展青霉素污染现状及检测方法进展综述

赵红磊　赵红艳　于敦洋

摘要：展青霉素作为一种真菌毒素，在腐败霉烂的水果中经常存在。当前展青霉素的检测方法主要是薄层色谱和液相色谱法，这两种方法特异性差，假阳性不可避免，液相色谱-串联质谱法由于仪器成本高，难以广泛推广，特异性高、简便、灵敏、快速的免疫学方法是今后需要重点开发的一个方向。

关键词：展青霉素 污染检测 方法进展

展青霉素（Patulin），多聚乙酰内酯类化合物，其化学名称为4-羟基-4氢-呋喃-[3，2c]-吡喃-2（6）-酮[1]，化学式C7H6O4，分子量154。

展青霉素在酸性环境中非常稳定，在碱性条件下活性降低。展青霉素最先在霉烂苹果和苹果汁中发现，并广泛存在于各种霉变水果中。许多青霉能产生展青霉素，包括展青霉、棒型青霉等共3属16种，这种毒素具有影响生育、致癌和免疫等毒理作用。同时，该青素也是一种神经毒素，可能使人神经麻痹、肺水肿、肾功能衰竭[1]。

1 展青霉素污染现状

展青霉素主要污染水果及其制品，尤其是苹果、山楂等[1]。有研究表明，展青霉素的污染不分地域，在国内外均有发现。贺玉梅等[2]对采自北京市5个区县7个生产厂家的109个水果制品进行了分析，其中测定的28份果酱中展青霉素自然污染的阳性率为31.3%；宋家玉等[3]对山东地区的水果中展青霉素污染情况进行了调查分析，发现新鲜水果未见污染，霉烂苹果污染率40%，苹果制品污染率70%，阳性样品平均含量80.6μg/kg，山植制品污染率31.4%，平均含量51.9μg/kg；鲁琳等[4]对广东省市场销售的苹果、山楂制品中展青霉素残留量的情况进行了考察，结果发现展青霉素检出率7.2%，超标率占样品总数的1.2%；吴南等[5]、刘勇等[6]也分别对我国不同省市的水果制品进行了考察，阳性检测率分别为76.9%和73.3%，以上结果说明我国水果及其制品展青霉素污染情况比较普遍。

鉴于展青霉素潜在的毒性及危害性，我国对展青霉素的限量也作了规定，GB 2761-2011《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》规定以苹果及山楂为原料制成的产品中（果丹皮除外）展青霉素限量为50μg/kg。

2 检测方法现状

2.1 薄层色谱法

薄层色谱法是最早应用于展青霉素检测的方法，具有设备简单、经济的特点，为展青霉素的广泛检测发挥了重要作用。Silvana等[7]建立了一种快速薄层色谱法检测苹果制品中展青霉素的方法，可同时检测10个样品。方法检测限分别为20ng/g和12ng/g，平均回收率为78%，适用于展青霉素含量50～150μg/kg的样品测定。刘勇等[8]利用1.5%碳酸钠净化样品、经双向薄层分离后，利用CS-910薄层扫描仪进行紫外反射光扫描定量。方法平均回收率为90%～104%，展青霉素最低检出量为2ng。

但是薄层色谱法在实际检验过程中操作繁琐，重复性差，在有酚类物质存在的条件下，有可能出现假阳性，需进行确证性试验。

2.2液相色谱法

随着检验设备的发展，高效、快速、准确的液相色谱仪也越来越多地应用于展青霉素的检测。邓鸣等[9]采用1%醋酸溶液提取，经分子印迹固相萃取柱净化，以乙腈-水作为流动相，C18色谱柱分离，紫外检测波长为276nm。结果展青霉素在4.83～96.59ng/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系，相关系数为0.9999，方法检测限为3μg/kg，回收率在72.9%～86.0%。

高效液相色谱法最主要的就是展青霉素与羟甲基糠醛的分离。方法一般都用大量有机溶剂提取，以碳酸钠净化，但在此条件下展青霉素容易被破坏，回收率降低，而且由于液相色谱法中紫外检测器的局限性，假阳性的情况不可避免会发生。因此液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS/MS）越来越多地被应用于展青霉素的检验和确证试验。

