Th17T淋巴细胞浸润及相关细胞因子在免疫性前列腺炎组织中的表达水平

李 峰， 叶向东， 连学雄， 冯宇鹏

(广州医科大学附属第四医院泌尿外科， 广东 广州 511447)



Th17T淋巴细胞浸润及相关细胞因子在免疫性前列腺炎组织中的表达水平

李 峰， 叶向东， 连学雄， 冯宇鹏

(广州医科大学附属第四医院泌尿外科， 广东 广州 511447)

【摘 要】目的:分析Th17T淋巴细胞浸润及相关细胞因子在免疫性前列腺炎组织中的表达水平。方法:将60只小鼠分为2组，研究组和对照组，造模成功后，取前列腺组织，分别进行免疫组化和PCR检测Th17T淋巴细胞浸润及其相关细胞因子表达情况。结果:前列腺炎组小鼠前列腺组织中CD4+，CD8+，IL-17+T淋巴细胞计数显著高于对照组(P<0.01)。前列腺炎组小鼠前列腺组织中IL-17、IL-23p19、IL-23p40 mRNA的表达水平显著高于对照组(P<0.01)。结论:免疫性前列腺炎组织Th17T淋巴细胞浸润及其相关细胞因子表达显著升高。

【关键词】免疫性前列腺炎组织； Th17 T淋巴细胞； 细胞因子； 白介素17

慢性前列腺炎几乎在所有年龄组的男性均可发病，并且以中青年为主。患者可表现为疼痛、性功能障碍、排尿困难等，治疗困难，迁延难愈。既往的而研究显示，在自身免疫性慢性前列腺炎动物模型的前列腺组织中存在淋巴细胞浸润，并且以Th1辅助型T淋巴细胞为主[1]。Th细胞在适应性免疫应答过程中发挥着重要的作用，Thl7辅助性T淋巴细胞以分泌白细胞介素IL-17为主，与多种自身免疫疾病有关，包括系统性红斑狼疮、多发性硬化等[2，3]。本研究其与免疫性前列腺炎的关系。现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 主要的实验材料:洁级小鼠60只，随机分为两组，每组各30只。一组造免疫性前列腺炎模型，为研究组，一组为对照组。造模方法:采用Wistar大鼠前列腺组织蛋白提纯液为免疫原，水合氯醛腹腔注射麻醉，研究组小鼠每只多点皮下注射浓度为2mg/ mL的列腺组织蛋白提纯液0.5mL。免疫后60d，将研究组和对照组各分为两个亚组，其中1个亚组用于RT-PCR检测，一个亚组用于免疫组织化学检测。30只前列腺炎模型小鼠，前列腺炎Ⅰ级8只，Ⅱ级18只，Ⅲ级4只。处死小鼠后取前列腺组织冻存备用。主要实验材料:大鼠抗小鼠IL-17一抗，大鼠抗小鼠CD4一抗，大鼠抗小鼠CD8一抗。动物组织总RNA提取盒，One step SYBR prime scriptTM RT-PCR kit。引物序列由大连宝生物工程有限公司合成，包括IL-17A引物序列，IL23 19引物序列，IL23p40引物序列，β-actin引物序。

1.2 Th17辅助性T淋巴细胞浸润情况:取冻存的小鼠前列腺组织，切为5μm片，贴片，甲醛固定，行免疫组化检测。阳性细胞为淋巴细胞浆/细胞膜有棕黄色着色。每个载玻片选5个高倍视野，计算阳性细胞数，计算平均值。观察包括CD4+细胞，CD8+细胞以及IL -17+T淋巴细胞。

1.3 Th17淋巴细胞相关细胞因子表达情况:取冻存的小鼠前列腺组织，提取总RNA，采用RT-PCR方法检测前列腺组织中相关因子IL-17，IL-23p19，IL-23p40的mRNA表达，计算相对表达量。

1.4 统计学处理:应用SPSS 13.0统计分析软件包进行统计与分析，各组数据用(均数±方差)表示，组间比较使用t检验，P<0.05表明有统计学意义。相关性分析采用Pearson相关分析，以P<0.05表明有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组小鼠前列腺组织内CD4+，CD8+，IL-17+T淋巴细胞浸润情况:前列腺炎组小鼠前列腺组织中CD4+，CD8+，IL-17+T淋巴细胞计数显著高于对照组(P<0.01)。见表1。

