脱涩青柿子醇提取物体外抗氧化研究*

杜紫阳，李　芳，王春元，何芳芳，骆卓明

(吉首大学，湖南　吉首　416000)



脱涩青柿子醇提取物体外抗氧化研究*

杜紫阳，李芳，王春元，何芳芳，骆卓明

(吉首大学，湖南吉首416000)

柿子在我国已有3000多年的栽培历史，分布广泛。柿子含有大量的糖类及多种维生素营养物质，而且具有很高的药用价值和经济价值，是山区脱贫致富的重要树种。研究青柿子(未成熟的柿子)醇提取物体外抗氧化作用。用无水乙醇制备青柿子提取物，测量其多糖含量。以维生素C为阳性对照，并对其抗氧化性进行测定。结果表明：脱涩青柿子醇提取物多糖含量为32.54%。醇提取物对DPPH自由基的IC50为0.8 mg/mL，脱涩青柿子具有较好的抗氧化作用。

脱涩青柿子；抗氧化活性；体外

柿属于柿科，柿属，又名朱果，是柿属植物中作为果树利用的代表种，也是我国重要的干果树种之一。成熟的柿子呈朱红色，色泽鲜艳，果子多汁且甜，具有较高的营养价值和药用价值。《本草纲目》中记载：“柿乃脾、肺、血分之果也，其味甘而气平，性涩而能收，故有健脾涩肠，治嗽止血之功[1-4]”。柿子在我国作为一种常见的果树，有着广阔的市场与开发利用空间[5]，未成熟的柿子因果实内可溶性单宁含量显著高于甜柿，味涩，不被人喜食。但单宁已被广泛应用于工业、医学、药学、化妆等领域，具有很高的经济利用价值[6]，具有很强的抗氧化活性，能有效清除肝脏内的过氧化反应物和降低卵磷脂的过氧化氢水平。但目前对柿子及其醇提取物的体外抗氧化活性还没有系统的研究。

吉首市花垣县位于湖南西部的湘西土家族苗族自治州，地处偏僻山区，是个以苗族为主的少数民族聚居山区。由于交通运输不方便，而柿子不易保存，易腐坏，造成资源浪费。目前对青柿子及其醇提取物的体外抗氧化活性还没有系统的研究，本实验用特定DPPH法对其进行抗氧化性的测定，为脆柿的加工与发展提供一定的实验依据，为湘西以及山区经济做出一定贡献，故该项研究具有十分重要的意义。为此，本实验以花垣本地家种的青柿子为研究对象，用无水乙醇对青柿子进行脱涩提取，制备青柿子醇提取物，采用DPPH法对青柿子醇提取物的抗氧化活性进行测定比较，分析其抗氧化活性。

1　材料与方法

1.1材料与试剂

新鲜水果：湘西花垣本地家种青柿子(用石灰水脱涩)。

试剂：L-抗坏血酸、AB-8大孔树脂、95%乙醇、无水乙醇、葡萄糖(国产分析纯)、DPPH(1,1-二苯-2-苦基肼)、98%浓硫酸。

1.2仪器

SP-723型可见分光光度计；UX420H电子天平；SHH.W21水浴锅；HH.GF-1干燥箱；DS-1捣碎机；移液器；索氏提取器(250 mL)；玻璃棒、烧杯、漏斗、刻度试管、移液管、水果刀、橡胶手套等。

1.3实验方案

1.3.1青柿子醇提取物的制备

取青柿子若干个，按农村青柿子脱涩工艺进行石灰水脱涩[4]。数天后取出柿子，用蒸馏水冲洗，去蒂、核，削皮(皮厚约1～1.5 mm)。取柿肉于60 ℃烘箱中烘干至恒质量，再分别用捣碎机粉碎。称取一定量的柿肉粉末，按照料液比1:20加入无水乙醇，1%盐酸，于90 ℃加热回流3次，每次40 min，合并提取液，冷冻干燥，于4 ℃冰箱中保存待用[6]。

1.3.2多糖的测定

运用苯酚-硫酸法测定糖含量[7]。取部分干燥后的提取物加入蒸馏水溶解，再加入三倍蒸馏水的无水乙醇混匀，静置3 h，3000 r/min离心15 min。去掉上清液，沉淀物依次经过无水乙醇、丙酮、乙醚各洗3次，然后与50 ℃水浴蒸发，最后于105 ℃烘箱内干燥数小时，直至得到恒重的多糖。取多糖配成0.2 mg/mL工作液，用于测量多糖含量。

1.4抗氧化活性的测定

DPPH自由基清除活性的测定:参考Atouietal.(2005)的测定方法，分别准确移取1 mL体积的EP，稀释若干倍后，取50 uL 加入试管中，DPPH(1,1 苯基-2-苦肼基自由基)溶液(DPPH溶液制作方法：准确称取10 mg DPPH 用无水乙醇溶液稀释定容为 100 mL，即得 0.1 mg/mL DPPH 溶液)2 mL,用蒸馏水定容至8 mL,20 ℃常温避光暗反应30 min后于517 nm波长处测定吸光值。以维生素C为阳性对照。

