显齿蛇葡萄叶有效成分的提取工艺研究

显齿蛇葡萄叶有效成分的提取工艺研究

显齿蛇葡萄为葡萄科蛇葡萄属的一种野生木质落叶藤本植物，又名白茶、藤茶、龙须茶、甘露茶等。2013年12月24日国家卫生计生委发布了《关于批准显齿蛇葡萄叶等3种新食品原料的公告》，确定了显齿蛇葡萄叶可以作为新资源食品来使用。显齿蛇葡萄叶中黄酮化合物含量高达43.4~45.5%，富含二氢杨梅素、槲皮素、显齿蛇葡萄素、山奈酚等成分。由于人体不能直接合成黄酮化合物，只能从食品中间接获得，因此研究植物中黄酮化合物的提取方法有重大意义。本试验采取超声波提取法，对显齿蛇葡萄黄酮化合物的提取工艺条件进行筛选，以期获得显齿蛇葡萄黄酮化合物超声提取的优化工艺条件，为显齿蛇葡萄食用及药用资源的合理开发提供一定的依据。

实验材料,显齿蛇葡萄叶干品（产地为湖南省）、芦丁标准品、无水乙醇、硝酸铝、亚硝酸钠等，以上试剂均为分析纯，原料及试剂均由吉林益健生物科技有限公司提供。KQ250DB型数控超声波清洗器、QUINTIX124-1CN型分析天平、HH-6型恒温水浴锅、TDZ5-WS低速台式离心机、UV-1750型紫外可见分光光度计。

试验方法,选取显齿蛇葡萄干品，粉碎过60目筛，准确称取5.00g干粉置于圆底烧瓶中，以乙醇溶液作为提取溶剂，分别考查液料比、提取剂浓度、超声温度、超声时间、超声功率对黄酮化合物提取效果的影响。具体条件设为：液料比设为10:1、20:1、30:1、40:1、50:1、60:1（mL/ g），乙醇浓度设为25%、35%、45%、55%、65%、75%、100%，超声温度设为25℃、35℃、45℃、55℃、65℃、80℃，超声时间设为10、25、40、55、70、85min，超声功率设为120、150、180、210、240、270W。经过超声波提取后，过滤、离心、稀释，利用硝酸铝-亚硝酸钠显色法测定溶液吸光度，计算显齿蛇葡萄中黄酮化合物的得率。以上不同条件实验均平行3次，结果取平均值。

实验结果分析,液料比的影响：提取剂的体积直接关系到物料有效成分的浸出量，当液料比小于30:1时，得率明显上升，液料比为30:1时，得率达到12.7%，当液料比大于30:1时，其得率上升趋势变缓。从节约能耗的角度出发，液料比确定为30:1最佳。提取剂浓度的影响：当提取剂乙醇的浓度变化时，极性也随之变化，对提取效果有一定影响。乙醇浓度在65%左右时得率最大，可达到13.05%，当乙醇浓度升高至75%或100%时，得率反而降低。可能是由于乙醇浓度过高使非极性物质也随之溶出，导致黄酮化合物得率下降。因此确定乙醇浓度为65%时较佳。超声温度的影响：当温度小于65℃时，随着温度的升高得率有所增加，当温度超过65℃时，得率逐渐下降，同时提取物的颜色逐渐变深。可能是由于温度过高使部分黄酮化合物结构被破坏，同时叶绿素溶出使颜色变深，因此确定超声温度为65℃为宜。

超声时间的影响：当超声时间在40min左右时得率最大为13.93%，延长超声时间，得率反而降低。可能是由于超声时间过短黄酮化合物溶解不充分，超声时间过长，溶解出来的化合物易被氧化。综合时间、能耗等因素，确定超声时间为40min为宜.超声功率的影响：当超声功率小于240W时，得率随着功率的增加也逐渐提高，超声功率大于240W后，得率反而下降，可能是由于超声功率太高对分子造成一定程度的破坏。因此确定超声功率应控制在240W以内。

从显齿蛇葡萄中提取黄酮化合物的常用方法主要有五种：热浸提法、微波提取法、超声波提取法、超临界萃取法、逆流提取法。超声波提取法是通过超声振荡产生空化效应、扰动效应，对提取物进行搅拌和破碎，加速有效成分的扩散释放，具有易操作、省时、提取率高、结构破坏性小的优点，该方法被广泛用于食品原料中有效成分的提取。本实验得到的超声法提取显齿蛇葡萄黄酮化合物的最佳条件为：液料比为30:1；提取剂乙醇的浓度为65%；超声温度为65℃，超声时间40min；超声功率240W。用以上工艺条件进行超声提取，得率可达15,11%。以上数据可为显齿蛇葡萄黄酮化合物相关产品的开发提供参考。

□长春医学高等专科学校 汲军 王丹丹

吉林省中医中药研究院 赵昱伟