绵羊肠毒血症的诊断与防治

2016-03-31张西云范玉霞李生庆胡国元李志宁李秀萍王亭亭刘怀新青海省畜牧兽医科学院青海西宁810016

中国兽医杂志 2016年1期

张西云，范玉霞，李生庆，胡国元，李志宁，李秀萍，王亭亭，黄　荣，刘怀新（青海省畜牧兽医科学院，青海西宁810016）

绵羊肠毒血症的诊断与防治

张西云，范玉霞，李生庆，胡国元，李志宁，李秀萍，王亭亭，黄荣，刘怀新
（青海省畜牧兽医科学院，青海西宁810016）

青海省祁连县默勒镇外日沟乡从2006年7月转入夏季草场开始发生绵羊死亡，死亡的绵羊多为当年的羔羊和2岁以内的羊，从夏季草场转入秋季草场放牧时（9月份）绵羊死亡数进入高峰期。从2007年开始，该镇另外两个村多隆、老日当村也相继发生绵羊大量死亡，至今累计死亡3 358只，据当地牧民介绍每天每家至少死亡5～7只，有的牧户家已死亡80余只，给他们带来了巨大的经济损失。发病羊群均已进行了药物驱虫工作，并正常接种过羊四联疫苗（猝疽、羔羊痢疾、快疫、肠毒血症）。

2008年8月，我们在发病地区采集了4份病死羊脏器及肠内容物，进行了病原诊断和菌苗研制，报告如下。

1　病原诊断

1.1临床症状病程约1～3 d，多数病羊晚上入圈时看不出症状，早晨放牧时发现死于圈中，主要症状为食欲废绝，跌倒后四肢划动呈游泳状，头向一侧仰，抽搐，很快死亡。

1.2剖检变化死亡羊只除肾脏软化外，心、肝、脾、肺等脏器均未见到明显病理变化。少数羊只心包液增量呈淡黄色，心脏扩张，心肌松软，肺脏充血、水肿，肾脏实质柔软松驰，肝脏肿胀、质脆，淋巴结切面湿润，小肠黏膜充血，死羊腹部膨胀。

1.3细菌分离和鉴定

1.3.1细菌分离取肠内容物，分别接种于厌气肝汤和鲜血琼脂平板，37℃培养24 h，涂片见到产气荚膜梭菌，然后接种该培养物于鲜血琼脂平板上，挑取溶血菌落，得到纯培养物。

1.3.2细菌的特性：

1.3.2.1生长特性本菌在厌气肝汤中3～4 h即开始产气，24 h生长停止，并开始沉降，在鲜血琼脂平板上厌气培养，24 h开始生长，48 h可见圆形略隆起、灰白色半透明的菌落，菌落周围有溶血环。

1.3.2.2毒素测定分自4只羊的四株菌对小鼠的最小致死量分别为400、400、1 600 MLD/mL及400 MLD/mL。

1.3.2.3细菌的型别分离到的4株细菌的毒素都能被D型产气荚膜梭菌抗血清中和。

2　肠毒血症菌苗的研制

2.1制苗用培养基牛肉胃酶消化液培养基：牛肉胃酶消化液10 000 mL（常规方法制造），蛋白胨50 g，示胨50 g，Na2HPO4·12H2O 100 g，糊精100 g，pH值8.5，10磅40分。

2.2菌苗制造方法

2.2.1菌液制备培养基经高压后，凉至38℃左右时立即接种，种子量为1%，放37℃温室培养24 h。

2.2.2毒价测定逐瓶吸取2 mL菌液，与等量的含0.25%胰酶（效价1∶250）的1%碳酸钠液混合，置37℃作用40～60 min，4 000 r/min离心10 min、稀释、测毒。

2.2.3菌苗制造在纯检合格的菌液中加1%甲醛溶液，置于37℃杀菌、脱毒，21 d，过滤后加入无菌的20%氢氧化铝胶溶液，使菌苗中氢氧化铝含量达7 mg/mL，分装、检验、备用。

2.3菌苗效力：

2.3.1家兔效力检验0901、1001、1002及1101四批菌苗分别用体重1.5～2 kg的健康家兔，随机分成4组（1002批2组），免疫组皮下注苗0.1、0.5、1 mL，每组4只，对照组2只，均为皮下注射。饲养至21 d，静脉攻毒。

2.3.2绵羊效力检验0901、1002、1101及1201四批菌苗分别用体重30～40 kg的健康绵羊，随机分为11组，每批菌苗按0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL分别免疫3组（1201批2组），每组4只，均为肌肉注射，免疫18 d后连同对照2只静脉攻毒，观察记录死亡情况。

3　结果

3.1诊断根据流行病学、临床症状，剖检变化，细菌分离、毒素测定及中和试验诊断为D型产气荚膜梭菌引起的肠毒血症。

3.2菌株产毒情况经过4年试验，用牛肉消化培养基，其产毒素的能力最高可达4万MLD/mL，少数为5 000 MLD/mL（制苗时废弃），多数为2～1 万MLD/mL。

表1　2009- 2012年菌株产毒情况

表2　2009- 2012年各批菌苗毒价情况

3.3效检结果

3.3.1家兔效检结果3批菌苗以0.1 mL免疫，3批均3/4保护，攻毒量1～2个家兔MLD，效果良好。4批菌苗以0.5 mL免疫，3批4/4保护，1批3/4保护，攻毒量1～3个家兔MLD，效果良好。3批菌苗以1 mL免疫，2批3/4保护，1批2/4保护，攻毒量1～5个家兔MLD，效果良好。

3.3.2绵羊效检结果4批菌苗以0.5 mL免疫，2 批4/4保护，2批3/4保护，而且攻毒量均较大，多数攻6～8个绵羊MLD，效果良好。4批菌苗以1.0 mL免疫，3批4/4保护，1批3/4保护，攻毒量更大，多数攻8～10个绵羊MLD，效果更好。3批菌苗以2.0 mL免疫，全部4/4保护，攻毒量更大，多数攻12～15个绵羊MLD，效果很好。