针对罗红霉素合成工艺的改进分析

2016-03-07成佳兴

东方食疗与保健 2016年9期

关键词：罗红霉素红霉素滤膜

成佳兴

哈药集团制药总厂科研开发中心 150000

针对罗红霉素合成工艺的改进分析

成佳兴

哈药集团制药总厂科研开发中心 150000

以无水碳酸钠为催化剂制造罗红霉素的工艺，是当今推广度最高的合成工艺。药理反应的适宜温度为4摄氏度到6摄氏度之间，然后进行搅拌的步骤，反应的时间设置为40分钟。其中活性炭的用量为百分之一。这样的制取工艺的优点在于方法较其他方法更加可靠，并且制取的步骤也很少，操作简单，适于大批量的生产。

罗红霉素；合成工艺；催化剂的选择

罗红霉素在抗生素中的类别是新一代大环内酯类抗生素，罗红霉素对革兰氏阳性菌、厌氧菌、衣原体与支原体等病菌具有明显的抑制作用。对于外抗菌的抑制作用罗红霉素与红霉素相类似。但是罗红霉素对于体内抗菌的作用却比红霉素要强1到4倍。罗红霉素的抗菌谱与红霉素的也较相近，其中对于金黄色葡萄球菌、消化菌、等一些体内感染菌具有良好的抗菌作用，罗红霉素对于支原体肺炎与沙眼衣原体感染也有良好的治疗性。

1.仪器与制药

1.1 仪器

HTY-2000集菌仪、集菌培养器（孔径为 0.45μm），HH.BII.420电热恒温培养箱、LRH-250A 生化培养箱、SartoriusBS2002S电子天平、SA-1480-Ⅱ净化工作台。

1.2 培养基

营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、营养肉汤培养基、MUG培养基，均购于中检所。

1.3 菌种

枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501、金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003、大肠埃希菌CMCC（B）44102、白色念珠菌CMCC（F）98001、黑曲霉CMCC（F）98003（以上菌株均为第三代），均购于中检所。

1.4 菌液制备

1.4.1 取经30℃～35℃培养18～24小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌营养肉汤培养液1ml，加0.9%无菌氯化钠至每ml含菌50～100cfu。

1.4.2 取经23℃～28℃培养24～48小时的白色念珠菌改良马丁培养液1ml，加0.9%无菌氯化钠至每ml含菌50～100cfu。

1.4.3 取经23℃～28℃？培养5～7天的黑曲霉改良马丁营养琼脂斜面，用0.9%无菌氯化钠3～5ml将孢子洗脱，加0.9%无菌氯化钠至每ml含菌50～100cfu

2.实验方法

2.1 细菌霉菌与酵母菌的验证方法

方法的验证过程为是将验证分为3次独立的验证，并且设置为平行验证的方式。第一个步骤是，先取试品10克，然后的进行第二步，将PH值为7.0的氯化钠-蛋白胨缓冲液加至刻度数为100g，这样就调制出比例为1:10的供试液了。验证的实验完成后就将各试验菌的回收率进行计算。最后一步是将实验组的1：10供试液取出1毫升，将50毫升含有5%的乙醇的无菌蛋白胨溶液中去，将调配好的溶液进行摇匀处理，在立刻过滤，滤膜选用500毫升5%乙醇的1%无菌蛋白胨溶液进行冲洗，再用注射器加入1毫升的菌液，在进行滤干处理，将滤膜取出进行培养。每株菌株都各做一份实验。

2.2 培养实验

带实验中的菌株培养的时间过去后，就可以进行下一步的实验了，就是在菌液组中取出1毫升的菌液，放入平皿中，这时再立刻加入相应数量的琼脂，再做菌株平行实验各两份。实验完毕后，将对供试品的本地菌数进行测定。在对稀释液进行对照时可以先将上述菌液取出各1毫升加入50毫升含有5%乙醇的无菌蛋白胨溶液中，进行滤液处理，再将滤液分五次进行清洗的处理，滤干。

