP-1含量降低(P<0.01)。滋肾双益复方各剂量组均能促进2型糖尿病大鼠GLP-1的分泌(P<0.05，P<0.01)，见表2。

表2　滋肾双益复方对大鼠C-肽、IR指数及GLP-1的影响

注：与正常组比较，△P<0.05;△△P<0.01;与模型组比较，*P<0.05;**P<0.01。

2.3滋肾双益复方对2型糖尿病大鼠SOD 、FFA、 MDA的影响与正常组比较，模型组大鼠SOD的活性明显下降(P<0.01)， MDA、FFA的含量升高(P<0.01)。滋肾双益复方高剂量组的SOD活性显著升高，滋肾双益复方高剂量组MDA和FFA水平显著降低。见表3。

表3　滋肾双益复方对2型糖尿病大鼠SOD 、MDA和FFA的影响

注：与正常组比较，△△P<0.01;与模型组比较，*P<0.05;**P<0.01。

3讨论

胰岛素抵抗(IR)是机体对胰岛素的生物效应减低，机体胰岛素介导的葡萄糖摄取和代谢能力减低，包括胰岛素的敏感性反应性下降。T2DM中90%存在IR，导致T2DM胰岛素抵抗的主要因素包括FFA的升高、氧化应激、炎症反应以及细胞内在机制异常等。

FFA是细胞膜脂质结构和前列腺素合成的供体，为脂肪代谢的中间产物，是机体主要供给能量的来源。升高的FFA可以使胰岛素受体底物的丝氨酸残基磷酸化作用增强，影响了胰岛素介导的葡萄糖转运，导致糖代谢障碍；SOD是体内合成的氧自由基清除剂，其活性可反映机体抗氧化的能力。MDA是生物膜中多价不饱和脂肪酸受自由基作用生成的脂质过氧化代谢产物，其含量反映机体脂质过氧化的速度和程度，代表自由基的活性[4]；GLP-1是一种肠促胰岛素激素，具有促进胰岛素分泌、抑制胰高血糖素释放及改善胰岛β细胞功能。C肽与胰岛素以等分子数共存并同时释放于毛细血管循环中，C肽不被肝脏破坏，其半衰期较胰岛素长，测定血循环中C肽水平能较好的反映胰岛β细胞合成与释放胰岛素功能。

滋肾双益复方为中药复方制剂，本实验结果表明滋肾双益方可降低2型糖尿病大鼠的FBC及Hbalc水平，提高C-肽水平，促进GLP-1的分泌，并可以使SOD活性升高、 MDA和FFA水平显著降低，表明滋肾双益复方可调节2型糖尿病大鼠的糖代谢乱，改善胰岛素抵抗，抑制氧化应激反应及促进GLP-1的分泌可能是其作用机制之一，本实验的研究为该复方的深层次研究奠定了基础。

参考文献

[1]陈翰卿,王旭.2型糖尿病胰岛素抵抗中医药治疗研究概况[J].辽宁中医药大学学报,2012,14(6):72-74

[2]田春雨,薄海美,喇孝瑾,等.滋肾清肝代平方对2型糖尿病大鼠糖、脂代谢作用的研究[J].辽宁中医杂志,2014,41(8):1745-1747

[3]李霞,周智广,亓海英,等.用空腹C 肽代替胰岛素改良Homa公式评价胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能[J].中南大学学报:医学版,2004,29(4):419-423

[4]崔鹏,田春雨,张艳萍,等.双益方对2型糖尿病大鼠SOD、MDA、FFA影响的实验研究[J].时珍国医国药,2013,24(8):1840-1842

(岳静玲编辑)

Study on mechanism and glucose metabolism of type 2 diabetes rats with zishenshuangyi formula

LIWenhao,TIANChunyu,BOHaimei,et

al(NorthChinaUniversityofScienceandTechnology,Tangshan063000,China)

[ABSTRACT]ObjectiveTo study effects of Zishenshuangyi formula on mechanism and glucose metabolism of type 2 diabetes rats.MethodsSelected T2DM rats and randomly divided into groups: model group,Zishenshuangyi formula low dose group(ig,500mg/(kg·d),middle dose group (ig,1000mg/(kg·d),and high dose treatment group(ig,2000mg/(kg·d),metformin group(ig,100mg/(kg·d).Blood glucose,HbAlc,C-P,GLP-1 and FFA,SOD,MDA were detected after 60 d of continuous medication.ResultsCompared with the normal group,FBG,HbAlc of model group was significantly higher(P<0.01).Compared with model group,Zishenshuangyi formula can significantly reduce the levels of blood glucose,HbAlc,(P<0.05,P<0.01),and also can significantly improve the level of C-P,GLP-1(P<0.05,P<0.01),inhibit oxidative stress.ConclusionZishenshuangyi formula can effectively reduce T2DM Rats blood glucose,improve insulin resistance,increase GLP-1 content and inhibit oxidative stress may be the mechanism.

[KEYWORDS]Zishenshuangyi formula.Type 2 diabetes mellitus. Glucose metabolism

[中图分类号]R 22

[文献标识码]A

[文章编号]2095-2694(2016)02-148-03

【通讯作者】田春雨

【作者简介】李文浩(1995-)，男，本科生。研究方向：中医药防治2型糖尿病。

【基金项目】华北理工大学大学生创新创业训练计划项目(编号：X2015205)；河北省自然科学基金资助项目(编号：H2015209025)；河北省高等学校科学技术研究项目(编号：QN2015119)；河北省卫生和计划生育委员会科研项目(编号：ZD20140072)。