普洱茶水浸液对脱矿牙釉质再矿化的扫描电镜观察

杨华甫，田富明，梁迎东，陈 莹，蓝 海

（大理大学药学与化学学院，云南大理 671000）

普洱茶水浸液对脱矿牙釉质再矿化的扫描电镜观察

杨华甫，田富明，梁迎东，陈 莹，蓝 海*

（大理大学药学与化学学院，云南大理 671000）

目的：观察普洱茶生茶、熟茶不同浓度水浸提取液处理人工龋后的表面形态，为天然防龋药物的研究与开发提供理论依据。方法：利用化学试剂人工培养釉质脱矿模型，以水为提取液分别提取生茶、熟茶96、48、24、12、6 mg∕mL为实验溶液，20 mg∕mL氟化钠为阳性对照，去离子水为阴性对照，共分为12组，经体外pH循环后在扫描电镜下观察。结果：生茶组和熟茶组均随着浓度的增加牙釉质表面的沉积物越多越均匀致密，达96 mg∕mL时有大量规则的结晶生成，熟茶组比生茶组的沉积物更多更厚。氟化钠组大量的固体物质沉积，但结晶不紧密；去离子水组也有少许稀疏的沉积物，表面不平整，和脱矿后的差别不大。结论：普洱茶生茶和熟茶水提取液均对人工脱矿釉质有再矿化作用，但低浓度效果不明显。

普洱茶；脱矿；再矿化；扫描电镜

龋病已被公认为世界上一种最常见的慢性感染性疾病，它是发生于牙齿硬组织中的一种疾病，我国人群患龋齿率为40%，在各种疾病的发病率中位居前列，而且分布较为广泛。其发病机制为：口腔中的常驻变形链球菌和血链球菌通过发酵多种碳水化合物产生酸性物质，使菌斑的pH下降到5以下从而导致牙齿硬组织的酸蚀而脱矿，有机物分解至龋损形成〔1〕。

普洱茶是山茶科山茶属多年生、常绿、大叶种乔木。普洱茶含有茶多酚、茶生物碱、茶氨酸、矿质元素、维生素、氟化物等生理活性物质〔2〕，其中茶多酚是普洱茶最主要的活性成分，邹盛勤通过实验证实，茶多酚有抑菌抗炎、抗菌防龋的作用〔3〕。茶叶中氟的质量分数高达1×10-4～2×10-4，远高于其他植物。氟能增强牙釉质结构，提高其抗酸能力，达到预防龋齿的目的。本实验通过扫描电镜观察普洱生茶、熟茶处理牙釉质龋表面，比较各种溶液处理下釉质表面结构变化，探索普洱茶对釉质龋的再矿化作用。

1 材料

1.1仪器YMP-2B金相试样磨抛机（苏州欧卡精密光学仪器有限公司）；电子天平（波特乐-托利多仪器有限公司）；303-A-I型热点恒温培养箱（萧山永发电气有限公司）；pH-25数字酸度计（上海鹏顺科学仪器有限公司）；SY5200D超声波清洗器（宁波新芝生物科技股份有限公司）；S-3400N型扫描电镜（日立）。

1.2药品普洱生茶、熟茶均购于大理沃尔玛超市，由普洱市圣普茶叶有限公司生产的圣邦普洱茶礼盒（2011年5月28日生产）。

1.3试剂CaCl2、NaH2PO4、CH3COOH、KCl、NaOH、生理盐水、去离子水，以上试剂均为分析纯。

1.4脱矿液、再矿化液的配制脱矿液2.2 mmol∕L CaCl2，2.2 mmol∕L NaH2PO4，50 mmol∕L CH3COOH，用CH3COOH调至pH为4.5。再矿化液：1.5mmol∕LCaCl2，0.9 mmol∕L NaH2PO4，0.15 mol∕L KCl，用KOH调至pH为7.0〔4〕。

1.5实验溶液的配制称取普洱生茶19.20 g装入烧杯中加入250 mL去离子水，煮沸1 min，得到200 mL的茶水（因茶叶在沸水中展开要吸收一部分水以及水沸腾蒸发一部分，所以得到大约200 mL茶水），冷却至室温，然后倍比稀释得到96、48、24、12、6 mg∕mL的生茶溶液，同法制得熟茶各浓度的实验溶液，密封保存。

2 方法

2.1脱矿标本的制备市场购买新鲜牛切牙100颗从牙颈部截去牙根取出牙髓和软组织，用水清洗干净后用超声清洗5 min，在阴暗处晾干，用抛光机和碳化硅砂纸在流水条件下一次磨平，挑选出无龋齿、氟斑、裂痕的牙齿84颗，开窗3 mm×3 mm，其余部分用无色抗酸指甲油封住。放入100 mL的脱矿液中，置于恒温箱中37℃恒温10 d，换液5 d∕次。

2.2体外pH循环将标本随机分为12组并进行编号，每组7颗进行体外pH循环。过程为：先用100 mL的脱矿液处理4 h，然后分别用100 mL的实验溶液处理6 h，再浸入100 mL的再矿化中过夜，每换一种溶液前用大量的蒸馏水振荡冲洗5 min，连续循环10 d。用肉眼和扫描电镜观察脱矿表面〔5〕。

3 结果

3.1肉眼观察牙齿釉质表面平整，普洱茶溶液组开窗区域变为红棕色，并且随着浓度的增加而颜色加深，熟茶组比生茶组颜色深，而氟化钠和去离子水组表面颜色没有明显变化。

3.2扫描电镜观察生茶组和熟茶组均随着浓度的增加牙釉质表面的沉积物越多越均匀致密，达96 mg∕mL时有大量规则的结晶生成，但从图中可看出，熟茶组比生茶组的沉积物更多更厚。氟化钠组大量的固体物质沉积，但结晶不紧密；去离子水组也有少许稀疏的沉积物，表面不平整，和脱矿后差别不大。见图1。

