炎症小体Nod样受体蛋白3及胱天蛋白酶募集域蛋白8基因多态性与急性冠脉综合征的相关性

周 栋，王新宏，周 娟，樊 艳，万招飞，刘 洋，袁祖贻

(西安交通大学第一附属医院心血管内科，陕西西安 710061)



◇临床研究◇

炎症小体Nod样受体蛋白3及胱天蛋白酶募集域蛋白8基因多态性与急性冠脉综合征的相关性

周 栋，王新宏，周 娟，樊 艳，万招飞，刘 洋，袁祖贻

(西安交通大学第一附属医院心血管内科，陕西西安 710061)

目的 探讨Nod样受体蛋白3(NLRP3)rs10754558位点C>G和胱天蛋白酶募集域蛋白8(CARD8)rs2043211位点A>T多态性与急性冠脉综合征(ACS)发病的关系。方法 入选450例ACS患者和380例对照组人群，使用ABI Snapshot方法分析NLRP3 rs10754558位点和CARD8 rs2043211位点多态性；冠状动脉造影后以Gensini评分评价冠脉狭窄程度；Elisa测定血清白细胞介素-1β(IL-1β)浓度。结果 NLRP3 rs10754558位点对照组和ACS组基因型频率比较差异有统计学意义(χ2=7.64，P=0.022)，NLRP3 rs10754558位点G等位基因与ACS发病相关(AOR=1.334，95%CI=1.085～1.642，P=0.006)。而CARD8 rs2043211位点两组间基因型频率比较差异无统计学意义(χ2=1.08，P=0.582)，且与ACS发病无明显关系(AOR=1.168，95%CI=0.942～1.449，P=0.156)。ACS患者NLRP3 rs10754558位点GG基因型Gensini评分高于CC基因型(74.07±2.13vs. 42.91±1.80，P<0.001)；IL-1β质量浓度GG基因型显著高于CC基因型[(3.21±2.68)pg/mLvs. (1.37±1.36)pg/mL,P<0.001]。结论 NLRP3 rs10754558位点C>G基因多态性与中国汉族人群ACS发病及冠状动脉狭窄程度有关；G等位基因是ACS发病的危险等位基因，其作用与IL-1β浓度升高有关。

冠状动脉疾病；Nod样受体蛋白3(NLRP3)；胱天蛋白酶募集域蛋白8(CARD8)；多态性；危险因素

急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome, ACS)是以不稳定动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)斑块进展及(或)斑块破裂以及冠状动脉内血栓形成为病理学特点、引起急性心肌缺血发作并最终导致心血管事件发生的一类疾病[1]，目前已成为世界范围内影响人类身心健康的重要社会公共卫生问题。ACS的AS斑块进展及活动与脂质代谢紊乱及全身或血管局部的炎症反应有密切关系。脂质有明确的致炎作用[2]，胆固醇结晶被巨噬细胞吞噬后导致溶酶体破裂，释放蛋白酶类物质，发生炎症反应[3]，形成AS并使斑块活动。在这一过程中，释放的溶酶体导致Nod样受体蛋白3(Nodlike receptor protein 3, NLRP3)炎症小体激活，使后者在致AS的炎症反应中扮演及其重要角色。作为激活的NLRP3炎症小体发挥作用的重要成分，NLRP3与胱天蛋白酶募集域蛋白8(caspase recruitment domain-containing protein 8, CARD8)通过活化半胱天冬酶-1(caspase-1)激活NFkb介导的白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)的转录[4]，局部或全身增多的IL-1β发挥强烈促炎效果，促使AS炎症反应进展，冠状动脉局部AS斑块活动、破裂，导致ACS发病。

NLRP3和CARD8的表达及功能受其上游基因调控。遗传变异会影响NLRP3和CARD8功能，使不同基因型人群患病情况存在差异。许多研究已经证实，NLRP3和CARD8基因多态性与众多慢性炎症性疾病的易感性关联，如腹主动脉瘤[5]、阿司匹林诱发哮喘[6]等。然而，NLRP3 的rs10754558位点C>G和CARD8 的rs2043211位点A>T多态性与ACS的关系尚不清楚。基于以上情况，我们拟在中国汉族人群中研究NLRP3 rs10754558 C>G位点和CARD8 rs2043211 A>T位点基因多态性与ACS发病的关系。

