气相色谱法测定食品中甜蜜素准确性因素分析

2016-03-16甘肃省产品质量监督检验西部分中心郭红云

食品安全导刊 2016年26期

关键词：正己烷气相提取液

□甘肃省产品质量监督检验西部分中心郭红云

□甘肃省产品质量监督检验西部分中心郭红云

通过用气相色谱法对食品中甜蜜素的测定方法进行研究，从样品处理、提取振摇、反应温度等气相色谱法测定过程中所受到的影响因素都进行了分析和探讨，在分析检测的过程中，只要能很好的控制好这些影响因素，就能减小测量误差，提高检测结果的准确度。

气相色谱法；甜蜜素；准确性；影响因素

甜蜜素学名环己基氨基磺酸钠，为一种人工合成的非营养的新型甜味剂，甜度为蔗糖的30-50倍[1]，易溶于水，是一种高甜度、无热值、安全卫生，并能代替蔗糖的新型食品添加剂，具有清甜、爽口、水溶性好、对酸、碱稳定性好、不吸潮等特点，是目前我国食品行业应用最多的甜味剂之一。但消费者如果经常食用甜蜜素含量超标的饮料或其他食品，就会因摄入过量对人体的肝脏和神经系统造成危害。因此《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》[2]中规定了其使用范围和最大使用量。

目前，国家标准GB/T5009.97-2003《食品中环己基氨基磺酸钠的测定》[3]规定其测定方法有气相色谱法、比色法、薄层层析法三种，在实际工作中多以第一法气相色谱法进行测定。在文献报道中，对甜蜜素测定的方法研究很多，有毛细管气相色谱法[4]、气质联用法[5]、液相色谱法[6]，但就影响气相色谱法测定食品中甜蜜素的准确性因素分析研究的较少，本人通过大量实验本文就此着重进行分析。

实验部分

1.1 仪器,Agilent 6820气相色谱仪，附氢火焰离子化检测器（FID）;电子天平，赛多利斯；漩涡混合器；离心机。

1.2 试剂,正己烷；氯化钠；50g/L亚硝酸钠溶液；100g/L硫酸溶液；10mg/mL环己基氨基磺酸钠标准溶液.

1.3 色谱条件,色谱柱：长2m内径3mmU形不锈钢柱，固定相Chromosorb W AW DMCS 80目～100目，涂以10%SE-30。柱温：80℃；汽化温度：150℃；FID检测器温度：160℃。载气流速：40mL/min；氢气30mL/ min;空气300mL/min。

1.4 试样处理,液体试样：摇匀后直接称取。含二氧化碳的试样先加热除去，含酒精的试样加40g/L氢氧化钠溶液调至碱性，于沸水浴中加热除去，制成试样。固体试样：糕点、面包类粉碎制样，果冻。罐头等制成匀浆，凉果、蜜饯类试样将其剪碎制成试样，固体饮料直接称取。

1.5 试样制备,液体试样：称取10-20.0g试样于100mL带塞比色管，置冰浴中。固体试样：称取1-10.0g已剪碎的试样于研钵中，加少许层析硅胶（或海砂）研磨至呈干粉状，或用食品搅拌机打碎，经漏斗倒入100mL容量瓶中，加水冲洗研钵，并将洗液一并转移至容量瓶中。加水至刻度，不时摇动，1h后过滤，即得试样，准确吸取20mL于100mL带塞比色管，置冰浴中。

1.6 测定方法

1.6.1 标准曲线的制备,分别准确吸取1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL环已基氨基磺酸钠标准溶液于100mL带塞比色管中，加水20mL,置冰浴中，加入5mL 50g/L亚硝酸钠溶液，5mL 100g/L硫酸溶液，摇匀，在冰浴中放置30min，并经常摇动，然后准确加入10mL正己烷，5g氯化钠，摇匀后置漩涡混合器上振动1min（或振摇80次），待静止分层后吸出正己烷层于10mL带塞离心管中进行离心分离，每毫升正己烷提取液相当1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mg环已基氨基磺酸钠，将标准提取液分别进样1μL于气相色谱仪中，根据响应值绘制标准曲线。

1.6.2 试样测定,试样管按1.6.1“加入5mL 50g/L亚硝酸钠溶液······”起依法操作，然后将试样同样进样1μL，测得响应值，从标准曲线图中查出相应含量。

1.7 结果计算：

式中：X—试样中甜蜜素的含量（g/kg）;m1—试样提取液中甜蜜素的含量（mg/mL）；m—试样质量（g）；10—正己烷加入量（mL）；V—进样体积（μL）。

提高检验结果准确性影响因素讨论

2.1.1 样品处理对检测结果的影响,饮料、果汁等液体试样摇匀后（含二氧化碳或酒精的按样品处理方法处理后）直接称量，对结果无影响。对蜜饯、糕点等固体试样，分别采取用食品搅拌机打碎处理和研磨方法处理，对两种处理方法进行了回收率比较，实验结果表明，对蜜饯、糕点等固体试样用食品搅拌机打碎处理时，回收率更高，实验结果准确性好。实验数据见表1。

表1 样品处理对检测结果的影响Table 1 Effect of sample treatment on test results

2.1.2 振摇程度对测定结果的影响取同一试样，按1.6.1方法进行衍生，加入正己烷提取液后，分别采用手动振摇80次和不同振摇频次漩涡混合器上振摇1min,实验结果表明，采用手动振摇80次或者在漩涡混合器上以3000r/min振动1min提取甜蜜素完全。数据见表2。

表2 振摇程度对检测结果的影响Table 2 Effect of the degree of shaking on the test results

2.1.3 反应温度时间对测定结果的影响,取同一试样，分别在0℃冰水混合浴、8-10℃水浴和室温（25℃）下进行反应后加入提取液正己烷，实验结果表明，温度对测定结果无影响，但在温度较高时亚硝酸钠在硫酸中会分解释放出棕色氮氧化物气体，并有刺激性气味，所以，仍然建议在低温下进行反应和提取。数据见表3。

表3 反应温度对检测结果的影响Table 3 Effect of reaction temperature on test results

2.1.4 反应试剂贮存时间对测定结果的影响取同一试样，分别加入现配和贮存不同时间的反应试剂亚硝酸钠和硫酸，按1.6.1方法进行反应和提取，实验结果表明，试剂配置两个月内，对检测结果无影响。数据见表4。

表4 反应试剂贮存时间对检测结果的影响Table 4 Effect of storage time on test results

2.1.5 提取液存放时间与存放温度对测定结果的影响,取同一试样提取液，分别在不同温度下，存放不同时间后进样进行测定，并同刚提取后进行测定的结果进行比较（回收率=放置后测定值/刚提取后测定值×100），实验结果表明，提取液随存放时间的延长，回收率逐渐降低，误差逐渐增大；提取液存放温度的越高，回收率越低，误差越大；并且于0℃条件下存放提取液，回收率下降最慢，稳定性最好，因此，在检测样品较多的情况下，同时大批量前处理试样时，将提取液存放在0℃冰箱内，并于24h内分别检测完毕，能保证测定结果的准确性。实验数据见表4。