血清和糖皮质激素诱导激酶1 rs2811681和rs2758152与自然流产的关系

何淑贞，蒲育栋，曹金如，陈寿云，邓汉钊，周玉玲

(东莞市第三人民医院产前诊断中心，广东 东莞 523326)

血清和糖皮质激素诱导激酶1 rs2811681和rs2758152与自然流产的关系

何淑贞，蒲育栋，曹金如，陈寿云，邓汉钊，周玉玲

(东莞市第三人民医院产前诊断中心，广东 东莞 523326)

目的 探讨血清和糖皮质激素诱导激酶1(SGK1)rs2811681和rs2758152与自然流产之间的关系。方法选取2013年1～12月我院64例自然流产患者作为病例组，同期40例人工流产患者作为对照组，采用3730XL测序仪检测血清SGK1 rs2811681和rs2758152基因多态性，χ2检验比较病例组与对照组基因型及等位基因频率分布。结果①SGK1-rs2811681对照组基因型是AG+GG，而病例组以AG+GG为主，其次是AA，两组基因型分布比较差异有统计学意义(P＜0.05)；对照组等位基因A和G频率各占50.0%，而病例组A占64.8%，G占35.2%，对照组和病例组等位基因频率比较差异具有统计学意义(P＜0.05)，②SGK1-rs2758152对照组基因型GT+TT和GG各占50.0%，而病例组GT+TT占29.7%，GG占70.3%；等位基因频率对照组G占75.0%，T占25.0%，而病例组G占82.0%，T占18.0%。对照组和病例组基因型及等位基因频率比较均无统计学意义（P＞0.05）。结论SGK1 rs2811681与自然流产有关，而SGK1 rs2758152与自然流产无关。

血清和糖皮质激素诱导激酶1；自然流产；基因多态性；相关性

自然流产多发生在妊娠12周以内，该病的病因十分复杂，50%～60%的自然流产与胚胎染色体异常有关[1]。近几年的研究表明[2-4]，血清和糖皮质激素诱导激酶1 (SGK1)具有广泛的生理功能，其表达及活性增加参与了多种疾病病理过程的发生、发展。Salker等[5]的研究表明，患有原因不明性不孕症妇女的子宫内膜中血清和糖皮质激素诱导激酶1(SGK1)含量较正常孕妇高，而习惯性流产者的SGK1含量则较正常孕妇低。本研究旨在探讨SGK1 rs2811681和rs2758152与自然流产的关系，进一步阐明自然流产的分子生物学机制，以便为更好的寻找自然流产的病因提供借鉴依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2013年1～12月期间在我院就诊的自然流产患者作为病例组，年龄19～40岁，平均(29.6±4.3)岁。纳入对象无染色体因素、解剖因素、感染因素、内分泌因素、抗磷脂综合征及血管栓塞性疾病等。所有研究对象均未生育过小孩。选择同期进行人工流产的患者作为对照组，年龄19～36岁，平均(28.0±4.5)岁。两组间的年龄差异无统计学意义(t= 1.889，P=0.062)。本研究经本院伦理委员会批准，所有对象均签署知情同意书。

1.2 研究方法

1.2.1 标本采集和抽提 收集所有对象的一般临床资料，同时采集2 mL EDTA抗凝血，-80℃冰箱保存，用于提取DNA。按DNA提取试剂盒(Axygen)说明书要求进行操作，从全血标本中提取基因组DNA。

1.2.2 主要试剂和仪器 外周血基因组DNA抽提试剂盒、Taq DNA聚合酶、DNA Marker均购自上海翼和应用生物技术有限公司，引物由该公司合成。PRISM 3730序列分析仪购自美国ABI公司。

1.2.3 引物设计与合成 通过NCBI基因序列数据库获得SGK1基因rs2811681 G/A和rs2758152 G/T核苷酸序列，并用Primer 5.0设计引物序列如下：上游引物3'-AGCCGGCATCAATCTTTAAT-5'，下游引物3'-GCAAAAGCACCCTGTAGGC-5'，扩增产物长度是700 bp。

1.2.4 PCR扩增 采用20µL PCR扩增反应体系，含1µL模板DNA，上下游引物各1µL，2µLdNTP，0.2µL Taq聚合酶，2µL反应缓冲液，0.6µL Mg2+，12.2µL双蒸水。PCR反应条件：先于95℃预变性2 min，94℃30 s，59℃1 min 30 s，72℃1 min 30 s，40个循环后，72℃延伸10 min。将PCR扩增产物使用美国应用生物系统公司3730XL测序仪测序。

1.3 统计学方法 采用SPSS16.0统计软件进行统计分析，数据用频数和构成比表示。Hardy-Weinberg平衡用于检测各基因型分布，χ2检验用于比较病例组与对照组基因型及等位基因频率，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 rs2811681基因型及等位基因分布 对照组基因型是AG+GG，而病例组以AG+GG为主，其次是AA，对照组和病例组基因型比较，差异具有统计学意义；对照组等位基因A和G频率各占50.0%，而病例组A占64.8%，G占35.2%，对照组和病例组等位基因频率比较，差异具有统计学意义，见表1。

2.2 rs2758152基因型及等位基因分布 rs2758152对照组基因型GT+TT和GG各占50.0%，而病例组GT+TT占29.7%，GG占70.3%，两组间基因型比较差异无统计学意义。等位基因频率对照组G占75.0%，T占25.0%；而病例组G占82.0%，T占18.0%，两组间等位基因频率比较差异无统计学意义，见表2。