1 材料与方法

1.1 研究对象

本研究为病例对照研究，实施方案按照赫尔辛基准则宣言经西安交通大学第一附属医院伦理委员会同意并经充分告知、征得研究对象同意后实施。本研究样本量估计符合评价样本量估计公式计算要求,公式为N=Uα2ρ(1-ρ)/δ2。根据病史、心电图改变和冠状动脉造影术结果等将入选人群分为对照组或ACS组。对照组样本量由特异性估计，ACS组样本量由敏感性估计。最终入选的830例患者为2012年1月至2014年4月在西安交通大学第一附属医院心内科因胸痛等原因诊治的中国汉族人。其中对照组有380人，男性226人，女性154人，年龄25～75岁，平均年龄(57.49±10.50)岁，被诊断为神经官能症、更年期综合征和反流性食管炎。ACS组450人，男性325人，女性125人，年龄26～81岁，平均年龄(59.30±11.61)岁。入院时即测量体质量(千克)和身高(米)并根据公式计算身体质量指数(BMI)。具有下列任一项即从本研究中排除：急、慢性感染性疾病，严重的肝脏或肾脏疾病，急性或慢性心脏衰竭，恶性肿瘤，急性中风，甲状腺功能低下或慢性消耗性疾病。

1.2 冠状动脉造影术及ACS的判定

冠状动脉造影采用Judkins技术进行。根据冠状动脉造影显示超过一个主要冠状动脉≥50%管腔狭窄来确定为冠心病，无任何冠状动脉狭窄超过50%则可排除冠心病，纳入对照组。狭窄冠状动脉数量和狭窄程度通过Gensini积分反映[7]。由不知晓研究设计的两位心脏病专家判读冠状动脉造影的结果。两位专家的统一意见用于确定冠状动脉狭窄分级。ACS定义为发生冠心病患者心绞痛发作频率、程度、持续时间、缓解方式恶化或冠心病患者确诊发生急性心肌梗死[1]。

1.3 血标本采集及血清生化指标、IL-1β浓度的测定

抽取入选人群肘静脉空腹血10 mL至含有EDTA抗凝的试管中，以3 000 r/min离心血标本10 min，将分离的血清和白细胞分别储存于-80 ℃。血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)、空腹血糖(FBS)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和甘油三酯(TG)均在西安交通大学第一附属医院实验室测定。低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)用Friedewald公式计算获得。血清IL-1β浓度通过ELISA试剂盒(R&D Systems, Minneapolis, MN, USA)测定获得。

1.4 DNA提取及基因分型

1.4.1 DNA提取 使用全血基因组提取试剂盒(离心柱型，型号DP318-03，天根生化科技，北京，中国)，根据制造商提供的说明书在常温下从白细胞中提取基因组DNA。

1.4.2 基因分型 使用ABI Snapshot方法(Applied Biosystems, 美国)进行基因分型。

人们常说，一个谎言要用一百个谎言来弥补、掩盖。而这一百个用来“论证”前一个谎言的谎言，又将出现多少漏洞？又将拉动多少个新的谎言的产生？这是一个连锁反应，让你没完没了地应付。处于这种生活状态的人，能不累吗？哪天撑不住时，说不定就崩溃了。由此，我们不禁对A君心生同情，真希望他能够换一种轻松点的生活方式。

①PCR扩增及产物的纯化。引物由Invitrogen公司设计并合成。NLRP3 rs10754558位点多态性引物序列为：正向引物为5′-CCTGAGCTGACCGTCGTCTT-3′；反向引物为5′-ATGAGGTCACCAAGAGGAACATC-3′；SNaPshot引物序列为ttttttttttttttttttttttttttttttACAGCATCGGGTGTT-GTT；CARD8 rs20432111位点多态性引物序列为：正向引物为5′-ATTGAGACACAGCGTCCAATAG-3′；反向引物为5′-ATGCTATCATCAGGCACCTACC-3′；SNaPshot引物序列为ttttttttttttttttttt-tttttACTCAGGAACAGCACGGA。体系为25 μL，包括10×PCR缓冲液2.5 μL，MgCl2(50 mmol/L)0.8 μL，dNTP(10 mmol/L)0.5 μL，PCR上、下游引物各0.5 μL，DNA模板1 μL，DNA聚合酶0.5 μL，超纯水19 μL。PCR扩增程序为：95 ℃变性5 min，95 ℃变性30 s，56 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共33个循环，最后72 ℃延伸5 min；持续4 ℃。15 g/L琼脂糖凝胶电泳检测，电泳条带清晰，大小正确。用虾碱酶法纯化PCR产物，配制试剂组分及用量如下：在2 μL PCR产物中加入虾碱酶(1 U/μL)0.3 μL、外切酶(20 U/μL)0.2 μL和超纯水7.5 μL，震荡混匀，37 ℃保温1 h 30 min，75 ℃保温15 min灭活虾碱酶和外切酶，4 ℃保存24 h。

