弓形虫病血清学检测方法研究进展

苏 勇

（辽宁省沈阳市动物疫病预防控制中心，辽宁沈阳 110034）

弓形虫病血清学检测方法研究进展

苏 勇

（辽宁省沈阳市动物疫病预防控制中心，辽宁沈阳 110034）

弓形虫病是由刚第弓形虫（toxop1asma gondii）引起的一种人畜共患寄生虫病。呈世界性分布，各种家畜，包括猪、牛、羊、犬、猫和试验动物，包括小白鼠、天竺鼠、家兔等，以及人类，都能感染弓形虫。弓形虫病可使孕畜流产死胎，急性弓形虫病可造成家畜的死亡。弓形虫感染孕妇后可引起流产，胎儿畸形或产出弱智儿。弓形虫感染成人后，可侵害神经系统、呼吸系统、心脏、淋巴内皮系统等多种器官或系统，并造成损伤，严重时会造成死亡。因此弓形虫病具有重要的公共卫生意义。

弓形虫病；人畜共患寄；公共卫生意义

由于弓形虫病病原学检查比较困难且阳性率不高，所以血清学试验仍是目前广泛应用于诊断的重要参考依据，从血清或脑脊液内检测弓形虫特异性抗体，是弓形虫感染和弓形虫病诊断的重要辅助手段，尤其是特异性IgM阳性，代表早起感染，特别适用于流行病学调查和早期生前诊断。近年来，有不少关于检测循环抗原（CAg）的报告，表明循环抗原阳性具有病原学诊断价值。

1 抗体检测方法

1.1 染色试验（Sabin-Feldman dye test，DT）

是最早使用的，公认的可靠方法，具有良好的特异性、敏感性个重复性。其原理是采用活滋养体在有致活因子的参与下与样本的特异性抗体作用，使虫体表膜破坏而不为美兰着染。镜检时60%虫体不被蓝染者为阳性，如测定滴度，则以50%虫体不着色者为血清最高滴度。虫体多数被蓝染者为阴性。由于需要适宜的含辅助因子的人血清，并要以活弓形虫为抗原，故其应用受到一定的限制。

1.2 间接血凝试验（IHA）

间接血凝抗体是机体对弓形虫可溶性抗原刺激的应答，比染色试验抗体出现迟。它虽不是最特异的反应，但由于近年来在抗原处理和固定血细胞方法等方面的不断改进，特异性大大提高。结果易于判断，敏感性较高，试剂易于商品化，适于大规模流行病学调查时使用，目前已有试剂盒出售。

1.3 间接免疫荧光抗体试验（IFA）

以整虫抗原，采用荧光标记的二抗检测特异抗体。此法可检测同型及亚型抗体，其中检测IgM具有早期诊断价值。但因需要荧光显微镜，故在基层推广有困难。此外检测IgM还有可能由于被检血清含类风湿因子、抗核抗体等因素产生假阳性。

1.4 酶联免疫吸附试验（ELISA）

用于检测宿主的特异循环抗体或抗原，已有多种改良法广泛用于早期急性感染和先天性弓形虫病的诊断。有学者在原有基础上增加用生物素-亲和素系统，其灵敏度可提高数倍。目前临床上多采用同时检测IgM、IgG诊断现症感染。目前已有一些新的改进技术，如金黄色葡萄球菌A蛋白-ELISA法，将金黄色葡萄球菌A蛋白标记酶，替代第二抗体；其他还有Dot-ELISA、ABC-ELISA等。

1.5 免疫酶染色试验（IEST）

效果与间接免疫荧光抗体试验相似，可用普通光学显微镜观察，便于基层推广应用。

1.6 微量间接乳胶凝集试验（LAT）

法国和日本十分推崇微量间接乳胶凝集试验。我国杨铁生等（1991）应用自行制备的微量间接乳胶凝集试验试剂盒检测健康人血清64份和猫血清35份。其敏感性、特异性和重复性均与日本荣研试剂盒无显著差异。

2 抗原检测方法

2.1 循环抗原（CAg）的检测方法

是近年来应用较多的技术，循环抗原比特异性抗体出现早，是病原体存在的特征。常用的方法为ELISA，也有改进的斑点-ELISA、黑色素细胞抗体-ELISA等。具有较高的敏感性和特异性，可诊断弓形虫急性感染。

2.2 抗弓形虫McAb的建立与应用

采用McAb-微量反向间接血凝试验（RIHA）检测弓形虫循环抗原，制成了用于早期弓形虫病的诊断试剂盒。

2.3 PCR检测技术

夏爱娣等（1992）和韦相才等（1994）建立了诊断弓形虫病的PCR方法，提取外周血白细胞DNA进行扩增，具有较高的敏感性和特异性；石群立等（1992）用建立的PCR检测80例先天性畸形儿石蜡包埋脑组织中的弓形虫，扩增出13例阳性结果（43.3%）。

3 展望

近几年通过大量的试验研究，弓形虫病诊断研究方面已取得较大进展，一些研究成果已经或正在对弓形虫病的防控产生积极影响，但是今后应为检测提供可靠的诊断抗原或抗体，加快解决试剂的标准化问题，建立综合的检测系统来弥补单一检测系统的不足。

［1］ 张二营，周金飒，李维维，等.弓形虫病免疫学诊断方法研究进展［J］.科学大众：科学教育，2014，（7）：155-155.

［2］ 杜夏夏，徐鹏.弓形虫病免疫学诊断方法的研究进展［J］.现代畜牧兽医，2015，（2）：55-58.