CirQ-life保恩素胶囊毒性研究

卜荣华， 吕文平， 钟海燕， 张迎庆， 李小莉

(1 湖北工业大学食品与制药工程学院， 湖北 武汉 430068; 2 香港海宸科技有限公司，香港 999077)



CirQ-life保恩素胶囊毒性研究

卜荣华1， 吕文平1， 钟海燕2， 张迎庆1， 李小莉1

(1 湖北工业大学食品与制药工程学院， 湖北 武汉 430068; 2 香港海宸科技有限公司，香港 999077)

[摘要]目的：观察CirQ-life保恩素胶囊的安全性。方法：采用小鼠急性毒性试验、小鼠骨髓微核试验、大鼠30 d喂养等试验方法进行各项实验。结果：小鼠急性经口毒性最大耐受剂量(MTD)均大于8414 mg/kg(BW)，为无毒物，其对小鼠骨髓染色体无明显损伤作用。30 d喂养试验表明CirQ-life保恩素胶囊各剂量组对大鼠体重、食物利用率、血液学、血液生化、脏体系及病理组织等指标与正常对照组比较，均无显著性差异。结论：在本实验剂量范围和条件下， CirQ-life保恩素胶囊属实际无毒食品，短期使用无毒副作用。

[关键词]急性毒性； 遗传毒性； 30天喂养试验

CirQ-life保恩素胶囊是由蜂王浆、牛初乳、甘草提取物、大豆异黄酮、亚麻籽提取物等组成的女用营养性食品，能帮助成熟妇女改善由于内源性雌激素分泌不足引起的中枢神经系统、骨、血管壁等器官的疾病[1-2]，牛初乳、甘草、亚麻籽能调节雌激素水平，降血脂，抗氧化，健脑，明目，增强机体免疫功能，对更年期妇女预防或减轻心血管疾病、延缓衰老、提高机体免疫力有一定的帮助[3-6]。为观察该产品的安全性，笔者对CirQ-life保恩素胶囊进行了小鼠急性毒性试验、小鼠骨髓微核试验及大鼠30 d喂养试验研究 ，以期为该产品的安全性毒理学评价提供实验依据。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1受试物样品CirQ-life保恩素胶囊，内为浅灰色粉末，由香港海宸科技有限公司提供。人体推荐每日摄入量为2粒/天，即610 mg/人·d。

1.1.2试验对象选用SPF级健康动物。昆明种小鼠20只，雌雄各半，体重18~22 g；昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重25~30 g； Wistar种大鼠80只，雌雄各半，体重75~93 g。试验动物均由湖北省疾病控制中心动物研究所提供，实验动物生产许可证号SCXK(鄂)2008-0005。实验动物饲养条件：动物房温度20~24℃，相对湿度为50%~70%。饲料、垫料均由湖北省疾病控制中心动物研究所提供。

1.1.3主要仪器与试剂希森美康KX-21全自动血球计数仪，日本希森美康公司生产；魅力2000型全自动生化分析仪，美国MD公司生产。生化试剂均购自珠海贝索生物技术有限公司。

1.2方法

1.2.1急性经口毒性试验采用最大耐受剂量法[7]。选取适应饲养后的健康小鼠20只，雌、雄各半，体重18~22 g，取12 200 mg(40粒)CirQ-life保恩素胶囊，用蒸馏水稀释至58.0 mL。经口一次性灌胃0.4 mL/10 g(BW)。灌胃前，小鼠禁食不禁水过夜；灌胃后。自由饮食。观察2周，记录小鼠一般状态、体重变化、中毒表现及死亡情况。

1.2.2小鼠骨髓细胞微核试验采用间隔24 h两次经口灌胃法[7]。选取健康昆明种小鼠50只，体重25~30 g，雌雄各半，随机分为5组，10只/组，分别为CirQ-life保恩素胶囊305，610，1220 mg/kg(BW)3个剂量组、阳性对照组(环磷酰胺cp：40 mg/kg(BW))和空白对照组。以0.2 mL/l0 g(BW)灌胃，连续2d。末次给样后6 h，颈椎脱臼处死动物，取股骨用小牛血清冲洗骨髓腔，制成细胞器悬液涂片，甲醇固定，Giemsa染色。光学显微镜下，每只动物计数1000个嗜多染红细胞(PCE)，微核发生率以含微核的PCE千分率计，按χ2检验统计处理。计数200个嗜多染红细胞，计算嗜多染红细胞与成熟红细胞的比值(PCE/NCE)。

