火龙果溃疡病菌病的室内药剂筛选

2016-03-15李界秋李杨秀吴凡

广西植保 2016年4期

关键词：甲环唑苯醚吡唑

李界秋，李杨秀，吴凡

（广西大学农学院南宁市 530005）

火龙果溃疡病菌病的室内药剂筛选

李界秋，李杨秀，吴凡

（广西大学农学院南宁市 530005）

采用菌丝生长速率法测定8种杀菌剂对火龙果溃疡病菌病（Neoscytalidium dimidiatum）的抑制作用，结果表明，苯醚甲环唑、咪鲜胺、苯甲·丙环唑、克菌·戊唑醇、吡唑醚菌酯和甲基硫菌灵对火龙果溃疡病菌菌丝生长的抑制效果好，EC50值分别为0.1557 mg/L、0.3020 mg/L、0.5205 mg/L、0.8660 mg/L、2.1786 mg/L和2.7372 mg/L。离体接种试验测定结果显示，甲基硫菌灵2.50μg/mL、吡唑醚菌酯1.00μg/mL、咪鲜胺0.25μg/mL、苯醚甲环唑0.25μg/mL、苯甲·丙环唑0.25μg/mL和克菌·戊唑醇0.25μg/mL的离体接种防治效果好，分别达到96.84%、95.06%、93.47%、91.00%、86.56%和83.10%。本研究结果为火龙果溃疡病田间药效防治提供了科学依据。

火龙果溃疡病；新暗色柱节孢菌；杀菌剂；毒力测定；防治效果

火龙果溃疡病是发生最普遍、为害最严重的火龙果病害之一，由新暗色柱节孢菌引起，主要为害火龙果的肉质茎和果实，严重时造成肉质茎和果实腐烂[1-3]。随着火龙果种植面积的不断扩大，火龙果溃疡病日渐猖獗，广西防城港市高发病区溃疡病率达50%左右[3]，对火龙果生产造成了严重的影响。目前火龙果溃疡防治仍以化学防治为主，因此，筛选高效低毒的杀菌剂，对火龙果生产具有重要意义。陆志翔等曾对广西火龙果溃疡病病原菌进行过鉴定[3]；魏雅丽和王会会等对海南省火龙果溃疡病菌进行了分离鉴定和室内杀菌剂初步筛选[4-5]；易润华等研究表明菌丝生长、产孢和孢子萌发受温度、pH影响大[1]，但有关该菌室内毒力测定的试验还很少，且尚未有通过离体接种法筛选药剂的报道和室内药剂筛选的报道。苯甲·丙环唑（difenoconazole·propiconazole）和苯醚甲环唑（difenoconazole）是广谱、高效、内吸输导性强的三唑类杀菌剂，已应用于防治各种真菌性病害[6]。嘧菌酯（azoxystrobin）和吡唑醚菌酯（pyraclostrobin）是一类高效、杀菌谱广的甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，可用于防治一些果树病害[7]。咪鲜胺（prochloraz）为高效、广谱、低毒的咪唑类杀菌剂，具有内吸传导、预防保护治疗等多重作用，主要用于防治由子囊菌和半知菌引起的多种农作物病害[8-9]。克菌·戊唑醇（captan. tebuconazole）由克菌丹和戊唑醇复配组合的低毒环保杀菌剂，具有保护、治疗的双重功效，对桃褐腐病菌具有较强毒力[10]。甲基硫菌灵（hiophanatemethyl）是一种老牌的广谱性内吸低毒杀菌剂，具有预防和治疗作用，对多种作物真菌性病害效果好[10-11]。溴·腈（bromothalonil·myclobutani）是针对炭疽菌产生抗药性而研制的新型复配杀菌剂，主要成分是溴菌清和腈菌唑，具有内吸、预防和治疗作用。本研究选择这些良好的杀菌剂开展对火龙果溃疡病病菌的毒力测定和室内离体接种试验，以期筛选出具有较好作用的药剂，为田间开展火龙果溃疡病化学防治提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 供试菌株

