CETP基因TaqIB多态性与海南汉族人群原发性高血压的相关性

苏娅，孙悦，周才东，夏儒鸿，瞿先华，李冰，张云霞

(1.海南医学院，海南海口571101；2.海南省干部疗养院，海南海口571100)

CETP基因TaqIB多态性与海南汉族人群原发性高血压的相关性

苏娅1.2，孙悦1*，周才东1，夏儒鸿1，瞿先华1，李冰1，张云霞1

(1.海南医学院，海南海口571101；2.海南省干部疗养院，海南海口571100)

目的分析CETP基因TaqΙB多态性与海南汉族人群原发性高血压(EH)的相关性。方法收集2013年3月至2014年1月在海南省干部疗养院进行体检及治疗的海南省汉族301名健康对照人群(对照组)和218例EH患者(EH组)的全血DNA，利用多聚酶链式反应/限制性片段长度多态性(PCR/RFLP)检测CETP基因TaqΙB多态位点的基因型，利用SPSS21.0对检测结果进行统计学分析。结果EH组人群的B1B1、B1B2和B2B2频率分别为38.53%、47.25%、14.22%，对照组人群分别为45.18%、39.87%、14.95%。EH组人群的B1和B2等位基因频率分别为62.16%、37.84%，对照组分别为65.12%、34.88%，上述各项指标组间两两比较差异均无统计学意义（P＞0.05）；EH组CETP基因TaqΙB位点B1B1、B1B2和B2B2基因型和B1/B2等位基因频率分布和对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。结论CETP基因TaqΙB位点多态性与海南汉族人群EH无显著相关性。

原发性高血压；CETP基因；海南汉族；遗传多态性；单核苷酸多态性

原发性高血压(EH)的发生是遗传因素和环境因素共同作用的结果，其发生可导致患者心血管系统功能的改变，是脑卒中、冠心病、心肌梗死等心脑血管疾病发生的危险因素[1-2]。研究显示，遗传因素在高血压病因学中占据的比例为30%～50%，研究明确候选基因与EH的关联性对于明确高血压的发病机制及后续的治疗具有重要的意义[3-4]。许多学者对EH候选基因的遗传变异对EH的影响进行了研究，例如血管收缩相关基因、胆固醇酯逆向转运相关基因等。胆固醇酯转运蛋白(Cholesteryl ester transfer protein，CETP)是血浆高密度脂蛋白的重要成分之一，控制着胆固醇在血浆脂蛋白间的交换，进而影响着胆固醇从血液向肝脏的逆向转运过程。研究表明该蛋白编码基因的遗传变异与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平、LDL和HDL颗粒大小有关[5-7]。NCBΙ的数据库中显示CETP基因有超过2 000个突变位点，其中Ι405V、TaqΙB等多态性位点与脑卒中、动脉粥样硬化、冠心病及长寿的关联性研究已有诸多报道[8-10]。陶晓明等[11]对CETP基因Taq ΙB多态性与蒙古族原发性高血压的相关性进行了研究，结果发现该位点可影响血脂水平，可能间接参与原发性高血压的发生。为了探讨海南人群中CETP基因TaqΙ位点突变与EH的关联性，笔者选择了218例高血压患者及301例对照进行了病例比对研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2013年1月至2014年12月期间在海南省干部疗养院住院治疗的218例EH患者作为EH组。该组患者年龄55～70岁，高血压诊断标准均符合以下标准：在患者未服用抗高血压药物的情况下，3次不同日期的测量平均值收缩压≥140 mmHg (1 mmHg=0.133 kPa)和/或舒张压≥90 mmHg，或者患者服用抗高血压药物，虽然血压不在上述范围内，均诊断为高血压。从同期在海南省干部疗养院体检科采集无血缘关系的海南汉族健康个体301例作为对照组。纳入标准：年龄55～65岁，肝肾功能正常，排除心血管疾病、糖尿病及血液病病史。

1.2 样本采集所有入选者抽取晨间空腹静脉血3 mL，采用EDTA抗凝保存，SDS裂解法提取DNA。

1.3 等位基因特异性PCR扩增CETP基因

1.3.1 引物的设计与合成利用Primer 5.0，参照文献[10]设计引物，引物序列如表1所示。

表1 PCR扩增引物及酶切片段

1.3.2 PCR扩增及酶切采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)和琼脂糖凝胶电泳的方法鉴定CETP基因TaqΙB位点CC(B1B1)、CT (B1B2)、TT基因型(B2B2)。PCR扩增反应采用Tgradient96型梯度PCR仪，扩增体系为20µL，其中DNA模板1µL，2×Es Taq MasterMix 10µL，上下游引物(1µmol/L)各1µL，Rnase-Free Water 7µL。PCR扩增条件：94℃预变性2 min；94℃30 s，65℃30 s，72℃35 s，34个循环；72℃再延伸10 min。酶切条件：10× FastDigest 2µL，PCR产物7µL，FastDigest enzyme (TaqΙ)1µL，65℃水浴90 min。