牛华等[10]建立了超高效液相色谱-电喷雾串联三重四极杆质谱（UPLC-ESI-MS/MS）联用技术分析果汁中展青霉素的方法。浓缩果汁样品经酶解，乙酸乙酯提取，固相萃取（SPE）小柱净化后，以水和乙腈作为流动相进行梯度洗脱，电喷雾离子源负离子多反应监测模式质谱进行分析。展青霉素在1.0～500.0μg/L范围内线性关系良好，定量限为5.0μg/kg；加标回收率为80.6%～91.8%。液相色谱串联质谱仪能够确证展青霉素，但是设备价格高，难以广泛推广。

2.3 免疫学检测方法

免疫学方法以其特异性、高通量、快速简便等优点，在检测领域发展迅速，应用前景非常广阔。目前，展青霉素的主流检测方法还是色谱法，但是其免疫学方法也不断被开发、完善。1993年Mcelroy等人[11]首次提出了展青霉素的间接酶联免疫（ELISA）检测方法。从而实现了对展青霉素的快速特异性检测。Wang等人[12]指出免疫技术抗原制备繁琐、检测成本高，而且由于抗原分子小，容易受到基质影响，假阳性也难免存在。由于免疫学技术的高特异性，很多成品试剂盒也被开发出来，并被应用于实验室快速检测。免疫学技术作为一种新兴技术，由于其简便、灵敏、检测快速等优点，仍然有巨大的发展前景，是未来展青霉素检测的发展方向。

3 展望

当前，食品安全问题日益受到社会关注，食品安全问题时有发生，因此，检验技术的提高需求日益迫切。当前展青霉素的检测方法主要是薄层色谱和液相色谱法，这两种方法特异性差，假阳性不可避免，液相色谱-串联质谱法由于仪器成本高，难以广泛推广，特异性高、简便、灵敏、快速的免疫学方法是今后需要重点开发的一个方向。

参考文献

[1] 周玉春等.展青霉素的研究进展[J].贵州农业科学，2010，38（2）：112-116.

[2] 贺玉梅，贾珍珍.北京市部分水果制品霉菌及展青霉素的污染情况调查[J].卫生研究，1993，（3）：173-176.

[3] 宋家玉，邢金川，林艺，吴南，王玉华.山东省部分水果及制品中展青霉素污染调查分析[J].中国食品卫生杂志，1995，（2）：43-44.

[4] 鲁琳，高燕红，许秀敏，黄湘东，李晖.2005～2007年广东省抽检苹果、山楂制品中展青霉素残留量结果分析[J].中国卫生检验杂志，2008，18（8）：1591-1604.

[5] 吴南，王玉华，刘勇，宋家玉，杨新民.我国部分地区水果制品中展青霉素含量的调查[J].卫生研究，1992：（03）：67-68.

[6] 刘勇，胡文娟.我国部分地区霉烂苹果及部分水果制品中展青霉素的测定[J].卫生研究，1991：（4）：35-37.

[7]SilvanaVero，AlvaroVazquez，MatildeSoubes.A rapid TLC-scanning method for the determination of patulin in apple products[J].Journal of Planar Chromatography，1999，12（3）：172-174.

[8]刘勇，胡文娟.苹果及其制品中展青霉素的薄层扫描测定法[J].卫生研究，1988，17（4）：42.

[9]邓鸣，朱斌，宾春燕.分子印迹固相萃取-高效液相色谱法测定中成药中展青霉素[J].中成药，2014，36（10）：2224-2226.

[10]牛华，冯雷，牛之瑞，珠娜，祝红昆，超高效液相色谱-串联质谱法测定果汁中的展青霉素[J].色谱，2012，30（09）：957-961.

[11] LJ Mcelroy，CM Weiss. The production of polyclonal antibodies against the mycotoxin derivative patulin hemiglutarate[J].Canadian Journal of Microbiology，1993， 39（9）：861-3.

[12] YingWang， NanLiu， BaoanNing， MingLiu. etal. Simultaneous and rapid detection of six different mycotoxins using an immunochip[J].Biosensors&Bioelectronics，2012，34（1）：44-50.