②SNaPshot反应。延伸反应包括SNaPshot Multiplex Kit(Applied Biosystems，美国)1.5 μL、纯化后PCR 1 μL、延伸引物混合物0.5 μL，延伸反应程序为：96 ℃ 10 s，51 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s，共25个循环，持续4 ℃。延伸产物的纯化为延伸产物3 μL加入虾碱酶0.3 μL及超纯水1.7 μL震荡混匀，37 ℃保温1 h，75 ℃保温15 min灭活虾碱酶，4 ℃保存24 h。96孔板中加入1 μL上述纯化延伸产物，与GenescanTM-120LIZ Size Standard 0.2 μL(Applied Biosystems, 美国)和去离子甲酰胺8.8 μL混合均匀后，95 ℃变性5 min，直接进行ABI PRISM 3730 DNA 测序仪(Applied Biosystems, 美国)扫板。结果用GeneMapper3.0软件(Applied Biosystems)进行分析。为确定Snapshot的结果，随机选择40个样本并且通过使用BigDye终止仪(Applied Biosystem)直接测序再基因分型。所有测定100%一致。

1.5 统计学分析

分类变量以N(%)表示，连续变量以平均值±标准差表示。所有组的分类变量数据比较采用χ2检验分析，连续变量比较采用t检验分析。使用多因素Logistic回归计算比值比(Odds Ratio,OR)和95%置信区间(95%CI)计算不同的基因型的ACS的相对风险。所有的计算用SPSS17.0软件进行。使用双尾检验P<0.05认为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 入选人群的临床特征

两组左室射血分数、空腹血糖水平差异无统计学意义；在ACS组冠心病危险因素如男性、高龄、吸烟、糖尿病和高血压比例显著高于对照组。与对照组相比，ACS组的血清HS-CRP和总胆固醇显著升高，但HDL-C水平较低(表1)。

表1 对照组和ACS组的基线资料

Tab.1 Baseline characteristics of the controls and ACS subjects

组别对照组(n=380)ACS组(n=450)χ2tP男性[n(%)]226(59.47)325(72.22)15.01 -<0.001年龄(岁)57.49±10.5059.30±11.61 --2.340.020高血压[n(%)]183(48.16)263(58.44)8.77 -0.003糖尿病[n(%)]64(16.84)119(26.44)11.05 -0.001吸烟[n(%)]137(36.05)219(48.67)13.38 -<0.001BMI(kg/m2)24.01±2.8024.33±1.91--1.980.055LVEF(%)58.77±10.1957.65±12.12- 1.420.150Hs-CRP(mg/L)2.71±0.983.19±1.51--5.36<0.001FBS(mmol/L)5.75±1.395.92±1.35--1.810.070TC(mmol/L)3.63±0.913.75±0.72--2.200.028TG(mmol/L)1.47±0.691.55±0.52--1.940.053HDL-C(mmol/L)0.99±0.240.95±0.22- 2.280.023LDL-C(mmol/L)2.13±0.772.21±0.60--1.780.081

ACS：急性冠脉综合征；BMI：体质量指数；LVEF：左室射血分数；Hs-CRP：超敏C反应蛋白；FBS：空腹血糖；TC：总胆固醇；TG：甘油三酯；HDL-C：高密度脂蛋白胆固醇；LDL-C：低密度脂蛋白胆固醇。

