一例猪伪狂犬病和葡萄球菌混合感染的诊断

杜海燕韩俊伟

（1.新乡市动物疫病预防控制中心，河南新乡 453000；2.新乡市动物卫生监督所，河南新乡 453000）

一例猪伪狂犬病和葡萄球菌混合感染的诊断

杜海燕1韩俊伟2

（1.新乡市动物疫病预防控制中心，河南新乡 453000；2.新乡市动物卫生监督所，河南新乡 453000）

猪伪狂犬病是伪狂犬病毒引起的急性传染病，其主要特征为病猪体温升高，仔猪多出现神经障碍，妊娠母猪出现流产、死胎等症状，病猪于局部皮肤呈现持续性的剧烈瘙痒。而猪葡萄球菌病是由猪葡萄球菌引起猪的细菌性疾病，以断奶仔猪多发，有明显的接触性传染性，无明显季节性，与环境因素关系密切。上述两种病地域分布广泛，对养猪业危害严重。2016年2月，我实验室收到某猪场送检病猪，并进行实验室诊断，确诊为猪伪狂犬与葡萄球菌混合感染，具体情况如下。

猪伪狂犬病；混合感染；实验诊断

1 流行病学调查

某养猪户存栏生猪200头，饲养母猪16头，2016年1月，相继有5头母猪生产，共产仔猪72头，其中弱猪5头，死胎9头，仔猪出生后7日龄左右开始发病，体温升至41℃，病猪消瘦、脱水、体质较弱，精神沉郁，吃奶少或不吃，拉黄白色、黄色或灰色粪便；部分病猪耳部、眼睛周围、腹部出现红斑，然后形成微黄水泡破溃，覆盖在皮肤上一层棕灰色结痂。有些病猪出现转圈、运动失调等症状，病程较短，共发病36头，死亡14头。该猪场多方面进行治疗，但无明显效果。

2 剖检变化

送检病死猪剖检观察，颌下淋巴结、腹股沟淋巴结等外周淋巴结肿大、出血，肝脏表面点状出有黄白色坏死点，肾脏点状出血，脾、胃、肺、肠道大量出血并有气体，心脏充血并且积液增多，脑膜充血水肿。

3 实验室诊断

3.1 细菌分离鉴定

采集送检病死猪的肝脏、脾脏、肾脏及淋巴结进行细菌分离培养。病料接种于鲜血琼脂平板后，放置培养箱中，37℃培养24h，在鲜血培养基上长出透明、圆形、微小、溶血的菌落，经革兰氏染色、镜检，为革兰氏阳性球菌，挑取单个优势菌落进行纯培养，并用纯培养物作生化试验，初步确定为葡萄球菌。

3.2 药物敏感试验

取上述细菌纯培养物，均匀涂于鲜血琼脂培养基上，对上述细菌纯培养物进行抗生素敏感试验，结果见表。

3.3 猪伪狂犬病毒核酸检测

3.3.1 DNA提取 分别取病猪的脑组织（样品1）、淋巴结组织（样品2）和脾脏组织（样品3）研磨，反复冻融3次，8000rpm离心10min，取上清液采用离心柱提取法提取病料DNA样本。

3.3.2 PCR扩增 采用PCR-荧光探针法对待检样品进行PCR扩增。每个样本反应体系PRV qPCR MIX 20μl，Taq酶系1μl，待测样品4μl，同时设阳性和阴性质控品。标记荧光基团种类：报告基团FAM，淬灭基团为TAMRA。扩增条件：94℃-2min；94℃30s，55℃45s（采集荧光），40个循环。

3.3.3 结果分析 反应结束后，使用手动调整阈值使阴性质控品Ct值在40以上，Ct值小于35个循环的为阳性；Ct值在35～40个循环之间的需要重复试验，重复试验之后，如果Ct值仍然在35～40个循环之间，判断为阳性，没有荧光值增长为阴性。质控标准：阴性质控品：Ct值显示UNDET或者Ct40，即结果为阴性；阳性质控品：CT值小于30，且呈标准S型扩增曲线。结果见下图。

猪伪狂犬病毒核酸荧光PCR检测结果

分离细菌药物敏感性试验结果

对送检病料的猪伪狂犬病毒核酸检测结果由图可见：阳性对照Ct值为16.21，阴性对照Ct值为UNDET，待检样品脑组织（样1）Ct值为28.03，淋巴组织（样2）Ct值为31.12，脾脏组织（样3）Ct值为32.00，结果表明所检测样品中猪伪狂犬病毒核酸为阳性，说明该病死猪群存在猪伪狂犬病毒的感染。

4 结果与分析

通过流行病学、临床症状、病理剖检变化、实验室检查等试验结果，初步确诊为病死猪可能感染了猪伪狂犬病病毒，继发葡萄球菌感染所致。建议该猪场对发病猪或疑似病猪及时进行隔离或淘汰；使用猪伪狂犬病弱毒疫苗对猪群进行强化免疫，用猪基因干扰素按要求对病猪进行肌肉注射；建立健全猪群免疫监测制度，定期进行免疫抗体监测，并依据抗体监测结果，适时免疫和采取其他相应措施，防止疫病发生。严格控制葡萄球菌继发感染，选用该菌敏感性高的药物（如肠道康、舒坦西林和东方泻立停）进行治疗，轮换使用敏感药物，使用1%高锰酸钾溶液清洗病猪患部，再涂上龙胆紫，2次/d，连用3d。同时，做好猪群进行补液、补糖等对症治疗。要加强猪群饲养管理，建立兽医卫生防疫制度，在预防接种的同时，要结合搞好猪场环境卫生、严格消毒等综合防治措施，避免疫病的发生。

［1］ 冯俊亮，刘玉民，付永增.猪伪狂犬病与葡萄球菌病混合感染的诊治［J］.湖北畜牧兽医，2010，（4）：36-36.

杜海燕（1983-），女，助理兽医师，主要从事动物疫病诊断与防治工作，现工作于新疆市动物疫病预防控制中心。