新暗色柱节孢菌［Neoscytalidium dimidiatum（Penz.）Crous＆Slippers］，病原菌采自南宁市青秀区南阳镇花雨湖火龙果种植基地，经分离、纯化、鉴定及致病性测定后供试。

1.2 供试药剂及浓度设置

450 g/L咪鲜胺EW（江门市大光明农化有限公司生产）；400 g/L克菌·戊唑醇SC（江苏省农垦生物化学有限公司生产）；50%苯甲·丙环唑EC（深圳诺普信农化股份有限公司生产）；10%苯醚甲环唑WG［百农思达（北京）农用化学品有限公司生产］；250 g/L吡唑醚菌酯EC（河北天胜化工集团有限公司生产）；28%溴·腈WC（德克森作物有限公司生产）；25%嘧菌酯SC（河北石家庄深泰化工有限公司生产）；50%甲基硫菌灵SC（成都科利隆生化有限公司生产）。

1.2.1 药剂毒力测定的浓度

在预备试验的基础上，确定各种药剂的浓度。咪鲜胺、克菌·戊唑醇、苯甲·丙环唑和苯醚甲环唑的有效使用浓度梯度均为1.00 μg/mL、0.50 μg/mL、0.25 μg/mL、0.10 μg/mL和0.05 μg/mL，吡唑醚菌酯为4.00 μg/mL、2.00 μg/mL、1.00 μg/mL、0.50 μg/mL和0.25 μg/mL，溴·腈为280.00 μg/mL、140.00 μg/mL、70.00 μg/mL、35.00 μg/mL和17.50 μg/mL，嘧菌酯为200.00 μg/mL、100.00 μg/ mL、50.00 μg/mL、25.00 μg/mL和10.00 μg/mL，甲基硫菌灵为10.00 μg/mL、5.00 μg/mL、2.50 μg/ mL、1.00 μg/mL和0.50 μg/mL。

1.2.2 药剂离体接种试验的浓度

咪鲜胺、克菌·戊唑醇、苯甲·丙环唑和苯醚甲环唑的有效使用浓度均为0.25 μg/mL，吡唑醚菌酯为1.00 μg/mL，溴·腈为70.00 μg/mL，嘧菌酯为50.00 μg/mL，甲基硫菌灵为2.50 μg/mL。

1.3 供试培养基

马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）。

1.4 毒力测定试验方法

参照菌丝生长抑制测定法[12]，火龙果溃疡病病菌菌丝在直径9 cm培养皿中长至约7 cm时，打取菌落边缘新鲜菌碟（直径5 cm），分别移接种到含有各药剂不同浓度的PDA平板上，以不含药剂的作对照，在28℃下培养，当空白对照菌丝长至7 cm以上时采用交叉“+”法测量菌落直径，每处理重复3次，试验重复2次。采用DPS统计软件中机率值分析法计算药剂对火龙果溃疡病病菌菌丝生长的有效抑制浓度（EC50）、毒力回归方程及相关系数。

1.5 离体接种试验方法

1.5.1 菌种准备

火龙果溃疡病病菌在PDA培养基上培养4 d，用无菌水洗脱节孢子成孢子悬浮液，节孢子浓度调至105个/mL[3]。

1.5.2 离体接种试验

剪取老熟程度一致的火龙果新梢枝条约25cm，先用75%酒精进行表面消毒，再用相应药剂离体接种试验浓度的药液喷雾2次（间隔1 d），第2次喷雾1 d后接种。2016年7月13日用灭菌的解剖针在火龙果枝条上刺伤表皮组织，然后用移液器接种5 μL菌液在伤口处，每个处理接种3根枝条，每枝条接种3个点，接种点之间相距约5 cm。接种后将枝条置于常温（28～32℃）的保湿盒中观察记录，以喷清水后接种菌液作对照1（CK1），喷清水后接无菌水作对照2（CK2），每种处理设3个重复。2016年8月29日采用交叉“+”法测量病斑直径。参照农药生物活性测试标准计算防治效果[13]。

