不同稀释液对化学发光免疫法测定血清雌二醇浓度的影响*

2016-03-10王洪珍陈小芳

国际检验医学杂志 2016年13期

关键词：雌二醇

王洪珍，陈小芳

(江苏省镇江市第四人民医院生殖中心　212001)

·临床研究·

不同稀释液对化学发光免疫法测定血清雌二醇浓度的影响*

王洪珍，陈小芳△

(江苏省镇江市第四人民医院生殖中心212001)

摘要:目的探讨不同稀释液对化学发光免疫法测定血清高浓度雌二醇(E2)的影响，选择适用稀释液，减少检验成本支出。方法选取生殖中心20例高值E2(2 522～4 793 pg/mL)的患者血清，分别用E2专用稀释液，自制低值混合血清及生理盐水进行10倍稀释，然后上DXI800化学发光分析仪检测并计算结果，所得各稀释组E2值与原始值作配对t检验并作相关性及线性回归分析。结果各稀释组E2值与原始值比较，差异有统计学意义(P=0.000)，低值混合血清组E2值与原始值偏差最小，生理盐水组偏差超出允许范围；E2专用稀释液组，低值混合血清组及生理盐水组的E2值与原始值的相关系数分别为0.998、0.998和0.967，回归分析常数项E2专用稀释液组绝对值最小，生理盐水组绝对值最大。结论除E2专用稀释液外，低值混合血清可以用作DXI800化学发光分析仪测定高浓度E2的替代稀释液，而生理盐水不能用作稀释测定高值E2。

关键词:稀释；化学发光免疫；雌二醇

妇产科内分泌学的发展离不开生殖激素测定方法的不断改进，生殖医学的临床工作要求激素测定结果准确、快速。其中血清雌二醇(E2)是促排卵方案的一项重要监测指标，促排卵方案的应用，E2测量值常超出测定上限4 800 pg/mL。为利于生殖治疗中方案的调整及防治卵巢过度刺激综合征发生，临床要求对超出线性范围的高浓度E2进行稀释定量测定，仪器专用E2稀释液较贵且在保质期内使用，由于目前此类标本量不多，促使检测成本较高，为减少检验成本支出选择适用稀释液，研究者用不同稀释液对化学发光免疫法测定高浓度E2进行稀释测定并对结果进行统计分析，现报道如下。

1材料与方法

1.1标本来源收集2014年6～11月本院生殖中心顺磁性颗粒化学发光免疫法测定E2结果为2 522～4 793 pg/mL的患者静脉血清标本20例，置-30 ℃保存。

1.2仪器与试剂全自动化学发光仪DXI800和E2测定试剂盒均由美国贝克曼库尔特公司提供，试剂批号均在有效期内。

1.3方法

1.3.1自制低值混合血清的制备方法选择本实验室体检健康男性血清，取体检结果无异常，生化指标及血常规指标均无明显异常的无溶血、无黄疸、无脂血的新鲜血清标本制成混合血清，再上机检测混合血清的E2浓度，检测结果为20～50 pg/mL时，可作为合格的自制E2标本稀释液(本实验的混合血清的E2浓度为35 pg/mL)，然后56 ℃水浴灭活10 h后再3 000 r/min离心10 min，小包装分装保存于-30 ℃冰箱，半年内有效，使用前30 min置室温融化，避免反复冻融。

1.3.2检测方法将20例标本分别用E2专用稀释液，自制低值混合血清，生理盐水按1∶10稀释(50 μL标本+450 μL稀释液)混匀后上机检测并计算结果。血清E2原始值和不同稀释方法计算值按原始值、E2专用稀释液组、低值混合血清组和生理盐水组分类统计。

1.4统计学处理数据分析采用SPSS17.0统计软件，对不同稀释组E2值与原始值之间比较采用配对t检验，P<0.05为差异有统计学意义，使用Pearson相关分析计算不同稀释组与原始值的相关系数并拟合线性回归方程。

