五子衍宗丸中脂肪酸的气相色谱-质谱分析

谭 为 黄旭晖 付婷婷 丘伟中 闵存云 王昌俊

五子衍宗丸中脂肪酸的气相色谱-质谱分析

谭 为 黄旭晖 付婷婷 丘伟中 闵存云 王昌俊

目的明确五子衍宗丸中脂肪酸的组成和含量。方法采用索氏提取法对五子衍宗丸中的脂肪油进行提取，甲酯化后，利用气相色谱-质谱联用仪对其脂肪酸的组成和含量进行分析测定。结果五子衍宗丸中共测出19种脂肪酸，其中饱和脂肪酸9种，不饱和脂肪酸10种。其绝对含量分别为十四烷酸的含量为0.050%，十五烷酸甲酯的含量为0.004%，十六烷酸的含量为0.379%，十六烯酸的含量为0.005%，十七烷酸的含量为0.034%，十七碳烯酸甲酯的含量为0.002%，十八烷酸的含量为0.066%，十八烯酸的含量为0.447%，十八碳二烯酸的含量为1.080%，γ-十八碳三烯酸的含量为0.920%，α-十八碳三烯酸的含量为0.213%，二十烷酸的含量为0.005%，二十碳烯酸的含量为0.002%，HOMO-γ-二十碳三烯酸的含量为0.001%，二十二烷酸的含量为0.008%，二十二碳烯酸的含量为0.001%，二十三烷酸的含量为0.001%，二十四烷酸的含量为0.006%，二十四碳烯酸的含量为0.001%。结论五子衍宗丸含有的多种脂肪酸成分可能是其部分药理作用的基础。

五子衍宗丸;脂肪酸;气相色谱-质谱联用

【Author's address】 Guangdong General Hospital＆Guangdong Academy of Medical Sciences，Guangdong Geriatric Institute，Guangzhou，510080，China

五子衍宗丸由菟丝子、枸杞子、覆盆子、五味子及车前子组方，是著名的补肾良方。方中菟丝子性温，入肾经，以壮肾阳;枸杞子性甘平，入肾经，补阴益精;覆盆子性微温，归肾经，温肾固精;五味子性温，味酸甘，酸甘化阴，能补肝肾之阴;车前子利湿固气，具有很好的补肾填精作用。全方阴阳双补，阴中求阳，且邪有出路，兼顾填补肾气，为方中之上品。据考证该方起源于唐代道教的《悬解录》中，书中有张果献给唐玄宗的五子守仙丸方，即是五子衍宗方的原貌［1］。1977年版药典收载并更名为五子补肾丸，1985年至2010年版药典收载为五子衍宗丸，具有补肾益精、种嗣衍宗之功，主要用于肾虚精亏所致的阳痿不育、遗精早泄、腰痛、尿后余沥。被誉为古今“种子第一方”，还被誉为“补阳方药之祖”，有“五子壮阳、六味滋阴”之说(五子即五子衍宗丸，六味即六味地黄丸)。现代药理研究表明［2-3］，五子衍宗丸作用广泛。其在生殖系统方面能够提高睾丸细胞存活率，同时可增强精子活力，达到促进生殖功能作用［4］。在神经系统方面能降低神经功能损害来防治阿尔兹海默症。此外，因其能调节免疫、抑制氧化反应等作用，在抗肿瘤领域也有一定的成效［5］。研究表明，众多单味中药及中药复方有抗疲劳作用［6-7］。我们前期研究表明［8-9］，五子衍宗丸对乳腺癌小鼠的化疗相关性疲劳有明显的缓解作用，发现给予五子衍宗丸干预的乳腺癌小鼠血浆中的神经酸水平明显提高。因此，我们推测神经酸可能是缓解乳腺癌小鼠化疗相关性疲劳的主要物质之一。为进一步明确五子衍宗丸中是否含有神经酸我们进行了本研究，现报告如下:

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

菟丝子(批号:141204701)、枸杞子(批号:150307901)、覆盆子(批号:150302691)、五味子(批号:150306591)及车前子(批号:150304711)，均购自康美药业股份有限公司。双蒸水、甲醇、乙醇、盐酸、乙醚、氢氧化钠、三氟化硼、异辛烷、氯化钠、无水硫酸钠等均为分析纯。

