血清Bcl-w和Bid蛋白在哮喘急性重度发作患儿中的表达及意义

张微，张冰，陈旭央，胡莉蔓，施冰玲

（乐清市人民医院，浙江 乐清 325600）

血清Bcl-w和Bid蛋白在哮喘急性重度发作患儿中的表达及意义

张微，张冰，陈旭央，胡莉蔓，施冰玲

（乐清市人民医院，浙江 乐清 325600）

目的 探讨凋亡因子Bcl-w和Bid蛋白在哮喘急性重度发作患儿中的表达及意义。 方法 50例哮喘患儿分别在哮喘急性重度发作期、缓解期采集静脉血，酶联免疫吸附试验法检测血清Bcl-w和Bid蛋白的水平。 结果 哮喘组急性期血清Bcl-w和Bid的水平分别为（57.14±2.23）ng/mL和（78.00±2.13）ng/mL，显著高于缓解期（40.48±1.66）ng/mL和（57.42±2.01）ng/mL（均P<0.01）；两指标呈直线正相关（r=0.32，P＜0.01）。 结论 哮喘儿童急性期血清Bcl-w和Bid的水平升高，缓解期下降，共同起着保持凋亡动态平衡的作用。

哮喘；凋亡；发病机制；Bcl-w；Bid

很多研究证实，凋亡因子在癌症的发病机制中起着非常重要的作用[1-2]。最近研究却发现，凋亡因子参与了支气管哮喘（以下简称“哮喘”）的发病机制，但不同的因子表达水平不同[3]。抗凋亡蛋白Bcl-w和Bid都是Bcl-2家族成员，分别具有抑凋亡或促凋亡的作用，它们与哮喘的关系则鲜见报道。本文通过观察哮喘患儿血清Bcl-w和Bid的表达，探讨它们在哮喘发病机制中的作用，为哮喘的靶向治疗提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2014年10月~2015年10月本院50例儿童哮喘患者，符合哮喘急性重度发作的诊断标准，急性期是指突然发生喘息、咳嗽、气促、胸闷等症状，或原有症状急剧加重；缓解期指经过治疗或未经治疗，症状、体征消失，肺功能恢复到急性发作前水平，并维持3个月以上[4]。其中男30例，女20例，年龄3~5岁，平均（4.2±0.7）岁。50例患儿每天接受雾化吸入布地奈德溶液（1mg/次，每天2次）和博利康尼溶液（2.5mg/次，每天2次），静脉使用甲基强的松龙[1~2mg/（kg·次），2次/d]及孟鲁司特[（4mg/d，1次/d]等综合治疗。

1.2 方法 分别留取哮喘急性发作期及缓解期静脉血各2mL，静置2小时，3000转/min离心取血清，-80℃低温冰箱保存，留作一次性检测。Bcl-w和Bid抗体ELISA试剂盒均购自上海研吉生物技术有限公司 （生产批号分别为201508和201512），ELISA法检测血清Bcl-w和Bid的表达。按照说明书操作，具体步骤如下∶标本和96孔酶标板平衡至室温，设置标准孔和样本孔，各孔加不同浓度的标准品和样本各50mL，加辣根过氧化物酶标记的抗体100μL，37℃水浴1小时，加洗涤液重复洗板5次，加入底物A、B各50μL 37℃避光水浴15分钟，加终止液，450nm波长处测定各孔的吸光度值。