1.2.330 d喂养试验采用短期喂养实验法[8]。选取健康大鼠80只，雌雄各半，雄鼠体重为84.20±6.93 g，雌鼠体重83.75±6.78 g。将实验动物随机分成CirQ-life保恩素胶囊低、中、高 3个剂量和空白对照4个组，每组20只，雌雄各半。CirQ-life保恩素胶囊低、中、高三个组剂量分别为305, 610, 1220 mg /kg(BW)(约为人体推荐量的25, 50, 100倍)。以每天1 mL/100 g (BW)灌胃，空白对照组给予相同容量的蒸馏水，连续30d。实验期间动物自由摄食饮水，每天观察动物的活动和生长情况，每周称量并记录动物体重和食物摄入量。实验末，禁食16 h，取血测定血液常规和血液生化指标。取血后处死动物作大体解剖，称肝、肾、脾、睾丸、卵巢重量，计算脏/体比值。将肝、肾、脾、胃、十二指肠、睾丸、卵巢等脏器固定保存，高剂量和空白对照组大鼠的主要脏器进行病理切片检查。

1.2.4统计分析实验数据采用SPSS11.0软件包进行处理分析。

2结果与讨论

2.1急性经口毒性试验

以剂量为8414 mg/kg·BW的CirQ-Life保恩素胶囊分别给两种性别的昆明种小鼠灌胃，观察14 d，小鼠进食、行为活动均正常，未见明显中毒症状或不良反应，且无小鼠死亡。第15天将小鼠处死进行解剖检查，肝、脾、肾、胃、肠、心、肺等主要脏器未见明显异常改变。CirQ-Life保恩素胶囊对雌、雄昆明种小鼠的最大耐受剂量(MTD)大于8 414 mg/kg·BW。根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)中的急性毒性分级标准，CirQ-Life保恩素胶囊属实际无毒物质(表1)。

表1　Cir-Q Life保恩素胶囊急性毒性试验结果

2.2小鼠骨髓细胞微核试验

CirQ-Life保恩素胶囊各剂量组微核率与对照组比较无显著性差异(P>0.05)，而环磷酰胺组与阴性对照组比较差异有非常显著性(P<0.01)。说明所用动物敏感，试验可靠。由试验结果可知，CirQ-Life保恩素胶囊对小鼠骨髓细胞未见损伤作用(表2)。

表2　CirQ-Life保恩素胶囊对小鼠骨髓微核发生率的影响

与空白组比较：*p<0.05,**p<0.01

2.3大鼠30 d喂养试验

2.3.1对大鼠表征、行为、体重的影响试验期间大鼠毛发有光泽、口鼻无溃疡，自由摄食、饮水正常，生长发育良好，体重呈增长趋势，未见明显中毒症状。CirQ-Life保恩素胶囊各剂量组大鼠体重、摄食量和食物利用率与对照组以及各组剂量之间比较，差异均无显著性意义(P>0.05)，表明受试物对大鼠生长无不良影响(表3)。

2.3.2对大鼠血常规的影响CirQ-Life保恩素胶囊各剂量组血常规指标与对照组比较，差异均无显著性意义(P>0.05)，表明该受试样品30 d喂养试验血常规指标正常(表4)。

2.3.3对大鼠血液生化指标的影响CirQ-Life保恩素胶囊各剂量组血清生化指标与对照组比较，均无显著性差异(P>0.05)，说明该受试样品经30 d喂养试验，对实验动物的生化指标均无影响(表5)。

表3　CirQ-Life保恩素胶囊对大鼠体重和食物食物利用率的影响±S，n=10)

表4　CirQ-Life保恩素胶囊对大鼠血常规的影响

表5　CirQ-Life保恩素胶囊对大鼠血液生化指标的影响

表6　CirQ-Life保恩素胶囊对大鼠血液生化指标的影响

2.3.4对大鼠主要脏器湿重及脏体比的影响与对照组比较，CirQ-Life保恩素胶囊雌性中剂量组大鼠卵巢脏体比差异有显著性意义(P<0.05)，但卵巢湿重与对照组相比无显著性差异(P>0.05)，故认为无生物学意义。其他雌雄各剂量组大鼠脏器湿重及脏体比与对照组比较，差异均无显著性意义(P>0.05)。提示CirQ-Life保恩素胶囊对大鼠主要脏器湿重及脏体比无明显影响(表7~表8)。