3.计算公式

实验组的菌回收率=（实验组平均菌落数―供试品对照组平均菌落数）/菌液组的平均菌落数，稀释剂对照组的菌回收率=稀释剂对照组平均菌落数/菌液组的平均菌落数。

细菌、霉菌及酵母菌回收率试验采用先制成1：10供试液，再用薄膜过滤法检查，试验组的回收在70%以上，表明可用上述方法检查细菌、霉菌及酵母菌。

4.结果

通过对实验数据的分析，我们可以看出，实验组的各控制菌的回收率均达到或是高于 70%,这样的结果表明用上述冲洗滤膜的方法可行。

5.常规发与滤膜法实验的对比

对于常规法的实验步骤基本与滤膜法相同，将实验菌在供试液上进行培养，再将实验的培养皿放在适宜的温度中进行静置培养处理，但是相关的步骤进行完毕后，会在实验中发现，由于罗红霉素这种抗生制剂会对菌群的生长起到很强的抑制作用，用常规法在对控制菌回收率进行测定时，会受到罗红霉素的影响，故验证时无法采用常规法，必须选择滤膜法。

5.1 不使用常规法原因分析

罗红霉素的化学性质所致，把它放在乙醇或是丙酮的溶液中会很容易就自行溶解了，在其他的溶液中的溶解度是在乙腈中可溶，在甲醇中也可溶，但是罗红霉素在水中的溶解度为零，在《中国药典》2010版二部规定中的两种冲剂，对于罗红霉素的冲洗是无法将干扰冲洗下去的。甲醇与乙腈的成分中含有一定的毒性，所以也不考虑使用。最后选用的试剂是乙醇，用乙醇作为冲洗液不仅无毒对药品不会产生污染，还在一定程度上增大了罗红霉素在缓冲液下的溶解度，故选择乙醇作为缓冲液是最为适宜的。

5.2 干混悬剂的过滤可行性分析

在罗红霉素干混悬剂的薄膜过滤法中，用不含乙醇的无菌蛋白胨缓冲液来冲洗供试品是不可取的，本研究的目的是验证用含5%乙醇的无菌蛋白胨缓冲液来冲洗滤膜来计算各个控制菌回收率的高低的方法是否可行，结果各控制菌的回收率均大于70%，符合规定。

5.3 对罗红霉素化学性质的分析

罗红霉素对酸稳定，是目前临床上使用广泛、疗效优良的新型红霉素产品。合成它需要两步，第一步：红霉素或硫氰酸红霉素与盐酸羟胺在酸性条件下转化为红霉素肟；第二步：红霉素肟与甲氧基乙氧基甲基氯在碱性条件下反应生成罗红霉素。其中红霉素肟不仅是合成罗红霉素的中间体，也是合成克拉霉素、阿奇霉素、地红霉素等的通用中间体。

5.3 制取反应时间上的选取

5.3.1 通过对三种合成红霉素肟方法的研究(包括自己设计出的合成方法)的比较研究，得出预先从盐酸羟胺、硫氰酸红霉素中游离出羟胺和红霉素，然后在已调节好酸性的条件下混合两种游离物质，进而在一定反应条件下合成红霉素肟的工艺是可行且具有经济效益的。

5.3.2 优化了合成红霉素肟新方法的工艺条件，得到最佳条件为：反应体系pH为6.7左右，反应温度58～60℃，反应时间28h左右，盐酸羟胺与硫氰酸红霉素的物质的量比为8.3：1，游离羟胺所需反应时间为30～40min，所用氢氧化钠溶液的质量分数为26%，用乙醇钠游离硫氰酸红霉素的反应时间为30min。

5.3.3 用自制的红霉素肟和甲氧乙氧甲基氯合成罗红霉素得出优化的反应条件：分批加入甲醇钠碱催化剂优于一次性加入甲醇钠；加入甲氧基乙氧基甲基氯、红霉素肟、甲醇钠三者的物质的量比为1.24：1：1.32；反应时间应选取在7h左右最适宜。