新的天然橡胶胶乳制品过敏原快速测试系统

2016-02-15庞继伟峰编译

世界橡胶工业 2016年12期

关键词：胶乳测试方法过敏原

庞继伟，宋峰编译

[1.青岛科技大学高分子科学与工程学院，山东青岛 266042；

2.青岛科诺化工有限公司，山东青岛 266000；

3.特瑞堡工程系统（青岛）有限公司，山东青岛 266111]

新的天然橡胶胶乳制品过敏原快速测试系统

庞继伟1,2，宋峰3编译

[1.青岛科技大学高分子科学与工程学院，山东青岛 266042；

2.青岛科诺化工有限公司，山东青岛 266000；

3.特瑞堡工程系统（青岛）有限公司，山东青岛 266111]

为了测定天然橡胶胶乳制品中的过敏原，马来西亚橡胶局最近研发了一种横向流动免疫测试方法，此方法被命名为Latex-T。这种测试方法操作简便，可在制造现场进行快速测定，测定可在15 min内完成。现场测得的数据已被实验室中其他测试方法验证。

胶乳；过敏；Latex-T

0 前言

天然橡胶胶乳在胶乳制品生产中应用广泛，其中最重要的应用是制造与医疗卫生保健相关的制品，例如检查用胶乳手套。自20世纪80年代后期以来，有许多报告证实了经常接触胶乳制品的医护人员易产生接触性过敏。

过敏与天然橡胶制品中胶乳本身的性质有关，即，天然胶乳制品中残留的大量蛋白质及一些胶乳组分会导致过敏。

至今为止，有13种胶乳蛋白质被国际免疫学联合会（IUIS）识别为过敏原，详见表1。马来西亚橡胶研究所识别和命名了5种被IUIS提及的最主要的胶乳过敏原。

目前，实验室对天然胶乳制品过敏风险的评估是按照国际标准进行的。最广泛使用的评估过敏风险的通用方法是基于总蛋白质含量的间接测试方法。这种测试方法基于Lowry测试，并被美国（ASTM）和欧洲(CEN)的委员会规范化为标准方法，标准号分别是ASTM D 5712-10和EN455-3:2006。这种方法的局限性在于只计算总蛋白质含量，缺少对不同胶乳过敏原的差异性数据。

其他可行的方法包括通过酶联免疫吸附试验（ELISA）测定特定胶乳抗原方法，放射过敏原吸附抑制试验（RAST inhibition assay）和胶乳过敏原测量测试（FitKit）。第一种方法使用对天然胶乳蛋白免疫的兔子的抗血清，测试胶乳产品提取物中的抗原蛋白含量。这种方法被归入到ASTM D 6499中。放射过敏原吸附抑制试验（RAST）是一种基于使用从胶乳过敏病人体内提取的人体 IgE抗体进行ELISA测试的方法。这是目前可以提供对天然胶乳样品过敏风险测试的最好的方法。胶乳过敏原测量测试（FitKit）是一种捕获ELISA测试方法，它使用特定的抗体对抗13种过敏原中的4种。ASTM D 7427描述了这种方法。

表1 世界卫生组织-国际免疫学联合会(WHO-IUIS)对天然胶乳过敏原的分类列表

如果忽略不同测试方法的有效性，胶乳过敏研究和测试领域的共同观点是∶由于现有的方法成本高昂，且受实验室实际使用的仪器影响，它们都有局限性。截止到目前，仍需要开发一种简单有效的方法，来监控胶乳制品潜在的过敏风险。

马来西亚橡胶局（MRB）研究了一种新的胶乳测试方法∶基于横向流动免疫测试的方法，被命名为Latex-T。

1 试验

横向流动测试设备（LFD）是一种基于免疫色谱的测定方法，在这种方法中，蛋白质和抗体之间的差异性被用于被分析物的快速检测。目前研究中应用的分析方式是直接横向流动方式，或称夹层方式。

将一滴液体样品滴入样品垫的测试条一端，随后沿测试条扩散到联结垫上。俘获抗体与胶体金颗粒结合并固定在联结垫上。当液体样品扩散通过联结垫时，干燥的联结垫再活化，同时分析物与特定结合抗体结合。如此形成的免疫复合物沿着硝基纤维素膜连续迁移到另一个结合抗体的位置，即已经被吸附在检测线的检测抗体的位置。两种抗体，即联结垫上的第一种抗体和检测线上的第二种抗体，结合在抗原周围形成类似免疫复合物的夹层结构。检测线上的检测抗体的作用是俘获通过检测线迁移的包含被分析物和结合物的免疫复合物。多余的试剂被吸收垫吸收（图1）。

图1 夹层式横向流动免疫测试条的典型结构

线的表现形式是阳性（A）或者阴性（B），分别对应样品中被分析物的存在或不存在。这种快速测试中还包含第二条线，即对比线，表示测试已经完成（图2）。

图2 a) 当被分析物的样品滴入样品垫中, 液体沿测试条流动扩散, 在测试线(T)和对比线(C)均出现颜色;b) 当样品不含被分析物时, 液体流经测试条,仅对比线(C)有颜色

开发的单克隆抗体用于检测两种主要的胶乳过敏原，且被认为是此次研究中最适合该类型检测的抗体。为每一种过敏原选择了合适的抗体对，即俘获抗体和检测抗体，这些抗体对可以形成最稳定的类似抗原-抗体复合物的夹层结构。

2 结果与讨论[1]

马来西亚橡胶局（MRB）位于英国的敦阿都拉萨研究中心（TARRC）和马来西亚橡胶研究所（RRIM）联合开发了一种用于评估天然胶乳制品过敏风险的新测试方法。

这种被命名为Latex-T的测试方法，可安置在一个便携式试剂盒中，其包含胶乳过敏检测所需的所有试剂和工具（图3）。这种方法可以测试胶乳制品样品中是否含有两种主要的过敏原。

图3 Latex-T试剂盒包括2个独立包装的过敏原检测设备、一个提取缓冲瓶、一个吸管，以及使用说明书和对比图

这种测试方法快速且操作简便，一次分析可以在15 min内完成。使用者仅需具备基本的知识和技能，输入较少的信息即可测试。这种测试方法被设计成界面友好并支持可移动性，允许进行现场快速检验。这些特性使新方法成为胶乳过敏原检测的有效工具，特别是在没有实验室专业检测设备的环境中。例如在制造工厂中，可以在制品生产过程中进行测试，或者生产完毕后立即进行快速检测。

图4以检验胶乳手套样品中是否含有过敏原为例，说明了如何使用这种试剂盒。首先，样品被切成小片，在缓冲提取瓶中高频震荡2 min以提取蛋白质。将一滴液体样品滴在测试条一端的孔中，液体在膜上向测试条的另一端扩散。如果提取物中含有过敏原，10 min后在测试线（T）和空白线（C）分别出现粉红色的线；如果没有过敏原，只有一条对比线显示，表示测试的有效性（图5）。

这种方法可以直接用于样品中是否含有过敏原的定性测试。而且，这种方法还可以用于过敏原含量的定量测试。T线的强度随提取物中过敏原含量的不同而变化。过敏原浓度可以用试剂盒自带的对比图进行评估和判定，或者使用更精确的横向流动测试设备读取（图6和图7）。