符合AAALAC 要求的实验猴饲养和集群化管理

王俐梅, 郭健敏, 汪巨峰 杨 威

(1. 广东省生物资源应用研究所药物非临床评价研究中心, 广州 510990; 2. 广东莱恩医药研究院有限公司, 广州 510990)

符合AAALAC 要求的实验猴饲养和集群化管理

王俐梅1,2, 郭健敏1,2, 汪巨峰1, 杨 威1,2

(1. 广东省生物资源应用研究所药物非临床评价研究中心, 广州 510990; 2. 广东莱恩医药研究院有限公司, 广州 510990)

建立符合国际实验动物评估和认可委员会(AAALAC)要求的实验猴饲养和集群化管理程序有利于研究机构人道和科学地对待动物，最大程度表达动物的天性，从而保障动物的健康和福利。本文总结了AAALAC要求下的实验猴的饲养程序和集群化管理程序，具体包括实验猴的基本饲养程序、实验猴集群化管理等方面。并进一步探讨了符合国际动物福利标准的实验猴集群化管理对于确保动物健康，为实验提供可靠而准确资料的重要性。

国际实验动物评估和认可委员会(AAALAC); 实验猴; 集群化管理

国际实验动物评估和认可委员会(AAALAC)是一个权威的评估和认证动物饲养和使用标准的国际机构, 它的宗旨是要求使用实验动物的科研单位人道、科学地对待动物, 确保实验动物福利[1]。目前, AAALAC已经得到国际普遍认可。我国也在逐渐向国际接轨, 越来越多的机构取得了AAALAC的认证。随着现代生物医药的发展, 以非人灵长类动物作为实验动物的研究日益增多。因此, 如何开展符合AAALAC要求的实验猴集群化管理, 并最终使实验猴表达其特有的天性[2], 有效地防止异常行为的发生是当下一个非常值得探讨的问题。猕猴是自然界中最常见、分布最广的一种猴, 也是最常用的实验用猴品种[3-7]。因此本文对于AAALAC要求下的实验猴饲养和集群化管理的探讨主要以猕猴为例进行说明。

1 实验猴基本饲养程序

猕猴属于社会化动物，有社会需求，为了保护实验猴的福利，确保实验研究的有效性，应该考虑将实验猴进行生活丰富化饲养，以满足其基本的社会需求，避免因为生活空间的限制和生活的单调而使动物变得无动于衷或焦躁不安，最后发展到行为呆板[7,8]。

1.1 生活环境的管理

研究机构提供的生活条件应满足猕猴基本的生存和活动需求，主要包括以下几点[9]。首先是环境温度，由于猕猴无法保持体温，因此应该避免过冷过热,以及环境温度波动过大。根据AAALAC的实验动物饲养管理和使用指南(Guide for the Care and Use of Laboratory Animals，简称“ 指南”)的要求，建议研究机构应为实验猴的饲养环境提供18～28 ℃的温度和40%～70%的相对湿度[10,11]。其次是光照，猕猴属于日间活动夜晚栖息的动物，因此室内饲养的实验猴应该遵循它们的基本生活习性，给予均匀分布的、足量的光照强度和光照时间, 根据指南要求, 动物光照强度控制在100～200 lx为宜，昼夜时间以10 h/14 h或12 h/12 h为宜。最后是动物所占用的空间，应综合考虑其体质量、大小、生长特征、动物需求等因素。大多情况下幼年实验猴较活跃，因此研究机构不能因动物的大小、体质量而改变笼内空间的大小。根据指南中的建议，研究机构应提供合适的非人灵长类动物的空间大小, 例如体质量低于4 kg的非人灵长类动物，笼底面积应至少为0.5 m2, 高度不低于0.8 m, 并随着动物体质量的增加而增加笼底面积和高度[10,11], 保证每只动物有足够的空间, 使动物能转身、调整正常体位、自由采食和饮水, 给予动物舒适的空间。

1.2 饮食管理

虽然猕猴的食物种类繁多，但它们对食物的爱好程度不一，这与食物出现的次数、食物的口感、食物获取的难易程度有关。当多种食物同时提供给动物时，它们会挑选喜欢的食物，而其他的少吃或不吃或用于玩耍。此外，实验猴用于玩耍损耗的食物较多，饲养过程中若饲料投喂过多易造成大量浪费，因此饲养实验猴应合理安排饲喂的时间、频率及种类等。室内饲养使猕猴失去了自由摄取食物的机会，完全依赖饲养人员的供给，因此，必须供给其充足的营养物质。猕猴的基础代谢量与体质量、性别、体温和运动有明显相关性。对于实验猴的喂养可根据其生长状况作出适当调整。投喂的水果或蔬菜应该分成小块提供，以防浪费，并且要经常更换种类，增加动物的兴趣。除定期给予水果或蔬菜外，在动物产生紧张焦虑的情况下，如保定、给药操作后，也应给予水果作为奖励来安抚其情绪。

1.3 环境的丰富化(含生活环境和行为表达)