1.4 基因型的判断及确认

1.4.1 基因分型结果判定根据酶切产物电泳结果判断基因分型。若电泳结果只有两条条带(分别为236 bp和655 bp)，则为野生的纯合子B1B1；若电泳结果有三条条带(分别为236 bp、655 bp和891 bp)，则为杂合子B1B2；若电泳结果只有一条条带(891 bp)则为突变纯合子B2B2，如图1所示，1、3、5、7、9号样本的基因型分别为B2B2，B1B2，B2B2，B1B2，B2B2，B2B2。

图1 CETP基因TaqIB突态位点基因分型电泳图

1.4.2 基因分型结果的验证从高血压组中随机抽取3个上述建立的PCR-RFLP技术检测后分型出的各种CETP基因型的DNA样本，送上海生工生物工程技术服务有限公司进行DNA序列测定。结果表明，酶切方法鉴定的基因型与测序鉴定的基因型完全相同。

1.5 统计学方法应用SPSS19.0统计学软件对基因型分布频率及等位基因分布频率等计数资料进行χ2检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

两组受检者中CETP基因TaqΙB位点B1B1、B1B2、B2B2三种基因型和B1、B2等位基因分布频率见表2，其中基因型B1B1、B1B2和B2B2组间比较差异均无统计学意义(P值分别为0.13、0.094、0.816)，等位基因B1和B2发生频率比较差异亦无统计学意义(P＞0.05)。

表2 CETP基因TaqIB位点的基因型和等位基因频率分布[例(%)]

3 讨论

CETP在血浆胆固醇代谢中所起的关键作用引起了诸多学者对它与血脂及心脑血管疾病关联性的兴趣。前瞻性的研究结果显示该基因多态性对高密度胆固醇HDL-C的浓度有较大影响，且与疾病的发生密切相关[12-13]。陶晓明等[11]对CETP基因Taq ΙB多态性与蒙古族原发性高血压的相关性进行了研究，发现该位点的多态性与血液中HDL-C、TC、TG的水平密切相关，但与EH的发生却没有直接的相关性。本研究显示EH组CETP基因三种基因型B1B1、B1B2和B2B2的发生频率分别为38.53%、47.25%、14.22%，对照组B1B1、B1B2和B2B2的发生频率分别为45.18%、39.87%、14.95%。等位基因B1和B2在EH组中的分布频率分别为62.16%、37.84%，在对照组中为65.12%、34.88%。统计学分析结果显示CETP基因TaqΙB多态性与海南汉族原发性高血压的发生不存在显著相关性，这与陶晓明等[11]对蒙古人的研究结果是一致的。此外，蒙古人群中等位基因B2的发生频率为0.41，与东南亚人群及白种人的发生频率相近(0.42)[12-13]，而我们对海南人群的研究发现B2的频率为0.35，低于以上人群。

此外，由于本研究未统计被研究人群的血脂水平及其他相应指标，故无法探究EH组与对照组的血脂及其他指标的相关性。因此，应扩大样本量，并采集参加本研究人群的各项检查指标，并结合多种研究方法对上述结果进一步验证。

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Correlation between the TaqIB polymorphism of CETP gene and essential hypertension in Hainan Hanpopulation.

SU Ya1,2,SUN Yue1*,ZHOU Cai-dong1,XIA Ru-hong1,QU Xian-hua1,LI Bing1,ZHANG Yun-xia1.1. Hainan Medical University,Haikou 571101,Hainan,CHINA;2.Cadre Sanatorium of Hainan Province,Haikou 571100, Hainan,CHINA

ObjectiveTo analyze the correlation between the TaqΙB polymorphism of CETP gene and essential hypertension(EH)in Hainan Han population.MethodsA total of 301 cases of healthy controls(control group)and 218 cases of EH patients(EH group),who were admitted to the Cadre Sanatorium of Hainan Province from March 2013 to January 2014,were enrolled for this study.The blood DNA was extracted and detected by restriction fragment length polymorphism(RFLP)to understand the TaqΙB polymorphism of CETP.The detection results were analyzed statistically by SPSS21.0.ResultsThe frequencies of B1B1,B1B2 and B2B2 were respectively 38.53%,47.25%,14.22%in EH group,and 45.18%,39.87%,14.95%in the control group.The allele frequencies of B1 and B2 were respectively 62.16%,37.84%in EH group,and 65.12%,34.88%in control group.Pairwise comparisons of all of the above indicators between the two groups had no statistical significance(P＞0.05).There was no statistically significant difference between the two groups in the B1B1,B1B2 and B2B2 genotype,B1/B2 allele frequency distribution on the TaqΙB locus of CETP gene(P＞0.05).ConclusionThere is no significant correlation between the TaqΙB polymorphism of CETP gene and essential hypertension(EH)in Hainan Han population.

Essential hypertension;CETP gene;Hainan Han population;Genetic polymorphism;Single nucleotide polymorphism(SNP)

R544.1

A

1003—6350（2016）13—2077—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.13.004

2015-12-23)

海南省自然科学基金（编号：814364）；海南医学院大学生创新实验项目（编号：HYCX2014040）

张云霞。E-mail：zhangyunxia1977@qq.com

*共同第一作者