表1 SGK1-rs2811681与流产的关系[例(%)]

表2 SGK1-rs2758152与流产的关系[例(%)]

3 讨 论

自然流产是妊娠期常见的并发症之一[6]，其病因复杂，分子机理众多。SGK1是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，在人和小鼠子宫内膜孕酮水平上升时，它会迅速进行响应。人SGK1基因位于6q23，包含12个外显子，约长5.5 kb。近几年的研究表明，SGK1与代谢综合征、子痫前期等疾病密切相关[7-8]。有研究报道，SGKl对于建立子宫内膜容受性和维持妊娠有着重要的作用[5]。

本研究结果发现，SGK1 rs2811681基因型由对照组的AG+GG转变为病例组的AA、AG+GG，由OR值2.111可知，AA基因型是引起流产的危险因素，孕妇AA基因型越多，则越容易发生流产。而等位基因频率也由对照组A和G各占50.0%，转变为病例组A占64.8%，G占35.2%，由OR值0.542可知，等位基因G是保护性因素，如果G突变为A，则流产发生的概率将会增加。SGK1 rs2758152基因型和等位基因频率对照组与病例组比较差异均无统计学意义，表明SGK1 rs2758152与自然流产无关。

本研究所发现的上述变化，考虑可能是由于SGK1 rs2811681的等位基因G突变为A，导致SGK1磷酸化后被激活，通过磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷脂酰肌醇三磷酸(PIP3)、三磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1和2(PDK1和PDK2)信号通路发挥其生理作用；也可能是SGK1磷酸化激活泛素连接酶Nedd4-2，促使其降解，从而导致一系列的生理变化。我们的标本量较小，得出的结果尚有待今后更大样本量去证实，我们将在今后的研究中增加样本量及相关指标，以期获得更加准确的证据，为自然流产的研究提供借鉴依据。

[1]Practice Committee of American Society for Reproductive Medicine. Definitions of infertility and recurrent pregnancy loss:a committee opinion[J].Fertility and Sterility,2013,99(1):63.

[2]Wu C,Yosef N,Thalhamer T,et al.Induction of pathogenic TH17 cells by inducible salt-sensing kinase SGK1[J].Nature,2013,496 (7446):513-517.

[3]Lang F,Shumilina E.Regulation of ion channels by the serum-and glucocorticoid-inducible kinase SGK1[J].FASEB,2013,27(1): 3-12.

[4]张舒静.肝纤维化大鼠SGK1的表达变化及坎地沙坦对其的影响[D].太原:山西医科大学,2011.

[5]Salker MS，Christian M，Steel JH，et al.DereguLation of the serum and glucocorticoid-inducible kinase SGK1 in the endometrium causes reproductive failure[J].Nature Medcine,2011,17(11): 1509-1513.

[6]路妍妍,金海燕,田耕.自然流产患者蜕膜组织中CXCR4的表达及意义[J].海南医学,2015,26(13):1892-1893.

[7]潘丰慧,李平,朱大龙.SGK1与代谢综合征[J].国际内分泌代谢杂志,2012,32(4):267-269.

[8]战玉峰,董晓静,张雪蕊,等.血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1和缺氧在子痫前期发病作用的研究[J].重庆医科大学学报,2015, 40(10):1363-1367.

Association of SGK1 rs2811681 and rs2758152 polymorphisms with spontaneous abortion.

HE Shu-zhen,PU Yu-dong,CAO Jin-ru,CHEN Shou-yun,DENG Han-zhao,ZHOU Yu-ling.Prenatal Diagnosis Center,the Third People's Hospital of Dongguan City,Dongguan 523326,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo analyze the association of SGK1 rs2811681 and rs2758152 polymorphisms with spontaneous abortion.MethodsSixty-four cases of spontaneous abortion,who enrolled into our hospital during January 2013 to December 2013,were chosen as the case group,and 40 cases of artificial abortion were selected as a control group for the same period.Polymorphisms of SGK1 rs2811681 and rs2758152 were detected by 3730XL sequencer.Genotype and allele frequency distribution of SGK1 rs2811681 and rs2758152 in the case group and the control group were compared with χ2test.Results①rs2811681 genotype in the control group was AG+GG,while rs2811681 genotype in case group was AG+GG,followed by AA.Control group and case group have a statistically significant difference(P＜0.05).Allele frequency of A and G in the control group was equally 50.0%,while allele frequency of A and T in case group were respectively 64.8%and 35.2%,with a statistically significant difference between the control group and case group(P＜0.05).②rs2758152 genotype of GT+TT and GG in the control group were equally 50.0%,while rs2758152 genotype of GT+TT and GG in the case group were respectively 29.7%and 70.3%.Allele frequencies of G and T in the control group were respectively 75.0%and 25.0%,while allele frequencies of G and T in the case group were respectively 82.0%and 18.0%.Genotype and allele frequency of rs2758152 in case group and control group have no statistically significant difference(P＞0.05).ConclusionSGK1 rs2811681 has a significant correlation with spontaneous abortion, while SGK1 rs2758152 has no significant correlation with spontaneous abortion.

Serum and glucocorticoid-regulated protein kinase 1;Spontaneous abortion;Polymorphism;Correlation

R714.21

A

1003—6350（2016）11—1762—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.11.013

2016-01-05)

广东省科技厅社会发展领域科技计划项目（编号：2012B032000015）

周玉玲。E-mail：zhouyuling88@163.com