表1 两组小鼠前列腺组织内CD4+ CD8+ IL-17+T淋巴细胞浸润情况

2.2 两组前列腺组织内IL-17、IL-23p19、IL-23p40 mRNA的表达情况:前列腺炎组小鼠前列腺组织中IL -17、IL-23p19、IL-23p40 mRNA的表达水平显著高于对照组(P<0.01)。见表2。

表2 两组前列腺组织内IL-17 IL-23p19 IL-23p40 mRNA的表达情况

3 讨 论

非细菌性前列腺炎是有免疫、炎症、神经内分泌等参与的复杂的病理变化，可由多种原因不诱因导致，主要表现为尿道刺激症状以及慢性盆腔疼痛等，患者常常有精神心理症状。其病因学十分复杂。非细菌性前列腺炎常规的细菌检查未见病原体分离，但学者普遍认为，其仍可能与某些病原体有关，例如L型变形菌、厌氧菌、沙眼衣原体、纳米细菌、支原体[4~6]。尿道括约肌因一些因素导致过度收缩，使膀胱出口发生梗阻，导致残余尿，残余尿发生尿液反流至前列腺，一方面反流的尿液直接刺激前列腺，诱发无菌性化学前列腺炎，一方面，病原也也会随反流的尿液进入前列腺。前列腺炎经久不愈，可引起患者发生精神心理改变以及人格特征发生改变。前列腺痛可导致患者发生心率、血压波动，这说明自主神经反应可能参与其中。研究显示在Ⅲ型前列腺炎的发展过程中免疫因素发挥了重要作用，患者的前列腺液中细胞因子水平发生变化，例如IL-6、IL-2、IL-10、IL-8、TNF-α、MCP-1等，并且研究显示IL-10的水平与患者疼痛症状具有正向相关的关系，并且采用免疫抑制剂治疗具有一定的疗效。正常情况下氧自由基在机体内的产生/清除保持平衡，而前列腺炎患者氧自由基生成过多，清除下降，导致机体抗氧化应激能力下降，氧化应激产物、副产物增加，这也是非细菌性前列腺炎发病机制之一，前列腺按摩液中存在中性粒细胞、T细胞、B细胞、巨噬细胞等，但未发现细菌感染情况[7]。在没有细菌感染的情况下，前列腺液、精液中的细胞因子表达增高，这说明有活动性炎症过程存在。研究显示Th1细胞调节的抗原特异性免疫反应参与了前列腺炎的发生和发展。前列腺炎患者的前列腺组织内总IgA、IgG升高，前列腺外周带IgM沉积增加。对慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征患者的精浆进行特异性回忆性增殖反应研究，10例慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征患者中3例呈阳性，而15例非慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征患者中无阳性患者，这证明了慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征自身免疫学说[8]:慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征前列腺组织中针对前列腺相关抗原的IgG滴度升高[9]；65%的慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征患者T细胞自身或异体精浆抗原刺激反应呈阳性，而只有15%的非慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征患者呈阳性；34%的非慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征出现针对前列腺抗原的细胞免疫反应。Thl细胞调节的抗原特异性免疫反应参与了非慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征。另外，精浆富含前列腺液，并且可检测出TNF-α等细胞因子，提示精浆内存在针对前列腺的特异性免疫反应。慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征患者存在低IL-10基因型[10]。对慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征的体液免疫进行研究，结果显示前列腺组织内的IgG、IgA水平升高，在前列腺外周带IgM沉积增加[11]，针对前列腺的特异性抗体在慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征患者精浆和血浆中被检测到。有细胞免疫参与了慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征的发病，但是并没有检测到针对前列腺抗原的特异性抗体。研究发现细胞免疫与大鼠EAP有关，但是未发现体液免疫与其有关[12]；33%慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征的患者进行病理学检测结果显示前列腺组织存在白细胞；对慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征患者的前列腺组织进行免疫组化检测，结果显示胞毒性T淋巴细胞是主要的腺泡内浸润的T细胞。但是研究显示并不是所有的慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征患者均会发生自身免疫反应。慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征患者群体是一个非均质群体，患者可能病因不同，因此并不仅仅与某一发病因素有关。研究显示类风湿因子、抗核抗体、红细胞沉降率、抗甲状腺抗体、CRP等与慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征之间无明显的相关性。