防治效果（%）= ［（对照病斑扩展面积总和-处理病斑扩展面积总和）/对照病斑扩展面积总和］×100

2 结果与分析

2.1 供试药剂对火龙果溃疡病菌EC50值比较

从表1可以看出，供试药剂中苯醚甲环唑、咪鲜胺、苯甲·丙环唑克菌·戊唑醇、吡唑醚菌酯和甲基硫菌灵对火龙果溃疡病病菌菌丝生长有好的抑制效果，对火龙果溃疡病病菌的EC50值分别为0.155 7、0.302 0、0.520 5、2.178 6和2.737 2 mg/L。嘧菌酯和溴·腈对火龙果溃疡病病菌菌丝生长抑制作用弱，EC50值分别为33.807 8和224.166 1 mg/L。测定8种农药毒力回归方程的相关系数均大于0.9，而r 0.05值等于0.878，说明相关系数差异显著。

表2 药剂对火龙果溃疡病病菌的离体接种试验效果

2.2 火龙果溃疡病离体接种试验效果

从表2和图1可以看出火龙果溃疡病病菌离体接种试验结果。甲基硫菌灵2.50 μ g/mL、吡唑醚菌酯1.00 μ g/mL、咪鲜胺0.25 μ g/mL、苯醚甲环唑0.25 μ g/mL、苯甲·丙环唑0.25 μg/mL、克菌·戊唑醇0.25 μg/ mL、溴·腈70.00 μg/mL、嘧菌酯50.00 μg/mL和对照1（CK1）处理后产生病斑平均直径依次为1.0 mm、1.6 mm、2.0 mm、2.3 mm、2.7 mm、3.3 mm、3.7 mm、5.6 mm、7.3 mm和9.0 mm，对照2（CK2）组织被刺伤后产生的伤口愈合斑；甲基硫菌灵2.50 μg/ mL、吡唑醚菌酯1.00 μg/mL、咪鲜胺0.25 μg/mL、苯醚甲环唑0.25 μg/mL、苯甲·丙环唑0.25 μg/mL和克菌·戊唑醇0.25 μg/mL的防治效果好，分别达到96.84%、95.06%、93.47%、91.00%、86.56%和83.10%，嘧菌酯50.00 μg/mL防治效果最差，只有34.21%。

图1 1：CK1(喷清水接菌液) 2：嘧菌酯 3：溴·腈4：克菌·戊唑醇 5：苯甲·丙环唑 6：苯醚甲环唑7：咪鲜胺 8：吡唑醚菌酯 9：甲基硫菌灵 10：CK2（喷清水接无菌水）

3 讨论与结论

本研究中，三唑类杀菌剂中苯醚甲环唑对火龙果溃疡病病菌菌丝生长抑制作用的 EC50值为0.155 7 mg/L，与武玉国等研究对黄瓜枯萎病菌菌丝生长抑制EC50值0.154 mg/L基本一致，抑制作用强[14]，离体接种的防效达91.00%。甲氧基丙烯酸酯类中吡唑醚菌酯对火龙果溃疡病病菌菌丝生长有较好的抑制效果较好，EC50值为2.178 6 mg/L，比王会会等的研究结果EC50值1.029 1 mg/L[5]，以及段俊飞等研究吡唑醚菌酯对苹果斑点落叶病菌和轮纹病病菌菌丝生长的EC50值0.176 3和0.033 3 mg/L略高[7]，离体接种的防效达95.06%。甲基硫菌灵对火龙果溃疡病菌菌丝生长抑制作用的 EC50值为2.737 2 mg/L，但其离体接种的防效达96.84%。

综上所述，甲基硫菌灵、吡唑醚菌酯、咪鲜胺、苯醚甲环唑、苯甲·丙环唑和克菌·戊唑醇对火龙果溃疡病病菌菌丝生长有明显的抑制作用，并且离体接种防治效果好，可进一步进行田间药效防治试验。

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