2结果

E2专用稀释液组中E2水平为(3 421.75±708.52)pg/mL与原始值(3 167.85±657.35)pg/mL比较，差异有统计学意义(t=-17.068,P=0.000)；自制低值混合血清组(3 008.85±642.17)与原始值比较,差异有统计学意义(t=15.582,P=0.000)；生理盐水组(10 073.6±1 341.38)与原始值比较，差异均有统计学意义(t=-42.608,P=0.000)。E2专用稀释液组、低值混合血清组和生理盐水组的E2值与原始值之间的相对差值分别为-8.01%、5.10%和-222.10%；Pearson相关系数分别为0.998、0.998和0.967；线性回归方程分别为Y=0.926X-0.639、Y=1.021X+94.63和Y=0.474X-1 607.89；回归常数项显著性分析，P分别为0.989、0.070和0.000；回归系数显著性分析，P均为0.000。

3讨论

化学发光免疫法是目前测定激素类物质的常用方法，随着全自动分析仪的应用，测试简便快速。但仪器都有一定的检测范围，尽管DXI800检测E2的范围达20～4 800 pg/mL，但随着近年生殖医学体外受精-胚胎移植临床工作的开展，促排卵方案的应用，E2测量值常大于4 800 pg/mL，而E2结果对治疗方案的调整和防治卵巢过度刺激综合征发生至关重要，因此需要对超出线性范围的高浓度E2进行稀释定量测定。由于不同的稀释介质会对稀释结果造成不同的偏差，甚至对临床医生产生误导，引发医患矛盾和医疗纠纷。为确保结果的准确性，应选择适当的稀释液，使检测结果偏差控制在可允许的范围内。专用E2稀释液较贵，为减少检验成本支出选择适用稀释液，采用E2专用稀释液，自制低值混合血清及生理盐水对化学发光免疫法测定的高浓度E2进行稀释测定并对结果进行统计分析。

本试验选取生殖中心20例高值E2(2 522～4 793 pg/mL)的患者血清，分别用E2专用稀释液，自制低值混合血清及生理盐水进行10倍稀释，然后上DXI800化学发光分析仪检测并计算结果，所得各稀释组E2值与原始值作配对t检验，差异均有统计学意义(P=0.000)。各稀释组E2值与原始值的相关性与线性回归分析显示，E2专用稀释液组值、低值混合血清组值与原始值相关系数均为0.998,生理盐水组值与原始值相关系数为0.967，三组都呈正相关；回归系数显著性分析P均为0.000，说明三组回归分析模型整体差异有统计学意义(P<0.05)；回归常数项即回归方程截距，E2专用稀释液组最小，为-0.639，P=0.989表明对于不同浓度E2值，用E2专用稀释液组值与原始值的回归方程拟合出的结果最接近原始值，低值混合血清组，回归常数项较大为94.633，但P=0.070,大于0.05，表示常数项比较差异无统计学意义，对于不同浓度E2值，其回归方程拟合出的结果仍接近原始值，生理盐水组回归常数项为-1607.887，P=0.000，表示常数项差异有统计学意义，对于不同浓度E2值，其回归方程拟合出的结果与原始值差异有统计学意义(P<0.05)。对超出检测线性范围的高值标本作适当的稀释时，稀释液的酸碱度和电解质会影响反应体系中pH值、离子强度，反应介质的改变会直接影响反应的结果，另外稀释液中的蛋白质、脂类、糖类、特有离子等物质也会间接的影响抗原抗体的结合[1]。低值混合血清的pH值、离子强度、蛋白质、脂类、糖类等物质与待测血清标本基本一致，所以其测定的不同浓度E2与原始值偏差最小，为5.10%，E2专用稀释液基质接近血清，其测定结果与原始值偏差较小，为-8.01%，两者偏差在允许范围内，均可以作为高浓度血清E2的稀释液使用；生理盐水的pH值、离子强度与待测血清标本相似，但其不含蛋白质、脂类、糖类等物质，与待测血清标本有较大差异，所以其测定结果与原始值偏差最大，为-222.10%，超出可允许范围，说明生理盐水不可以用于高浓度血清E2的稀释测定。