表7　CirQ-Life保恩素胶囊对大鼠肝、脾、肾湿重及脏体比的影响

表8　CirQ-Life保恩素胶囊对大鼠性腺湿重及脏体比的影响

与空白组比较：*p<0.05

2.3.5病理组织学检查CirQ-Life保恩素胶囊各组大鼠心、肝、脾、肾、胃、小肠和性腺等器官的大体检查，未见异常。高剂量组和对照组雌、雄各2例大鼠出现少许肝细胞浊肿和轻度脂肪变性，汇管区和干索间有少许炎细胞浸润。其为实验动物的自发性感染，高剂量组大鼠肝脏出现轻度病理改变的数量和性质与对照组比较均无显著性差异(p>0.05)。其余动物的心、肝、脾、肾、胃、十二指肠、睾丸、卵巢组织结构均正常，未见与CirQ-Life保恩素胶囊有关的病理组织学改变。

3结论

本实验结果显示，小鼠的急性毒性MTD均大于8 414 mg/kg(BW)；在试验剂量305 ~1 220 mg/kg范围内，未发现对试验小鼠骨髓嗜多染红细胞有致突变作用，CirQ-Life保恩素胶囊各剂量组小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率均在正常值范围内(P>0.05)； 30 d喂养试验，未发现对试验大鼠的生长发育、 血液学、生化、脏体比及组织病理学有明显不良影响。 表明该食品在本实验剂量范围和条件下，短期食用对动物无毒副作用，初步认为CirQ-Life保恩素胶囊无毒，属安全性食品。由于CirQ-Life保恩素胶囊为女用营养性食品，故未做小鼠精子畸形试验。后续将进行Ames试验、哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验等工作。

[参考文献]

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[2]An J，Tzagarakis-Foster C，Scharschmidt TC, et al. Estrogen receptor beta-selective transcriptional activity and recruitment of coregulators by phytoestrogens [J]．J Biol Chem，2001，276(21)：17808-17814．

[3]徐丽，生庆海，郭顺堂．不同剂量牛初乳粉对小鼠免疫调节作用的研究 [J]．食品科学，2005，11：54-57．

[4]王建平，阿里木帕塔尔，张丹凤．牛初乳粉的保健功能研究[J]． 新疆农业科学，2008，39(2)：91-94．

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[6]赵利，党占海．亚麻籽的保健功能和开发利用[J]．中国油脂，2006，31(3)：71-74．

[7]中华人民共和国卫生部．GB15193．1保健食品检验与评价技术规范[S]．北京：中国标准出版社，2003：177-199．

[8]中国国家标准汇编．GB15193-2003食品安全性毒理评价程序和方法[S]．北京：中国标准出版社，2004：17-55．

[责任编校： 张众]

Study of Cir-Q Life Baoensu Capsules on The Toxicity

BU Ronghua1, LV Wenping1, ZHONG Haiyan2，ZHANG Yingqing1，LI Xiaoli1

(1FoodandPharmaceuticalEngin.College，HubeiUniv.ofTech.，Wuhan430068,China；2HongKonghaiSenBiotechnologyLimited，Hongkong999077，China)

Abstract：The study observed the toxicological safety of Cir-Q Life Baoensu capsules,through acute toxicity tests, bone marrow cell micronucleus test and feeding tests of thirty days. Results are as follows. The daily maximum toxicity dose of Cir-Q Life Baoensu in mice was 8414 mg (BW) which was innocuous substance. Cir-Q Life Baoensu on the bone marrow cell micronucleus test was negative. Compared with control group，the body weight，food utilization rate，full blood count，blood biochemistry，organ/body weigh ratios, and the histopathological examination had no significant differences on the rats after thirty-day feeding．It has been proven that Cir-Q Life Baoensu capsules is actually non-toxic and may be regarded as the safe foods used in the human body.

Keywords：Cir-Q Life Baoensu capsules； acute toxicity； Micronucleus； 30-day feeding study

[中图分类号]TS218

[文献标识码]：A

[文章编号]1003-4684(2016)01-0089-04

[作者简介]卜荣华(1979-)， 女， 湖北武汉人，湖北工业大学硕士研究生，研究方向为食品和保健食品[通讯作者] 李小莉(1959-)，女，湖北武汉人，湖北工业大学教授，研究方向为新药研发及天然提取物的药理学

[收稿日期]2015-10-08