高危型HPV和其E6、E7 mRNA与宫颈病变的相关性研究

俞俊霞戴小波*

(1 无锡市惠山区人民医院病理科，江苏 无锡 214187；2 南京大学医学院附属鼓楼医院病理科，江苏 南京 210008)

高危型HPV和其E6、E7 mRNA与宫颈病变的相关性研究

俞俊霞1戴小波2*

(1 无锡市惠山区人民医院病理科，江苏 无锡 214187；2 南京大学医学院附属鼓楼医院病理科，江苏 南京 210008)

目的探讨高危型HPV和其E6、E7 mRNA与宫颈病变（CIN1、CIN2、CIN3、ICC）的相关性。方法随机选择120例宫颈病变患者组织标本，检测高危型HPV E6、E7 mRN；高危型HPV采用荧光PCR定量检测。分析高危型HPV和其E6、E7 mRNA与宫颈病变（CIN1、CIN2、CIN3、ICC）的相关性。结果在宫颈病变CIN1、CIN2、CIN3、ICC中，高危型HPV阳性表达率分别为87.5%、91.2%、93.3和95.8%。宫颈CIN1、CIN2，宫颈CIN2、CIN3，宫颈CIN3、ICC比较差异不显著（P＞0.05）；高危型HPV的E6、E7 mRNA阳性表达率分别为15.6%、35.3%、70.0和95.8%。宫颈CIN1、CIN2，宫颈CIN2、CIN3，宫颈CIN3、ICC比较差异显著（P＜0.05）。结论高危型HPV与宫颈病变无相关性；高危型HPV E6、E7 mRNA与宫颈病变有相关性。

E6、E7 mRNA；宫颈病变；高危型；人乳头瘤病毒

宫颈癌是唯一病因明确的癌症，研究证实：99.7%的宫颈癌与高危型人乳头瘤病毒（HPV）感染有关。高危型HPV的持续性感染是宫颈组织发生癌前病变直至癌变的主要病因。宫颈癌的发生和发展有一个渐进的演变过程，从高危型HPV病毒感染，到组织学低度癌前病变（CIN1），到高度癌前病变（CIN2、3），再到浸润癌（ICC），时间跨度可以达到5～10年，所以有效、积极地早期筛查，能够显著降低宫颈癌的发病率。HPV E6、E7 mRNA致癌基因产物是致癌的关键因素，E6、E7 mRNA与组织病理诊断上宫颈病变严重程度的关系尚未证实[1]。为探讨高危型HPV和其E6、E7 mRNA与宫颈病变的相关性，找到精准的筛查宫颈“病变”方法，进行以下研究。

1 资料与方法

1.1 资料：随机选择我院2014年至2016年120例宫颈病变患者的手术切除标本，年龄26～72岁，平均45.6岁。病理组织学分级：在宫颈病变CIN1 32例CIN2 34例、CIN3 30例、ICC 24例。

1.2 方法

1.2.1 宫颈病变组织学检查：所有宫颈病变组织标本，10%福尔马林固定，石蜡包埋，4 μm连续组织切片，常规HE染色，进行组织学诊断。

1.2.2 高危型HPV荧光PCR定量检测：采用凯普生物科技公司 “高危型人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR）”检测患者宫颈脱落细胞HPV DNA载量，共检测等13种高危型。以ROCHE Lightcycler480扩增仪检测和判读结果。

1.2.3 HPV E6、E7 mRNA荧光PCR定性检测：采用Hologic 的Aptma HPV Assay试剂盒和转录介导等温核酸扩增（TMA）方法。检测平台采用Hologic公司提供的Panther全自动一体化平台。样本采用1 mL ThinPrep细胞保存液。宫颈病变诊断按照宫颈病变组织学诊断标准，结果按照试剂盒说明进行。

1.3 统计学分析：采用SPSS18.进行分析，计数资料采用“%”表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异显著。

2 结 果

宫颈病变组织中高危型HPV和其E6、E7 mRNA表达比较：在宫颈病变CIN1、CIN2、CIN3、ICC中，高危型HPV阳性表达率分别为87.5%、91.2%、93.3和95.8%。宫颈CIN1、CIN2，宫颈CIN2、CIN3，宫颈CIN3、ICC比较差异不显著（P＞0.05）；高危型HPV的E6、E7 mRNA阳性表达率分别为15.6%、35.3%、70.0和95.8%。宫颈CIN1、CIN2，宫颈CIN2、CIN3，宫颈CIN3、ICC比较差异显著（P＜0.05），见表1。