不同稀释液对化学发光免疫法测定血清E2浓度影响的报道很少，本研究结果与包安裕等[2]研究结论有差异，后者各稀释组与原始值差异进行配对t检验，差异无统计学意义(P>0.05)，生理盐水稀释标本得到的E2值与原始值比较，差异无统计学意义(P>0.05)。可能原因如下：(1)两种实验测量血清E2所用的仪器和试剂不同，测量范围也不同；(2)两种实验研究的标本E2浓度不同，本研究标本E2浓度为2 522～4 793 pg/mL，后者研究标本的E2浓度未明确，但在线性范围10～1 000 pg/mL。因此，不同仪器、不同试剂检测E2高值标本稀释液的选择可能是不同的，但都需要进行临床实验验证，以确保测定结果的准确可靠。

在化学发光免疫法人绒毛膜促腺性激素(HCG)稀释测定研究中，曾庆洋等[3]认为健康男性混合血清是一种比较理想的稀释液；也有研究者认为生理盐水可以作为高值HCG稀释之用[4-5]。实际工作中生理盐水也常用于化学发光免疫法泌乳素、雌三醇等稀释测定，因此设计方案时没想到生理盐水稀释E2标本的结果与原始值差异会如此之大；相关性分析时，生理盐水稀释组结果与原始值如此强相关也出乎意料。查阅资料健康男性混合血清E2值可低于20 pg/mL[2]，实验中对体检健康男性混合血清进行E2检测发现测定数值为35～65 pg/mL。因此，临床实验只有不断验证才能得到正确的结论。

生殖医学的医生要根据E2等激素监测患者的用药效果，以便调整治疗措施，要求实验室检测结果快速准确，而E2等激素常随个体月经周期的变化而变化，E2等测定值本身对检测结果准确性也有监测的作用[6-8]。实际应用中，临床医生发现有时E2检测结果与患者卵泡发育情况会有偏差，因此，为保证实验结果的准确性，实验室应重视标本分析前、分析中和分析后的质量管理，每天做好室内质控，结果在控方可审发报告，定期参加室间质控等质量控制工作。

综上所述，化学发光免疫法检测E2高值超出线性范围的标本，不建议使用生理盐水稀释标本，在没有专用E2稀释液的情况下，可以使用健康男性混合血清稀释替代(计算结果需减去混合血清本身的E2浓度)，如果使用回归方程算出标本E2值，结果可能更准确。

参考文献

[1]胡伟，毕永春，宋景秋，等．不同稀释液对血清中HBsAg定量测定的影响[J]．东南大学学报(医学版)，2010，29(4)：464-466．

[2]包安裕，李艳，苏汉文．稀释介质与稀释方式对化学发光免疫法测定血清雌二醇浓度的影响[J]．标记免疫分析与临床，2011，18(4)：271-273．

[3]曾庆洋，姜朝新，曾令恒，等．CP化学发光仪检测HCG适用稀释液及稀释倍数的选择[J]．国际检验医学杂志，2012，33(14)：1736-1737．

[4]李云，李艳红，郭书侠．高值人绒毛膜促性腺激素不同稀释液的测定结果比较[J]．华北煤炭医学院学报，2009，11(3)：316-316．

[5]陈广福，段侠霞，任晓兵，等．不同稀释液对血清HCG测定的影响[J]．航空航天医药，2009，20(1)：19．

[6]杨池荪，王振红，姜彦彬，等．化学发光免疫法测定生殖激素的质量控制[J]．标记免疫分析与临床，2008，15(6)：393-395．

[7]李洋, 何瑞冰, 曹振毅,等. 不同稀释介质及方式对化学发光免疫法测定血清雌二醇浓度的影响[J]. 临床输血与检验,2015,17(4):327-330.

[8]包安裕, 李艳, 苏汉文. 稀释介质与稀释方式对化学发光免疫法测定血清雌二醇浓度的影响[C]//中华医学会全国临床检验实验室管理学术会议论文集.北京：中华医学会检验医学分会,2011:271-273.

*基金项目：江苏省镇江市重点研发计划社会发展项目(SH2015073)。

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.13.031