2.2 对照组、ACS组NLRP3 rs10754558位点和CARD8 rs2043211位点基因型分布及与ACS发病的关系

χ2检验证实，对照组NLRP3rs10754558位点和CARD8rs2043211位点基因型频率符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律。NLRP3rs10754558位点对照组和ACS组之间各基因型频率比较差异有统计学意义(χ2=7.64，P=0.022)，而CARD8 rs2043211位点两组间各基因型频率比较差异无统计学意义(χ2=1.08，P=0.582)。在校正了年龄、性别、高血压、糖尿病、吸烟、Hs-CRP、TC和HDL-C后，ACS患者和对照组人群NLRP3 rs10754558位点的基因型分布显著不同(GG对CC：AOR 1.749，95%CI1.136～2.691；CC对CG+GG：AOR 1.577，95%CI1.146～2.170；CC+CG对GG：AOR 1.374，95%CI0.939～2.012；G等位基因对C等位基因：AOR 1.334，95%CI1.085～1.642)。而CARD8 rs20432111位点在对照组和ACS组之间分布频率比较差异无统计学意义(表2)。

表2 对照组和ACS组NLRP3 rs10754558位点和CARD8 rs2043211位点基因频率的比较

Tab.2 Genotype frequencies of NLRP3 rs10754558 and CARD8 rs2043211 SNPs in the controls and ACS subjects

基因频率对照组(n=380)ACS组(n=450)AOR(95%CI)PNLRP3rs10754558 CC130(34.21%)131(29.11%)1.000(参考) CG191(50.26%)216(48.00%)1.511(1.075～2.123)0.018 GG59(15.53%)103(22.89%)1.749(1.136～2.691)0.011 显性模型(CCvs.CG+GG)1.577(1.146～2.170)0.005 隐性模型(CC+CGvs.GG)1.374(0.939～2.012)0.102 C等位基因456(59.34%)488(53.11%)1.000(参考) G等位基因304(40.66%)412(46.89%)1.334(1.085～1.642)0.006 HWEχ20.660.59 HWEP0.420.44CARD8rs2043211 AA158(41.58%)183(40.67%)1.000(参考) AT185(48.68%)213(47.33%)1.258(0.919～1.722)0.152 TT37(9.74%)54(12.00%)1.320(0.798～2.185)0.279 显性模型(AAvs.AT+TT)1.270(0.941～1.713)0.118 隐性模型(AA+ATvs.TT)1.170(0.728～1.880)0.517 A等位基因509(65.92%)579(64.33%)1.000(参考) T等位基因251(34.08%)321(35.67%)1.168(0.942～1.449)0.156 HWEχ22.650.44 HWEP0.100.50

ACS：急性冠脉综合征；AOR：校正的比值比；HWE：Hardy-Weinberg平衡定律；95%CI：95%可信区间。

Gensini评分系统是基于冠状动脉造影结果广泛使用的反应冠状动脉粥样硬化严重程度的测定方法。NLRP3 rs10754558位点，131个样本为CC基因型，216个样品为CG基因型，103个样品为GG基因型。CC基因型平均Gensini积分为42.91±1.80，CG基因型平均Gensini积分为59.90±1.64，GG基因型平均Gensini积分为74.07±2.13(图1A)。CARD8 rs2043211位点，数据中183样本为AA基因型，213样本为AT基因型，54个样品为TT基因型。AA基因型平均Gensini积分为58.27±1.98，AT基因型平均Gensini积分为60.10±1.77，TT基因型平均Gensini积分为57.97±3.07(图1B)。图1A所示，GG基因型的Gensini评分明显高于CC基因型和CG基因型Gensini评分(P<0.001)，CG基因型Gensini评分亦显著高于CC基因型(P<0.001)。而CARD8 rs20432111位点各基因型之间没有显著差异。说明携带NLRP3 rs10754558位点G等位基因患者冠状动脉狭窄程度更重。

2.4 NLRP3 rs10754558位点多态性与血清IL-1β水平的关系

为进一步明确NLRP3 rs10754558位点多态性影响ACS发病的病理机制，通过Elisa方法测定了111位对照组入选者及148位ACS患者血清IL-1β浓度。结果显示，ACS组IL-1β浓度明显高于对照组[(2.18±1.92)pg/mLvs.(1.67±1.32)pg/mL，P=0.017，图2A]。在对照组中GG基因型(n=27)IL-1β浓度显著高于CC基因型(n=28)浓度[(2.33±1.42)pg/mLvs. (0.74±0.49)pg/mL，P<0.001，图2B]。在ACS组中GG基因型(n=37)IL-1β浓度显著高于CC基因型(n=39)IL-1β浓度[(3.21±2.68)pg/mLvs. (1.37±1.36)pg/mL，P<0.001，图2C]。