1.2 仪器与设备

Thermo Trace1300/ISQ型气相色谱-质谱联用仪(赛默飞世尔科);RE-52C旋转蒸发仪(亚荣生化仪器厂);BS110S型电子天平(赛多利斯天平公司)。

1.3 方法

1.3.1 脂肪油的提取

五子衍宗丸(按药典中处方比例，枸杞子∶菟丝子∶覆盆子∶五味子∶车前子=8∶8∶4∶1∶2)采用索氏提取法提取油脂，方法参考国家标准GB/T14772-2008《食品中粗脂肪的测定》。

1.3.2 脂肪油的甲酯化

将提取的油脂加入8mL2%的氢氧化钠-甲醇溶液，80℃回流至油珠完全消失，冷却后加入7mL15%三氟化硼-甲醇溶液，80℃回流5min后迅速冷却，加异辛烷10mL，振摇5min，加入饱和氯化钠溶液使有机层至瓶口，移取5mL有机层至离心管中，加入3 g无水硫酸钠，轻轻振摇，过0.25μm有机滤膜，供GC-MS分析用。

1.3.3 脂肪酸的分析鉴定

色谱条件:色谱柱为 DB-WAX(30 m×0.25mm ×0.25μm);进样口温度250℃;程序升温:初始温度70℃，以5℃/min升至250℃，保持5min检测结束。载气为氦气，进样量为0.2μL，气化温度280℃;载气流量1mL/min，分流比为100∶1。

质谱条件:离子源为电子轰击源;离子源温度为230℃;电离电压为70 eV;电子倍增器电压为1988 V;发射电流为34.6μA;接口温度为230℃;扫描范围为50～550 m/z。

定性分析:取经2.3.2项处理过的样品0.4μL，用GC-MS进行分析鉴定。通过Thermo Xcalibur3.0.63化学工作站数据处理系统，检索NIST MS Seach2.2质谱图库，确定样品中各个化学成分。

定量分析:通过Thermo Xcalibur3.0.63化学工作站数据处理系统，分别求得各化学成分的绝对含量。

2 结果

经GC-MS分析，五子衍宗丸脂肪酸甲酯总离子流谱图如图1所示。GC-MS分析结果见表1。由表1可知，五子衍宗丸中共测出19种脂肪酸，其中十四烷酸、十五烷酸甲酯、十六烷酸、十七烷酸、十八烷酸、二十烷酸、二十二烷酸、二十三烷酸、二十四烷酸等9种脂肪酸为饱和脂肪酸;十六烯酸、十七碳烯酸甲酯、十八烯酸、十八碳二烯酸、γ-十八碳三烯酸、α-十八碳三烯酸、二十碳烯酸、HOMO-γ-二十碳三烯酸、二十二碳烯酸、二十四碳烯酸等10种脂肪酸为不饱和脂肪酸。各种脂肪酸的绝对含量分别为十四烷酸(肉豆蔻酸)的含量为0.050%，十五烷酸甲酯的含量为0.004%，十六烷酸(软脂酸)的含量为0.379%，十六烯酸的含量为0.005%，十七烷酸的含量为0.034%，十七碳烯酸甲酯的含量为0.002%，十八烷酸的含量为0.066%，十八烯酸的含量为0.447%，十八碳二烯酸的含量为1.080%，γ-十八碳三烯酸(亚油酸)的含量为0.920%，α-十八碳三烯酸(亚油酸)的含量为0.213%，二十烷酸的含量为0.005%，二十碳烯酸的含量为0.002%，HOMO-γ-二十碳三烯酸(亚麻酸)的含量为0.001%，二十二烷酸的含量为0.008%，二十二碳烯酸的含量为0.001%，二十三烷酸的含量为0.001%，二十四烷酸的含量为0.006%，二十四碳烯酸的含量为0.001%。

