全自动酶免仪不同洗板方式对结核抗体检测结果的影响

张淑英 裴景亮 张玉芝 伊正君

全自动酶免仪不同洗板方式对结核抗体检测结果的影响

张淑英 裴景亮 张玉芝 伊正君

目的评价不同的洗涤参数对全自动酶免仪检测结核抗体的影响。方法120例结核患者采用全自动酶免仪,选择4、5、6次不同洗涤次数,10、30、60 s不同清洗震荡时间,20、40、60 s不同浸泡时间,进行结核抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测,观察比较检测结果。结果洗涤5次阳性似然比(PLR)、尤登指数(YI)高于洗涤4次的水平(P＜0.05)。振荡30 s的方法在灵敏度、特异性、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、PLR、YI方面的诊断效能高于振荡10 s的方法(P＜0.05)；在PPV和PLR的诊断效能方面高于振荡60 s的方法(P＜0.05)。浸泡40 s的方法在灵敏度、NPV、PLR、阴性似然比(NLR)、YI方面的诊断效能高于浸泡20、60 s时(P＜0.05)。结论建立洗涤液系统的标准化程序可以提高检测方法的灵敏度、特异性和准确性。

高通量分析；酶联免疫吸附试验；标准化；结核抗体

本研究采用的试剂利用基因工程技术克隆表达致病性结核分枝杆菌7种结核特异性表位抗原［1,2］,研究高通量ELISA检测系统检测结核抗体试验过程中洗涤方式对结核抗体检测结果的影响。现将研究结果报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取山东省潍坊市第二人民医院2013年5月～2014年2月结核科门诊及住院的120例结核患者,均符合2001年中华医学会结核病学分会制定的肺结核诊断标准。

随机选择168例健康体检人员。

1.2仪器与试剂 采用烟台Addcare ELISA500全自动酶免仪,试剂采用荣盛公司结核抗体检测试剂,批号: 20130824。

1.3血清标本收集 清晨空腹肘静脉血4 ml,3000 r/min离心10 min分离血清,血清分装后-80℃保存,备用。

1.4研究方法 选择4、5、6次不同洗涤次数,10、30、60 s不同清洗震荡时间,20、40、60 s不同浸泡时间［1］,进行结核抗体的ELISA检测,观察对最终检测结果的影响,评价不同因素对灵敏度、特异性、PPV、NPV、PLR、NLR、YI的影响。

1.5统计学方法 采用SPSS21.0统计学软件对数据进行统计分析。计数资料以率(%)表示,采用χ2检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1不同洗涤次数对结核抗体检测的影响 洗涤5次时PLR和YI高于洗涤4次的水平(P＜0.05)；洗涤5次各项与洗涤6次比较,差异均无统计学意义(P＞0.05)。见表1。

2.2不同振荡时间对结核抗体检测的影响 振荡30 s的方法在灵敏度、特异性、PPV、NPV、PLR、YI方面的诊断效能高于振荡10 s的方法(P＜0.05)；在PPV和PLR方面的诊断效能高于振荡60 s的方法(P＜0.05)。见表2。

2.3不同浸泡时间对结核抗体检测的影响 浸泡40 s的方法在灵敏度、NPV、PLR、NLR、YI方面的诊断效能高于其他浸泡时间(P＜0.05)。见表3。

表1 不同洗涤次数对检验效能的影响

表2 不同振荡时间对结核抗体检测的影响

表3 不同浸泡时间对结核抗体检测的影响

3 小结

有研究证实,结核分枝杆菌的特异性分泌蛋白的抗体检测对结核病的诊断具有重要意义［2,3］,利用基因工程技术将结核分枝杆菌的多种分泌蛋白制成融合蛋白,利用ELISA技术检测血清中对应的抗体可用于不同类型结核病的诊断。

本文研究结果证实,建立的洗涤液系统的标准化程序可以提高检测方法的灵敏度、特异性和准确性。

［1］黄绍梅,邱薇,许柳清,等.蛋白芯片法检测结核抗体在儿童结核病中的诊断价值.广东医学,2012,33(16):2421-2422.

［2］黄胜,余继英,赵春艳,等.胶体金法检测结核抗体的临床价值探讨.临床肺科杂志,2014,19(6):1058-1060.

［3］林伟灵.结核患者结核抗体、血沉以及C-反应蛋白检测的临床分析.中国医药导报,2012,9(31):55-56.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.08.024

2015-06-18］

261041 山东省潍坊市第二人民医院(张淑英)；山东省潍坊医学院附属医院(裴景亮 张玉芝伊正君)