图1 急性冠脉综合征组不同基因型冠状动脉狭窄Gensini评分

Fig.1 The Gensini scores in ACS patients with different genotypes
A：NLRP3 rs10754558位点不同基因型Gensini评分；B：CARD8 rs20432111位点不同基因型Gensini评分。***P<0.001；NSP>0.05。

图2 不同人群血IL-1β浓度的比较

Fig.2 Comparison of the serum levels of IL-1β (pg/mL) in different groups
A：ACS组和对照组IL-1β浓度；B：对照组NLRP3 rs10754558位点不同基因型IL-1β浓度；C：ACS组NLRP3 rs10754558位点CC、CG、GG基因型IL-1β浓度。ACS：急性冠脉综合征；***P<0.001，*P<0.05。

3 讨 论

本研究的目的是确定中国人群NLRP3和CARD8基因多态性与ACS发病关系。据我们所知，这是首次关于NLRP3和CARD8多态性与中国人ACS发病风险之间关系的研究。本研究结果表明，NLRP3 rs10754558位点基因多态性与ACS发病有明显的相关性。携带NLRP3 rs10754558位点的G等位基因的人群比未携带G等位基因人群有更高的患ACS的风险(AOR：1.085～1.642)；进一步对冠状动脉病变严重程度分析显示，携带NLRP3 rs10754558位点的G等位基因的人群比未携带G等位基因人群冠状动脉病变狭窄程度更重。同时，携带NLRP3 rs10754558位点的G等位基因人群血清中IL-1β浓度更高。我们研究结果也显示，CARD8 rs10754558位点基因多态性与ACS发病无关。

AS及其形成的斑块活动是ACS的基本病理学特征，炎症反应在AS的进展中起重要作用。促炎细胞因子，如IL-1β，参与了AS相关炎症反应。炎症小体可以促使许多炎症介质产生并激活，从而参与到血管壁的慢性炎症反应中[8-9]。活化的NLRP3炎症小体包括NLRP3、CARD8、Caspase-1和凋亡相关微粒蛋白(ASC)适配器，炎症小体的活化是AS相关的炎症进程中重要一步[9-10]。NLRP3控制了NLRP3炎症小体形成复合体的组装，使其成为Caspase-1激活的平台从而使IL-1β生成[8]。临床研究已经证实，人外周血单个核细胞NLRP3的mRNA水平与血清中IL-1β浓度呈正相关，而IL-1β参与了AS进程[11]。敲除NLRP3可明显降低IL-1β的产生[12]。因此，NLRP3在加速AS进程并导致斑块活动、促使ACS发病过程中发挥重要作用。

许多研究表明，NLRP3 rs10754558位点多态性与炎性疾病发病有关[5-6]。在本研究中，我们分析了NLRP3 rs10754558位点多态性和ACS之间的关系。对照组和ACS组基因型和临床数据的比较表明，ACS组G等位基因频率高于对照组人群。ACS组男性、高龄、吸烟、糖尿病和高血压比例显著高于对照组，同时Hs-CRP、TC较高而HDL-C低，虽然这些因素作为冠心病危险因素可能影响ACS发病，但统计学分析经校正这些因素后，NLRP3 rs10754558位点为GG基因型人群仍更易患ACS，GG基因型增加了ACS的发病风险，AOR为1.749(95%CI为1.136～2.691)，G等位基因对C等位基因OR值是1.334(95%CI：1.085～1.642)。对所有ACS患者冠状动脉造影结果评价表明，携带NLRP3 rs10754558位点的G等位基因的人群比未携带G等位基因人群冠状动脉病变狭窄程度更重。这些结果表明，NLRP3 rs10754558位点的G等位基因与中国汉族人群ACS发病相关。Elisa结果提示，携带NLRP3 rs10754558位点的G等位基因人群血清中IL-1β浓度更高。由此我们推断，NLRP3 rs10754558位点G等位基因可能通过对NLRP3功能影响使IL-1β产生增多，从而参与到AS进展及活动，导致ACS发生。