图1 不同浓度处理液处理脱矿牙釉质表面扫描电镜观察结果（×5.00 K,SE）

4 讨论

牙齿每天都在进行脱矿和再矿化的过程并保持动态平衡。在此过程中，如果脱矿占据主导作用，将会导致牙釉质缺损。相反，如果再矿化占据主导作用，牙釉质处于一个被修复的过程〔6〕。如果一个药物只要对脱矿过程有抑制或对再矿化过程有促进作用，那么这个药物就对牙釉质矿化方面有积极作用，进而抑制龋病的发生发展〔7〕。

通过扫描电镜图像提示，普洱茶生茶、熟茶均对牙齿有再矿化作用，但熟茶再矿化作用明显优于生茶。有文献报道，熟茶的最高氟含量是生茶的32.7倍〔8〕，而氟能使牙釉质的主要成分羟基磷灰石生成稳定性强、晶格更小、硬度更高的氟磷灰石，使牙釉质表面存在的脱矿-再矿化这一可逆的生物化学反应向着再矿化方向进行〔9〕，利于防龋。另外，普洱熟茶在发酵的过程中形成了大量的茶褐素较未发酵普洱生茶提高了8.23倍〔10-11〕，而茶褐素可以和再矿化液中Ca2+结合〔12〕，形成难溶的配位复合物，因此也有利于再矿化。但饮茶浓度过高，对牙齿的着色影响程度大，影响美观。

〔1〕BANKOVA V S，DE CASTRO S L，MARCUCCI M C. Propolis：recent advances in chemistry and plant origin〔J〕. Apidologie，2000，31（1）：3-15.

〔2〕张新富，龚加顺，周红杰，等.云南普洱茶中多酚类物质与品质的关系研究〔J〕.食品科学，2008，29（4）：230-233.

〔3〕邹盛勤.茶叶的药用成分、药理作用及应用研究进展〔J〕.中国茶叶加工，2004（3）：35-37.

〔4〕杨晓莉，王芳芹，张俊，等.紫地榆不同溶剂提取物对防龋活性部位的研究〔J〕.中成药，2014，36（10）：2074-2078.

〔5〕陈菲菲，汪大照，张向宇，等.五倍子牙膏对釉质矿化作用的影响〔J〕.口腔医学研究，2011，27（4）：269-271.

〔6〕COULTHWAITE L，PRETTY I A，SMITH P W，et al. The microbiological origin of fluorescence observed in plaque on dentures during QLF analysis〔J〕.Caries Res，2006，40（2）：112-116.

〔7〕李新尚，冯锦虹，林静，等.维药没食子对牙釉质脱矿与再矿化作用的扫描电镜观察〔J〕.中华老年口腔医学杂志，2011，9（5）：261-264.

〔8〕王白娟，赵艳，戴富强，等.云南普洱茶氟含量研究〔J〕.广东农业科学，2010，37（5）：45-46.

〔9〕房思思，张丽萍，刘璐.氟的生物学作用：氟对骨的作用〔J〕.微量元素与健康研究，2011，28（4）：62-64.

〔10〕周斌星，孔令波，李发志.普洱茶（熟茶）发酵过程中不同堆层主要生化成分的变化〔J〕.江西农业学报，2010，22（7）：63-68.

〔11〕房贤坤，陈杰，姜吉，等.普洱生茶快速发酵法制备茶褐素〔J〕.大连工业大学学报，2012，31（2）：103-106.

〔12〕周花香.普洱茶茶褐素与褐煤黄腐酸对金属离子络合作用的对比研究〔D〕.昆明：昆明理工大学，2012.

Scanning Electron Microscopic Observation of the Remineralization Effect of Pu'er Tea Aqueous Extract on Demineralized Enamel

Yang Huafu,Tian Fuming,Liang Yingdong,Chen Ying,Lan Hai*
（College of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China）

Objective:To observe the surface of artificial caries that treated by different concentration of raw and ripe Pu'er tea aqueous extracts for providing a theoretical basis for the research and development of natural anti-caries drug.Methods: Demineralizated enamel cultured by chemical reagents was used as model.With water as the extract,raw and ripe tea with 96，48，24，12，6 mg∕mL were used as test solution.20 mg∕mL NaF as the positive control group and deionized water as the negative control group were divided into 12 groups and observed by scanning electron microscopy after pH extracorporeal circulation.Results:With the increasing concentration of raw and ripe tea,the sediments on enamel surface were more uniform and compact and a large number of regular crystallization generated when the concentration reached up to 96 mg∕mL,and ripe tea group had more and thicker sediments than raw tea;NaF group also had a lot of sediments,but was not compact;deionized water group only had a few sparse sediments with uneven surface,and had little difference after demineralization.Conclusion:Raw and ripe Pu'er tea aqueous extract had the remineralization effect on artificial demineralized enamel,but the low concentration was ineffective.

Pu'er tea;demineralization;remineralization;scanning electron microscope

R780.1

A

2096-2266（2016）12-0050-03

10.3969∕j.issn.2096-2266.2016.12.012

（责任编辑 李 杨）

大理大学大学生科研基金资助项目（KYSX20155096）

2016-02-29

2016-04-11

杨华甫，2012级药物制剂专业本科生. *通信作者：蓝海，教授.