1.3 统计学处理 采用SPSS 16.0统计软件，数据采用（）表示，哮喘组治疗前后比较采用配对资料t检验，并采用直线相关分析法分析。

2 结果

2.1 哮喘发作不同时期Bcl-w和Bid的表达 哮喘急性期血清Bcl-w和Bid的浓度显著高于哮喘缓解期（P<0.01），详见表1。

表1 血清Bcl-w和Bid的水平哮喘急性期和缓解期（，ng/mL）

表1 血清Bcl-w和Bid的水平哮喘急性期和缓解期（，ng/mL）

与急性期比较**P＜0.01

时间 n Bcl-w Bid急性期 50 57.14±2.23 78.00±2.13缓解期 50 40.48±1.66**57.42±2.01**

2.2 血清Bcl-w与Bid表达的相关性 血清Bcl-w与Bid蛋白的水平之间呈直线正相关（r=0.32，P＜0.01）。

3 讨论

目前已发现Bcl-2家族成员超过25个，均具有不同的生理功能，处于动态平衡中，分别为Bcl-w和Bid等。Bid是一种促凋亡蛋白，通过与Bcl-2蛋白家族其它成员相互作用，在朊酶类介导的细胞凋亡中起着重要作用，是朊酶类凋亡途经的标志物。最近研究发现它不仅仅是一个细胞杀伤分子，而且是有丝分裂的检查点，起着维护基因稳定的作用，被Fas/TNF-R1/Caspase 8信号途径激活[5]；Bid还可能参与核苷酸结合和寡聚化结构域的天然免疫过程[6]。Bcl-w则具有抑制细胞凋亡的功能，也是通过与家族蛋白及其他相关蛋白等发挥着复杂的抗凋亡功能[7]。

以往的研究发现，Bcl-2家族成员参与了哮喘的发病机制。哮喘小鼠Bcl-xL的基因表达增高，布地奈德能下调它的表达[8]。在哮喘大鼠气道重塑模型的肺组织中，Bcl-2、Bax蛋白含量明显增加，经氨茶碱治疗后它们的表达水平进一步升高[9]。也有研究发现，哮喘小鼠肺组织Bcl-2表达升高，而Bax表达却下降[10]。上述的研究提示不同的凋亡因子在不同的组织中，其基因或蛋白的表达可能不同。

本文发现，哮喘组急性期血清Bcl-w和Bid水平会升高，并在缓解期下降，提示哮喘急性期，血清中凋亡因子发生了改变，促进凋亡作用和抑制凋亡作用的因子都得到了提升。在缓解期，凋亡因子随着哮喘炎症的减轻而向正常水平恢复，促凋亡因子和抑制凋亡因子的表达水平随着疾病的演变保持着凋亡的动态平衡。通过相关性分析，血清Bcl-w和Bid的表达水平存在直线正相关，表明促凋亡因子和抑制凋亡因子之间相互联系、相互影响，在凋亡的通路上共同起作用。

综上所述，哮喘儿童急性期血清Bcl-w和Bid蛋白的水平升高，缓解期下降，共同起着保持凋亡动态平衡的作用。

[1] 潘麒，张连华，杨国良，等.Bcl-w在肿瘤发生发展中的作用.肿瘤学杂志，2014，20（10）∶838

[2] 任磊，周业江，刘春凤.Bcl-2/Bid在胃癌的差异性表达与临床意义.中国现代医学，2013，23（20）∶51

[3] 李昌崇，胡晓光，张维溪，等.哮喘幼年大鼠嗜酸细胞凋亡、fas mRNA和Bcl-2 mRNA表达及牛膝多糖的影响.中华儿科杂志，2003，41（9）∶657

[4] Global Strategy for Asthma Management and Prevention. GINA Report，2014，http∶//www.ginasthma.org/documents/4

[5] Wang Y，Tjandra N.Structural insights of Bid，the caspase-8-activated Bid，and its BH3 domain.J Biol Chem，2013，288（50）∶35840

[6] Yeretssian G，Correa RG，Doiron K，et al.Non-apoptotic role ofBID in inflammation and innate immunity.Nature，2011，474（7349）∶96

[7] 戴晓莉，王敏，杜鸿.人Bcl-w基因的克隆和原核表达.江苏大学学报（医学版），2012，22（2）∶176

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[9] 段旭东，赵辉，王晓红，等.氨茶碱对哮喘呼吸道重塑大鼠支气管组织中Bcl-2及Bax蛋白含量的影响.中国老年学杂志，2010，30（11）∶1536

[10]杜文静，董竞成，蔡萃，等.淫羊藿苷对哮喘小鼠肺内嗜酸性粒细胞凋亡和Bcl-2、Bax基因蛋白表达的影响.中国中西医结合杂志，2011，31（9）∶1248

温州市医药卫生科学研究项目计划（2013B68）