人类NLRP3 rs10754558位点的可通过改变NLRP3 mRNA稳定性影响NLRP3 mRNA的表达。rs10754558多态性位点的G等位基因可提高NLRP3 mRNA的的稳定性，进一步研究表明包含rs10754558位点G等位基因的等位基因特异性构建体比含rs10754558的C等位基因的构建体活性高1.3倍[6]。NLRP3 rs10754558位点的基因影响炎症小体的激活，因此改变了不同基因型人群ACS发病状况。据我们所知，还没有研究证明NLRP3 rs10754558多态性在中国ACS患者中的作用。我们的研究结果表明，rs10754558多态性与ACS易感性有关，而G等位基因携带者易于发生ACS。

已证明CARD8与多种炎症疾病相关联[5]。以前的研究报道与来自移植供体的对照组织相比，在人类AS斑块中CARD8的mRNA显著增高，增加的CARD8表达与AS性疾病过程相关[13]。然而，敲除CARD8并不影响IL-1β和IL-Ra mRNA的表达[11]。进一步研究证明，CARD8 rs20432111位点多态性和IL-1β、TNF或IL-18的mRNA表达水平之间无关[13]。以前有关CARD8 rs20432111的多态性和慢性炎性疾病之间的关系的研究存在争议。CARD8 rs20432111位点的T等位基因在强制性脊柱炎中发挥潜在的保护作用[14]。另一方面，rs20432111T等位基因与炎性肠病的发病风险增加有关[15]。我们的观察结果显示，CARD8 rs20432111位点多态性和ACS发病之间没有关联性。这与以前已经提示的rs20432111多态性与心血管风险之间没有找到相关性的研究结果相一致[13-16]。

尽管我们努力全面分析，证明NLRP3 rs10754558位点多态性与ACS之间的关系，但本研究存在一些不足：第一，本研究是单中心研究；第二，本研究入选人群均为中国汉族。因此，后续多中心、多种族、更详细的研究可更深入评估NLRP3 rs10754558和CARD8 rs20432111位点多态性对ACS的影响。

总之，本研究表明，在中国汉族人群中NLRP3 rs10754558基因多态性与ACS发病相关联；在中国人群中NLRP3 rs10754558的G等位基因加重冠状动脉狭窄程度；G等位基因这一作用可能与促进IL-1β产生有关。

[1] CREA F, LIUZZO G. Pathogenesis of acute coronary syndromes[J]. J Am Coll Cardiol, 2013, 61(1):1-11.

[2] 刘俊田. 动脉粥样硬化发病的炎症机制的研究进展[J]. 西安交通大学学报(医学版), 2015 (2):141-152.

[3] DUEWELL P, KONO H, RAYNER KJ, et al. NLRP3 inflammasomes are required for atherogenesis and activated by cholesterol crystals[J]. Nature, 2010, 464(7293):1357-1361.

[4] LUO B, LI B, WANG W, et al. NLRP3 gene silencing ameliorates diabetic cardiomyopathy in a type 2 diabetes rat model[J]. PLoS One, 2014, 9(8):e104771.

[5] ROBERTS RL, Van RIJ AM, PHILLIPS LÜ, et al. Interaction of the inflammasome genes CARD8 and NLRP3 in abdominal aortic aneurysms[J]. Atherosclerosis, 2011, 218(1):123-126.

[6] HITOMI Y, EBISAWA M, TOMIKAWA M, et al. Associations of functional NLRP3 polymorphisms with susceptibility to food-induced anaphylaxis and aspirin-induced asthma[J]. J Allergy Clin Immunol, 2009, 124(4):779-785.

[7] GONG P, LUO SH, LI XL, et al. Relation of ABO blood groups to the severity of coronary atherosclerosis: an Gensini score assessment[J]. Atherosclerosis, 2014, 237(2):748-753.

[8] SCHRODER K, ZHOU R, TSCHOPP J. The NLRP3 inflammasome: a sensor for metabolic danger?[J]. Science, 2010, 327(5963):296-300.

[9] XIAO H, LU M, LIN TY, et al. Sterol regulatory element binding protein 2 activation of NLRP3 inflammasome in endothelium mediates hemodynamic-induced atherosclerosis susceptibility[J]. Circulation, 2013, 128(6):632-642.

[10] WEN H, TING JP, O’NEILL LA. A role for the NLRP3 inflammasome in metabolic diseases—did Warburg miss inflammation?[J]. Nat Immunol, 2012, 13(4):352-357.