目前学界认为多种因素与慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征的发病有关。国内外均有运用免疫方法制作免疫性前列腺炎动物模型的报道，C57BL/6dx鼠的成炎率较高，在免疫后7d前列腺组织内就有炎症细胞浸润，在免疫后28d达到高峰，浸润的炎症细胞包括T淋巴细胞及少量的巨噬细胞。EAP全脾细胞转输能导致大鼠免疫性前列腺炎，但在转输前清除T淋巴细胞，则不能诱发免疫性前列腺炎的发生。国内有学者采用前列腺类固醇结合蛋白作为免疫原进行造模，也取得了较好的效果。

CD4+辅助性T淋巴细胞对免疫的调节反应具有异质性，CD4+辅助性T淋巴细胞根据分泌的细胞因子不同分为四大亚群:Thl、Th2、Thl7和调节性T淋巴细胞。研究显示这种辅助性T淋巴细胞参与多种自身免疫性疾病的发生、发展，与自身免疫性疾病相关。Thl主要分泌IFM和IL l2等，能够清除细胞内病原菌，Th2分泌IL-5、IL-4、IL-l3等，能够清除寄生虫、细胞外感染病菌。Thl7淋巴细胞主要产生IL-17细胞因子，并因此而得名。研究显示Th17辅助性T淋巴细胞与系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、血管炎、系统性硬化等多种自身免疫性疾病有关。IL-l7作为促炎因子，能够诱导细胞集落刺激因子的分泌以及IL-8的分泌，从而对中性粒细胞发挥募集作用。其还能够能够促使单核细胞分泌TNF-α、IL-1β而加强炎症反应。IL-23是一种促炎症细胞因子，主要由抗原提呈细胞分泌，能够诱导Th-l7辅助性T淋巴细胞的分化，并诱导IL-l7的产生，因此其在自身免疫性疾病中也发挥着重要的作用。在本次研究中，前列腺炎模型小鼠前列腺组织中CD4+细胞核CD8+ T淋巴细胞显著增加，并且Th 17+细胞的浸润程度也显著增加。采用PCR方法对IL-17、IL-23p19、IL-23p40 mRNA表达情况进行分析，结果也显示其表达显著升高。结果提示免疫性前列腺炎作为一种自身免疫性疾病，Th17 T淋巴细胞参与了其发生和发展的过程。研究显示CD4 +T细胞对诱发前列腺炎症状具有重要的作用。

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Th17 T Lymphocytes Infiltration and Associated Cytokines Expression in Immunity Prostatitis Tissue

LI Feng， YE Xiangdong， LIAN Xuexiong， et al
(The Fourth Hospital Affiliated to Guangzhou Medical University，Guangdong Guangzhou 511447，China)

【Abstract】Objective:To analyze Th17 T lymphocytes infiltration and associated cytokines expression in immunity prostatitis tissue. Method: 60 mouses were divided into study group and control group. Study group was made immunity prostatitis model. After model，Th17 T lymphocytes infiltration and associated cytokinesbook=468,ebook=120expression were detected. Result:CD4+，CD8+，IL-17+ T lymphocytes infiltration in immunity prostatitis tissue increased apparently(P<0.01). IL-17、IL-23p19、IL-23p40 mRNA expression in immunity prostatitis tissue increased apparently(P<0.01). Conclusion: Th17 T lymphocytes infiltration and associated cytokines expression in immunity prostatitis tissue.

【Key words】Immunity prostatitis tissue； Th17 T lymphocytes； Cytokines； IL-17

【基金项目】广东省自然科学自由申请项目，(编号:S2012010009126)

【文章编号】1006-6233(2016)03-0467-04

【文献标识码】B 【doi】10.3969/ j.issn.1006-6233.2016.03.041