3 讨 论

自从20世纪90年代末出现的第一个高危型HPV病毒检测试剂盒—基于杂交捕获技术的Digene Hybrid Capture2，而2012年批准的Aptima HPV是唯一针对高危型HPV病毒E6、E7 mRNA的检测，属于新一代的检测[2]。高危型HPV E6、E7 mRNA基因是高危型HPV病毒的两个致癌基因，其通过转录mRNA实现癌蛋白的表达，从而改变细胞正常代谢，导致细胞发生病变直至癌变[3]。本研究显示：在宫颈病变CIN1、CIN2、CIN3、ICC中，高危型HPV阳性表达率分别为87.5%、91.2%、93.3和95.8%。宫颈CIN1、CIN2，宫颈CIN2、CIN3，宫颈CIN3、ICC比较差异不显著（P＞0.05）；高危型HPV的E6、E7 mRNA阳性表达率分别为15.6%、35.3%、70.0和95.8%。宫颈CIN1、CIN2，宫颈CIN2、CIN3，宫颈CIN3、ICC比较差异显著（P＜0.05）。高危型HPV与宫颈病变无相关性；高危型HPV E6、E7 mRNA与宫颈病变有相关性，E6、E7 mRNA水平与组织学病变程度之间存在正相关性。提示：在病毒感染的早期，病毒基因在细胞内为游离状态，此时E6、E7基因处于静默期，不表达或低表达mRNA，这个阶段细胞不会发生高级别病变，90%以上一过性HPV感染大多处于这个阶段；当HPV病毒发生持续感染后，病毒基因和人类基因发生整合，E6、E7基因被激活，利用宿主细胞大量转录mRNA、从而导致大量癌蛋白的表达，细胞发生高级别病变的风险大大增加。提示：高危型 HPV病毒DNA存在，不一定会导致细胞发生癌变；只有当病毒持续性大量转录E6、E7mRNA，从而大量表达E6、E7癌蛋白，才会导致细胞发生癌变。

表1 宫颈病变组织中高危型HPV和其E6、E7 mRNA表达比较

相比细胞学检测，第一代检测高危型HPVDNA的方法有效提高了癌前病变（CIN2，3）检测的灵敏度，极大改善了“漏诊”的问题，但同时造成了大量“过诊”：由于80%以上的妇女一生中都会感染HPV病毒，而90%以上的感染是一过性感染，在8～24个月内，被自身的免疫系统清除，只有不到10%会发展为持续性感染[4]。HPV DNA的检测方法更多地是检测感染，大量的阳性结果都是没有发生高级别病变的一过性感染，检测特异性较低。而这些“假阳性”结果，会给“患者”带来不必要的心理压力，并导致一系列家庭和谐和医患关系等社会问题。

包括中国在内的全球各个医学组织在制定宫颈癌筛查策略时的核心价值是要平衡“筛查益处”和“潜在风险”这两个方面，最理想的筛查策略就是要实现：①筛查益处最大化：发现那些有可能发展为癌症的宫颈癌前病变。②潜在风险最小化：避免对一过性HPV病毒感染导致的良性病变的检测和过度治疗（筛查导致的对“患者”的潜在伤害：心理压力，身体侵入性创伤，医疗负担）。本研究证实：检测高危型HPV病毒的E6、E7 mRNA相比检测高危型HPV DNA，可以更加精准的筛查宫颈病变，有效降低对一过性感染的检出率，对患者潜在风险最小化，可以作为宫颈癌筛查最理想的筛查策略。

[1] 杜彩英,李芳.人乳头瘤病毒DNA及E6/E7 mRNA检测在宫颈病变诊断中的比较研究[J].中国优生与遗传杂志,2015,23(4):38-40.

[2] 张生枝,邵华江,马建婷.人乳头瘤病毒 E6/E7mRNA 检测在宫颈病变筛查中的应用价值[J].中国实验诊断学,2014,18(4):581-583.

[3] 郑智,吕杰强.高危HPV E6 /E7 mRNA 对宫颈病变诊断价值的研究[J].医学研究杂志,2015,44(8):125-128.

[4] 张博,张颖,牛力春,等.液基细胞学联合HPVmRNA检测对宫颈癌的诊断价值[J].现代肿瘤医学,2016,24(1):119-122.

R737.33

B

1671-8194（2016）33-0151-02

*通讯作者：E-mail:8690398@qq.com