[11] TANGI TN, ELMABSOUT AA, BENGTSSON T, et al. Role of NLRP3 and CARD8 in the regulation of TNF-alpha induced IL-1beta release in vascular smooth muscle cells[J]. Int J Mol Med, 2012, 30(3):697-702.

[12] SATOH M, TABUCHI T, ITOH T, et al. NLRP3 inflammasome activation in coronary artery disease: results from prospective and randomized study of treatment with atorvastatin or rosuvastatin[J]. Clin Sci (Lond), 2014, 126(3):233-241.

[13] PARAMEL GV, FOLKERSEN L, STRAWBRIDGE RJ, et al. CARD8 gene encoding a protein of innate immunity is expressed in human atherosclerosis and associated with markers of inflammation[J]. Clin Sci (Lond), 2013, 125(8):401-407.

[14] KASTBOM A, KLINGBERG E, VERMA D, et al. Genetic variants in CARD8 but not in NLRP3 are associated with ankylosing spondylitis[J]. Scand J Rheumatol, 2013, 42(6):465-468.

[15] LIU J, LIU YY, LIU J, et al. Association between CARD8 rs2043211 polymorphism and inflammatory bowel disease: a meta-analysis[J]. Immunol Invest, 2015, 44(3):253-264.

[16] GARCIA-BERMUDEZ M, LOPEZ-MEJIAS R, GONZALEZ-JUANATEY C, et al. CARD8 rs2043211 (p.C10X) polymorphism is not associated with disease susceptibility or cardiovascular events in Spanish rheumatoid arthritis patients[J]. DNA Cell Biol, 2013, 32(1):28-33.

(编辑 卓选鹏)

Association of NLRP3 rs10754558 and CARD8 rs2043211 polymorphisms with the occurrence of acute coronary syndrome

ZHOU Dong, WANG Xin-hong, ZHOU Juan, FAN Yan, WAN Zhao-fei, LIU Yang, YUAN Zu-yi

(Department of Cardiovascular Medicine, the First Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University, Xi’an 710061, China)

Objective To investigate the potential association of the Nodlike receptor protein 3 (NLRP3) rs10754558 and caspase recruitment domain-containing protein 8 (CARD8) rs2043211 SNPs with the occurrence of acute coronary syndrome (ACS). Methods The NLRP3 rs10754558 and CARD8 rs2043211 SNPs were analyzed using the ABI PRISM-Snapshot multiplex method in 450 Chinese Han patients with ACS and 380 controls in the case-control study. Coronary angiography was performed to evaluate the severity of coronary atherosclerosis by Gensini score. The content of IL-1β in serum was determined by ELISA. Results The difference in rs10754558 allele frequency between the control group and the ACS group was significant (χ2= 7.64,P=0.022). The NLRP3 rs10754558 G allele was significantly associated with the occurrence of ACS (AOR=1.334, 95%CI=1.085-1.642,P=0.006), while CARD8 rs2043211 polymorphism was not involved (χ2=1.08,P=0.582). Patients with GG genotype of NLRP3 rs10754558 had a higher Gensini score than those with CC genotype (74.07±2.13vs. 42.91±1.80,P<0.001). There was no significant difference in Gensini score among ACS patients with different genotypes of CARD8 rs2043211. In the ACS group, the level of IL-1β in patients with GG genotype of NLRP3 rs10754558 was significantly higher than those patients with CC genotype (3.21±2.68vs. 1.37±1.36 pg/mL,P<0.001). Conclusion The NLRP3 rs10754558 polymorphism is involved in the occurrence of ACS and the severity of coronary atherosclerosis in the Chinese Han population. G allele is the risk allele of ACS. The role of G allele may be associated with elevated level of IL-1β.

coronary artery disease; Nodlike receptor protein 3 (NLRP3); caspase recruitment domain-containing protein 8 (CARD8); polymorphism; risk factor

2015-03-22

2015-05-07

国家自然科学基金资助项目(No.81025002) Supported by the National Natural Science Foundation of China(No.81025002)

袁祖贻. E-mail：zuyiyuan@mail.xjtu.edu.cn.

R541.4

A

10.7652/jdyxb201601013

优先出版：http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1399.R.20151209.1716.022.html(2015-12-09)