室内饲养实验猴应该最大化利用房间的高度，安装可攀爬的结构，满足实验猴在不同高度的场所休息，还能提供丰富的环境，使动物大多时间栖息在高处[12]。例如在笼内上方可以添加横梁，方便动物看到外面。当工作人员穿戴防护服装接近动物时，动物会变得紧张与好斗。为了减少这种情况，应该有足够高的地方便于实验猴立即爬向高处找到高于人类视线的安全地方。另外也可以通过在房间内挂上假树叶、假水果等营造树林的氛围。

由于猕猴天性喜欢大多时间聚在一起处理食物，食物丰富化也可以作为动物丰富化饲养的一种方式[13]。当食物正常放于食槽内使猴容易获取时，它们的兴趣不在于食物本身，而在于如何玩耍食物，例如扔食物给其他猴作为乐趣。当把食物放在有孔的物品内或者放在笼子上方比放在食槽中更能激发猴觅食探索行为[14]，可以放正常饲料也可以放补充食物例如水果蔬菜等。也可以将食槽上取出食物的通道缩小或用网隔开，使猴无法大量获得食物，增加其探索食物的过程。这些方法可以作为供给猴主要日常饲料的途径，可以大大减少食物浪费。另外也可以使用小块水果例如葡萄混合到干净的木糠中诱使实验猴寻找并分离食物，这样既降低成本又容易使其参与到觅食活动中。例如在一些管道中填入粘性的食物例如苹果酱等也能鼓励动物的觅食行为。也可以把食物分成小块放在食槽内。小块的食物能增强手动的灵巧性，延长动物探索和吃食的时间[15]。

此外，还有多种丰富猴生活环境的方法。其中提供玩具是比较推荐的一种。对于功能简单的玩具，猴能够很快发掘其功能，并失去兴趣。因此应该更换不同的玩具以保持猴对玩具的好奇性。构造复杂且操作性较强的玩具也可以提供给猴，使其保持长时间的兴趣，但是会大大增加玩具的清洁维护工作量，因此机构应根据实际情况为猴选取合适的玩具。猕猴有色觉，建议购买不同颜色、不同形状和质地的玩具。猴也会时常咀嚼玩具，因此玩具应耐咬、持久。当玩具已被损坏时, 应及时将玩具撤出, 避免实验猴误吞或受伤。镜子也是一种可行且易操作的环境丰富化形式，可以认为是视觉丰富化的一种。镜子的材质不建议使用玻璃, 猕猴的好斗性会很快会破坏镜子并使其受伤，最好的材质是不锈钢, 不易损坏、生锈且易于清洗。饲养于房间内猴, 必须使猴在视觉上、听觉上及触觉上能感知到其他同类的存在，以便相互间交流。同时音乐或视频的播放对动物也是一种刺激[16]。轻柔的音乐能够帮助动物减轻紧张、焦虑情绪，例如陌生的实验人员靠近时会引起动物的警惕、紧张行为，试验进行过程中也会引起动物的焦虑情绪，轻柔的音乐使动物能尽快放松并熟悉这些行为[17]。

2 实验猴集群管理

2.1 成对饲养

一般来说，群体饲养是对猕猴正常发育最理想的状态。但群体饲养往往造成争斗，抢食等行为，使得部分猴经常受伤或处于饥饿状态，不利于实验猴的健康成长，也无法保障试验数据的准确性。因此成对饲养成为目前最适合研究机构使用的方法，既能满足试验需求，又能保障动物健康。但成对饲养需要完整的配对计划和配对后的密切监控计划以确保配对成功，无论在前期还是后期都需要大量的观察工作。

2.2 选择同伴

在进行实验猴成对饲养前，首要工作是确保动物都是健康，无异常行为。在猴完全接触之前需要由兽医或经验丰富的工作人员合理选择潜在的同伴，评估它们之间的相容性，例如有支配性的动物会与服从性的动物更容易相容，两只雌性不好斗的动物也能相容，成年动物与幼年动物容易相容。另外通过观察动物之间的面部表情、声音等也能判断动物之间是否友好。

2.3 配对熟悉

大多数经过熟悉期的成对饲养猴很少会发生相互伤害，而且相互间会生活得更加和谐。通常可以通过两种方式建立动物的配对熟悉过程。第一种是使用非接触式熟悉方法，将2只猴单笼饲养于同一房间内无法直接接触，但两者可以使用非接触式的交流如视觉、听觉交流，该方法能够防止猴因直接接触而造成损伤。第二种方法是接触式熟悉，2只实验猴单笼饲养于同一房间内，通过网状隔板分开，允许两者之间部分接触，饲养人员通过观察两者之间的互动行为来判断相容性[18]。例如，通过2只猴有相互捉虱、梳毛等行为，说明可以成对饲养；当一只对另一只显示出高傲的姿态，而另一只则后退到角落里，说明两者也可以相容；在2只猴的相等距离位置上提供水果，强势的首先抢到水果，而顺从的那只则看着远处，也可认为这两只实验猴可以相容[19,20]。

2.4 配对过程

当确认猴之间的相容性时，应将配对的2只猴相邻放置，慢慢拉开中间的隔板，使他们能自由通过。一旦2只猴完全接触，需要密切关注确保它们能够和谐相处。当2只猴无法和谐相处或出现严重的争斗行为时，应立即使用隔板将其分开。