3 讨论

本研究运用GC-MS方法，分析了五子衍宗丸中的脂肪酸的含量及成分，结果表明，五子衍宗丸中含有9种饱和脂肪酸、10种不饱和脂肪酸。脂肪是机体结构的一部分。植物油脂是饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸的重要来源。目前对不饱和脂肪酸的研究较多，主要有降血糖、调节血脂、降胆固醇和抗血栓形成、防治心血管病、促进生长发育等［10］。饱和脂肪酸一向被认为是“坏”脂肪酸，但有研究证明并非如此［11］。饱和脂肪酸能通过调节脂代谢，减少氧化应激，减少炎症及纤维化等多方面对酒精性肝病进行防治［12］。此外，饱和脂肪酸还能提高精液质量，进食2周饱和脂肪酸的公猪的精子细胞外膜的组成发生独特变化，有利于保持其精子活性［13］。这些不饱和脂肪酸及饱和脂肪酸可能是五子衍宗丸发挥作用的物质基础之一。我们前期研究发现［8］，给予五子衍宗丸干预的乳腺癌小鼠血浆中的神经酸水平明显提高。神经酸属于二十四碳烯酸类的脂肪酸，又名鲨鱼酸，学名顺-15-二十四碳烯酸，是一种ω-9型低不饱和度、长碳链脂肪烯酸，为人体非必需脂肪酸。神经酸是一种神经营养因子，能完整通透过血脑屏障，也是神经细胞膜的重要组成部分，对离子通道和受体起着重要的调节作用，有恢复神经末梢

图1 五子衍宗丸脂肪酸甲酯总离子流色谱图

表1 五子衍宗丸脂肪油中脂肪酸的组成及相对含量

活性，促进神经细胞生长和发育的功能［14］。以往神经酸都是从深海鲨鱼油或鲨鱼脑中提取。现代研究表明很多植物含有神经酸，但神经酸的含量相对较低。大多在含油脂量高的植物中(尤其是含油脂的果实)，其中包括很多中药［15］。五子衍宗丸复方中的五味中药为植物的种子或果实，里面含有比较丰富的脂肪酸。本研究的结果表明五子衍宗丸复方中含有神经酸。结合前期研究结果，我们可以推测，通过额外补充体内神经酸的水平而发挥缓解乳腺癌小鼠化疗相关性疲劳的作用可能是其作用机制之一。五子衍宗丸广泛的药理作用可能与其独特的脂肪酸组成有关。

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Gas Chromatography-Mass Spectrometry Analysis of Fatty Acids in Compound Wuziyanzong Pill

TAN Wei，HUANG Xuhui，FU Tingting，et al

ObjectiveThe fatty acids were extracted from compound Wuziyanzong Pill and analyzed by gas chromatography-mass spectrometry(GC/MS).MethodsThe fatty acids of compound Wuziyanzong Pill were extracted by Soxhlet extraction，and their fatty acid compositions and content were analyzed by GC-MS.ResultsThe results of GC-MS analysis showed that19 acids are found in compound Wuziyanzong Pill and10 of them were unsaturated fatty acids，and the rest were saturated fatty acids.The absolute content of tetradecanoic acid was0.050%，pentadecanoate acid was0.004%，hexadecanoic acid was0.379%，hexadecenoic acid was0.005%，margatic acid was0.034%，heptadecenoic was0.002%，octadecanoic acid was0.066%，oleic acid was0.447%，octadecadienoic acid was1.080%，6，9，12-octadecatrienic acid was0.920%，9，12，15-octadecatrienic acid was0.213%，eicosanoic acid was0.005%，eicosenoic acid was0.002%，8，11，14-eicosatrienoic acid was0.001%，docosanoic acid was0.008%，docosenoic acid was0.001%，tricosanoic acid was0.001%lignoceric acid was0.006%，nervonic acid was0.001%，respectively.ConclusionThe compound Wuziyanzong Pill contains kinds of fatty acids.These fatty acids maybe partial material bases of pharmacology of compound Wu-Zi-Yan-Zong.

Wuziyanzong Pill;Fatty Acid;Gas Chromatography-Mass Spectrometry

R284.2

:Adoi:10.3969/j.issn.1671-332X.2016.08.033

国家自然科学基金(编号:81302958，81373582);广东省中医药局建设中医药强省课题资助(编号:20131102，20151019，20151018)

谭 为 黄旭晖 付婷婷 丘伟中 闵存云 王昌俊:广东省人民医院//广东省医学科学院//广东省老年医学研究所 广东广州510080

王昌俊