犬细小病毒病的实验室诊断技术

邓文超

（辽宁省动物疫病预防控制中心，辽宁 沈阳 110164）

犬细小病毒病的实验室诊断技术

邓文超

（辽宁省动物疫病预防控制中心，辽宁 沈阳 110164）

犬细小病毒是犬的一种常见的传染病，临床常见，可以通过直接接触或者间接接触传播该病，该病分为两种表现型：肠炎型与心肌炎型。肠炎型常以主要以呕吐和严重腹泻为临床特征。心肌炎型犬呼吸与心血管的衰竭。该病发病较急，如果不及时治愈死亡率较高。目前诊断该病多以临床症状进行判定，实验室检测方面的研究和报道较少，现将目前实验室诊断技术综述如下：

1 PCR诊断技术

PCR诊断技术具备快速，灵敏，准确的优点，目前该方法已经在出入境检验检疫，动物防疫等部门广泛应用，且建立了多种动物疫病检测的国家标准和行业标准。姚大伟等根据犬细小病毒基因的保守序列应用引物设计软件设计了检测引物,通过体系优化与反应条件的摸索，建立了犬细小病毒的PCR诊断方法，扩增目的片段大小为448bp，并对37份临床病料进行了检测，结果表明该方法完全适用于犬细小病毒病的临床诊断。刘忠华等利用PCR技术研制犬细小病毒的PCR诊断试剂盒。该试剂盒具有特异、灵敏等优点。

2 巢式PCR诊断技术

巢式PCR是在经典PCR方法原理的技术上的一种改良，该方法特点是敏感性较高。简子健等以犬细小病毒的VP2基因序列的保守区域应用生物软件设计了二对巢式PCR引物,成功建立了犬细小病毒的巢式PCR诊断方法，该方法以从病犬腹泻物中提取的DNA为模板，进行巢式PCR扩增。该方法特异性较好，与犬类的其他病原无交叉，敏感性较强，检测限度为10-9个稀释度，对采集的临床样品进行检测，阳性率为76.9%。

3 胶体金诊断技术

胶体金快速诊断技术，是近年来发展起来的一种快速简单实用的免疫学诊断技术。该技术目前已经广泛的应用在奶牛，家禽，猪等传染病的病原和抗体检测，是目前推广应用最好的一种诊断技术。王中力等应用纳米金标记犬的细小病毒的单克隆抗体为捕获抗体，同时在膜上喷印上多克隆抗体，建立了夹心法检测犬细小病毒的胶体金试纸条。该方法简单，快速，方便。5min既可判定结果。与其他方法同时对临床样品进行检测，符合率达95%以上，结果证明该方法可以在临床上进行快速诊断，也可以进行流行病学调查。

4 ELISA方法

赵国星等利用真核表达的犬细小病毒病毒样颗粒纯化后作为包被抗原建立犬细小病毒的间接ELISA检测方法，可特异性检测犬细小病毒阳性血清，与其他阳性血清均不发生反应。该方法的敏感性为1∶640。赵丹等用表达纯化的重组蛋白免疫家兔制备VP2多抗,采用辣根过氧化物酶进行标记,初步建立了竞争ELISA方法。姜骞等用纯化的犬细小病毒重组VP2蛋白为包被抗原,建立了检测犬细小病毒抗体的间接ELISA方法。

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2016．05.119