2.5 配对监控

通常在配对后30 min内即可判断配对是否成功，但还需在配对后24 h内密切观察。猴的多种姿态都能表现出是否相容，例如分享食物、相互梳毛、彼此拥抱、一起咀嚼、共同防守、一起面向工作人员或者其中一只动物维持顺从另一只动物的姿势等。在实际饲养中，出于对研究方案的要求或动物健康问题的考虑，有时需要将动物分开饲养一段时间。在这种情况下，应该使用多种方法补偿同伴的缺失，例如将同伴紧邻放置，使它们之间能够互见或部分接触; 给予视频播放或音乐播放; 给予水果补偿; 兽医或其他工作人员的介入，加强与动物的沟通和交流，减轻动物的失落感。当然，猴之间的相容并不是一成不变的，可能过一段时间会出现争斗行为，也可能本来不相容的变得和谐相处。因此需要长期持续的观察。

3 小结

实验猴的饲养和管理与国际接轨是今后的必然趋势, 符合AAALAC要求的实验猴饲养和集群化管理必将有利于实验猴的身心健康, 有利于实验猴表达天性，进而使实验结果更为客观可靠。本文针对这个问题进行了探讨, 希望能够为国内的相关研究机构在试验猴饲养管理方面提供参考。

[1] 史光华, 吕京, 葛红梅, 等. 北美实验动物认可管理现状[J].实验动物与比较医学, 2015, 35(2):138-141.

[2] Mallapur A, Choudhury BC. Behavioral abnormalities in captive nonhuman primates[J]. J Appl Anim Welf Sci, 2003, 6(4):275-284.

[3] 陈元霖, 白寿昌, 曾中兴. 猕猴[M]. 北京: 科学出版社, 1985.

[4] 李鹏飞. 野生猕猴生物学特性观察[J]. 山西林业科技, 1994, 3:28-30.

[5] 陈景轩, 魏盛, 薛玲. 非人灵长类动物情绪的研究进展[J].医学综述, 2013, 19(24):4423-4426.

[6] 徐玉蕊. 安徽野生猕猴实验动物化及其种质特异性研究[D]. 合肥: 安徽大学, 2013.

[7] Schapiro SJ. A few new developments in primate housing and husbandry[J]. Scand J Lab Anim Sci, 2000, 27(2):103-110.

[8] Mallapur A. Managing primates in zoos: Lessons from animal behaviour[J]. Currentence, 2005, 89(7):1214-1219.

[9] Rennie AE, Buchanansmith HM. Refinement of the use of nonhuman primates in scientific research. Part II: housing, husbandry and acquisition[J]. Anim Welf, 2006, 15(3):215-238.

[10] GB14925-2010.实验动物环境及设施[S].

[11] Albus U. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, 8th Ed[J]. Lab Anim, 2012, 46(3):267-268.

[12] Buchanan-Smith HM. Environmental enrichment for primates in laboratories[J]. Adv Sci Res, 2010, 5(1):41-56.

[13] Schapiro SJ. Effects of social manipulations and environmental enrichment on behavior and cell-mediated immune responses in rhesus macaques[J]. Pharmacol Biochem Behav, 2002, 73(1):271-278.

[14] Reinhardt V, Institute AW. Comfortable quarters for labora-tory animals[J]. J Appl Anim Welf Sci, 1999, 2(3):247-250.

[15] Baker KC, Weed JL, Crockett CM, et al. Survey of environmental enhancement programs for laboratory primates[J]. Am J Primatol, 2007, 69(4):377-394.

[16] Lee GL, Yi MJ, Crockett CM, et al. Assessing video presentation as enrichment for captive male pigtailed macaques (Macaca nemestrina)[J]. Lab Prim Newsl, 2011, 50(4):7-9.

[17] Lutz CK, Novak MA. Environmental enrichment for nonhuman primates: theory and application[J]. ILAR J, 2005, 46 (2):178-191.

[18] Lee GH, Thom JP, Chu KL, et al. Comparing the relative benefits of grooming-contact and full-contact pairing for laboratory-housed adult female Macaca fascicularis [J]. Appl Anim Behav Sci, 2012, 137(3-4):157-165.

[19] Reinhardt V. Group formation of previously single-caged adult rhesus macaques for the purpose of environmental enrichment[J]. J Exp Anim Sci, 1991, 34(3):110-115.

[20] DiVincenti J, Wyatt JD. Pair housing of macaques in research facilities: a science-based review of benefits and risks[J]. J Am Assoc Lab Anim Sci , 2011, 50(6):856-863.

Q95-33

C

1674-5817(2016)05-0396-04

10.3969/j.issn.1674-5817.2016.05.016

2016-04-09

广东省级财政专项资金项目——广东省创新创业团队(405-2016-XMZC-0002-0004)

王俐梅(1986-), 女, 主治兽医, 执业兽医师, 主要从事实验动物管理。E-mail: door20@126.com

杨 威(1978-), 男, 客座教授, 研究方向: 新药药理毒理。E-mail: yangwei0719@163.com