仿刺参糖胺聚糖对健康人和肺癌患者外周血单个核细胞体外增殖活性的影响
2016-04-05李亚坤杜建新吕志华孙勇朱新红林存智
李亚坤，杜建新，吕志华 ，孙勇 ，朱新红，林存智
(1青岛大学，山东青岛266071；2青岛大学附属医院;3中国海洋大学药学院；4青岛市市立医院)
·基础研究·
仿刺参糖胺聚糖对健康人和肺癌患者外周血单个核细胞体外增殖活性的影响
李亚坤1，杜建新2，吕志华3，孙勇2，朱新红4，林存智2
(1青岛大学，山东青岛266071；2青岛大学附属医院;3中国海洋大学药学院；4青岛市市立医院)
摘要：目的探讨不同浓度的仿刺参糖胺聚糖(HGAG)对健康人和肺癌患者外周血单个核细胞(PBMC)体外增殖活性的影响。方法 采用Ficoll密度梯度离心法分别从健康人和肺癌患者外周血分离PBMC，在体外与0、0.1、1、10、50、100 μg/mL的HGAG共同培养，CCK-8法检测PBMC增殖的光密度(OD)值。结果HGAG在1~50 μg/mL浓度范围内健康人PBMC的OD值均增高，与0 μg/mL相比P均<0.05，浓度为10 μg/mL时OD值最高(P均<0.05)，0.1、100 μg/mL与0 μg/mL相比差异无统计学意义；HGAG在10~100 μg/mL浓度范围内肺癌患者PBMC的OD值均增高，与0 μg/mL相比P均<0.05，且HGAG浓度越高其OD值越高(P均<0.05)。结论 HGAG在一定浓度范围内均能够促进健康人和肺癌患者PBMC的增殖，从而有助于提高机体的免疫功能，发挥抗肿瘤作用。
关键词：肺癌;仿刺参糖胺聚糖;外周血单个核细胞;免疫调节
海参属棘皮动物门海参纲生物，具有较高的营养价值和药用价值[1，2]。海参多糖是海参的主要活性成分之一，其生物活性广泛，具有抗肿瘤、抗凝血、抗病毒及免疫调节等作用[3，4]。其中抗肿瘤和免疫调节作用一直备受关注，且多糖的免疫调节作用是多靶点的。2014年9～12月，我们采用CCK-8法检测不同浓度的仿刺参糖胺聚糖(HGAG)对体外培养的健康人及肺癌患者外周血单个核细胞(PBMC)增殖活性的影响。现报告如下。
1材料与方法
1.1临床资料收集青岛大学附属医院收治的肺癌患者30例，其中男17例、女13例，年龄(55.40±4.25)岁。健康查体中心的健康体检者30例，排除肿瘤及其他自身免疫缺陷性疾病以及长期服用糖皮质激素者，其中男16例、女14例，年龄(34.60±8.83)岁。两组性别、年龄具有可比性。
1.2PBMC的分离及增殖活性观察取上述健康人及肺癌患者外周血，采用Ficoll密度梯度离心法分离PBMC。用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基重悬细胞，调整细胞密度5×104/mL，接种于96孔细胞培养板，每孔100 μL，共设6组，每组3个复孔。前5组分别加入HGAG使其终浓度为0.1、1、10、50、100 μg/mL，第6组加入PBS为对照组，放置于 37 ℃、5% CO2浓度的CO2培养箱中培养。于培养24 h后，每孔加10 μL CCK-8，轻微震荡，在 37 ℃、5%CO2浓度的培养箱中孵育4 h，用酶标仪测定在450 nm处的光密度(OD)值。
2结果
2.1HGAG对健康人PBMC增殖活性的影响对照组及0.1、1、10、50、100 μg/mL HGAG组健康人PBMC的OD值分别为0.740±0.011、0.750±0.015、0.761±0.023、0.770±0.027、0.763±0.026、0.752±0.016。1、10、50 μg/mL HGAG组OD值与对照组相比P均<0.05，10 μg/mL HGAG组OD值高于1、50 μg/mL HGAG组(P均<0.05)。0.1、100 μg/mL HGAG组的OD值与对照组相比较差异均无统计学意义。
2.2HGAG对肺癌患者PBMC增殖活性的影响对照组及0.1、1、10、50、100 μg/mL HGAG组肺癌患者PBMC的OD值分别为0.735±0.010、0.741±0.012、0.747±0.019、0.759±0.020、0.774±0.031、0.780±0.032。10、50、100 μg/mL HGAG组OD值与对照组相比P均<0.05，且100 μg/mL HGAG组OD值>50 μg/mL HGAG组OD值>10 μg/mL HGAG组OD值(P均<0.05)。0.1、1 μg/mL HGAG组OD值与对照组相比较差异均无统计学意义。
3讨论
近年来，多项研究已经证实海参多糖具有抗肿瘤作用[5～8]，且其抗肿瘤作用与其免疫调节作用密切相关[9，10]。HGAG可以增强肝癌腹水小鼠的单核巨噬细胞系统功能，提高腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数，达到抑瘤作用，同时在体外还能促进小鼠脾淋巴细胞增殖[11]。刺参酸性黏多糖通过刺激免疫器官组织增生，增强巨噬细胞、自然杀伤细胞和T细胞的免疫能力，调节TNF-α、IL-2等细胞因子，肝癌产生明显的抑制作用[12]。日本刺参可通过提高荷瘤小鼠脾指数及胸腺指数、血清溶血素水平、抗体形成的细胞数、迟发型变态反应水平和脾淋巴细胞转化能力，促进NK细胞活性和巨噬细胞的吞噬能力，抑制小鼠S180肉瘤的生长[13]。因此，海参多糖可以通过全面调节机体的免疫功能间接发挥抗肿瘤作用，然而在体外对淋巴细胞的直接作用少有报道。本研究观察了不同浓度HGAG对健康人及肺癌患者免疫细胞PBMC增殖活性的影响，结果显示，HGAG在1~50 μg/mL浓度范围内能明显提高健康人PBMC的增殖活性，且浓度为10 μg/mL时促增殖作用最明显。此后随着浓度降低或升高，促进作用逐渐降低，这可能是由于高浓度的HGAG会使渗透压、pH等条件发生改变，从而影响细胞的增殖活性。与正常人相比，0.1~100 μg/mL浓度范围内，肺癌患者的PBMC的增殖活性随着HGAG浓度的升高而升高，且浓度为100 μg/mL时仍有明显的促增殖作用。其原因可能是肺癌患者的免疫功能低下，需较高浓度的HGAG刺激才能提高PMBC增殖活性。
综上所述，HGAG在一定的浓度范围内能够促进健康人和肺癌患者PBMC的增殖，说明HGAG不仅能提高健康人的免疫功能，而且也能提高免疫低下的肺癌患者的免疫功能，从而发挥抗肿瘤作用。由于正常人与肺癌患者的基础免疫状态不同，产生促PBMC增殖作用所需要的HGAG浓度亦不同。
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(收稿日期：2015-08-25)
中图分类号：R734.2
文献标志码：A
文章编号：1002-266X(2016)06-0028-02
doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.06.009
通信作者：林存智(E-mail： lindoc@126.com)，杜建新(E-mail： jianxindu@163.com)
基金项目：海洋药物教育部重点实验室科研基金资助项目(KLMDOUC201307)。