DPPH 自由基的清除率=(1-A1/A0)×100%

式中： A1为样品组的吸光值,A0为对照组的吸光值(吸光度越低，清除率越高，抗氧化活性越强)。

1.5统计学处理

所有试验均平行三次，数据采用SPSS19.0处理,用X±SD表示。

2　结果与分析

2.1多糖含量

为了便于多糖的测定，利用醇沉法将多糖与单糖分离，分别测量其含量。根据线性回归方程：A=6.68x-0.0422(R2=0.9989，A为吸光度，x为浓度)，得到EP中单糖含量为29.49%，多糖含量为32.54%。

2.2DPPH自由基清除作用

根据DPPH法所测得结果如表1所示。

2.3分析与讨论

(1)相关文献研究表明，柿子的醇提取物比水提取物清除DPPH强[8]，其原因可能与柿子中多酚类等有效成分易溶于醇类溶剂。由实验结果看。脱涩青柿子醇提取物对DPPH自由基的清除有较好的作用。由表可以看出，EP 对 DPPH 自由基有很好的清除作用，其 IC50为 0.8 mg/mL。

(2) 过量的自由基可以导致生物膜，DNA的氧化性损伤,是很多重大疾病的诱发因素,如癌症、衰老、多发性硬化症等,其中经基自由基和糖尿病、癌症等疾病的发生有着密切的关系，随着近代人们回归自然,追求健康的理念,开发天然的低毒性的抗氧化药物成为当今研究的趋势，有研究表明,青柿子的多糖具有较强的抗氧化活性。

(3) 通过本实验的研究发现，青柿子醇提取物对DPPH的清除能力与多糖浓度呈正相关,多糖浓度越大,清除能力越强。

(4) EP有较强的清除DPPH的能力,能有效清除经基自由基,EP是一种很好的天然抗氧化剂,同时说明青柿子具有很好的体外抗氧化作用。

3　结　论

本研究采用DPPH法，测定了湘西花垣地区本地家种青柿子醇提取物的抗氧化活性,结果表明脱涩青柿子醇提取物有较好的自由基清除能力，本实验证实了脱涩青柿子具有很好的抗氧化作用，是一种天然抗氧化剂。通过本次实验的结果，体现出脱涩后的青柿子的营养及食用价值，刺激青柿子的市场需求量，从而提高花垣地区的本地家种柿子的利用率，将青柿子推向食品保健，最终促进湘西武陵山区经济“柿业”市场的发展，带动湘西武陵山片区经济发展，提高资源利用率，减少浪费。

同时，青柿子抗氧化活性的有效成分还有待于进一步的研究，本研究也为以后的水果抗氧化研究提供有价值的参考依据。

[1]蔡健,宋华,徐良,等.柿子开发利用[J].食品研究与开发，2005,26(6):115-117.

[2]杨正兴,黄伶俐,尹秀春.柿子膳食纤维饮料加工研究[J].广西农学报，2002(S1): 183-194.

[3]王书民,张国春.柿子的加工技术[J].商洛师范专科学校学报，2004,18(2):43-45.

[4]寇静静,赵智慧,王文江.柿功能性成分研究进展[A].第八届第八届全国干果生产与科研进展学术研讨会论文集[C].保定,2013.

[5]陈灏,贺全红. 柿子脱涩技术要点[J].现代园艺, 2011(15):33.

[6]张永卓.部分中国原产甜柿种质甜涩性状的鉴定及其超低温保存的研究[D].武汉：华中农业大学，2004.

[7]徐斌,董英,林琳,等.改良苯酚-硫酸法测定苦瓜多糖含量[J].食品科技，2005(7):79-82.

[8]赵盈,张海生,王立霞,等. 柿子多糖的水提醇沉工艺研究[J].农产品加工(学刊), 2010(12):26-28.

The Invitro Antixidant Research of Ethanol Extract of Green Non-astringent Persimmons*

DUZi-yang,LIFang,WANGChun-yuan,HEFang-fang,LUOZhuo-ming

(Medical College of Jishou University, Hunan Jishou 416000, China)

Persimmon has a long cultivating history and distribute widely in China. Persimmon not only contains a mass of saccharide and multiplex vitamin, but also has high medicine and economic value, which is one of the most impormant economic tree varieties to help farmers casting off poverty to get rich in mountainous area. To study the antioxidant effect of ethanol extract of green persimmons from the object, the extract of green persimmons with the absolute ethyl alcohol was prepared, the content of polysaccharide was measured, VC for positive comparison was used and their antioxidant was measured. Results showed that the content of ethanol extract of green non-astringent persimmons was 32.54%.The IC50of ethanol extract related to DPPH free radicl was 0.8 mg/mL. The ethanol extract of green non-astringent persimmons has obvious antioxgenation.

the green non-astringent persimmons; antioxidant activity; in vitro

2014年吉首大学校级科研项目(14JDX018)。

杜紫阳(1995-)男，临床医学专业。

侯娟(1973-)，女，高级实验师，主要从事基础医学实验教学及技术研究。

Q946

A

1001-9677(2016)02-0063-02