免疫胶体金技术及其在兽医临床上的应用探讨

许 丽

（南充市高坪区长乐畜牧兽医站，四川南充 637100）



免疫胶体金技术及其在兽医临床上的应用探讨

许 丽

（南充市高坪区长乐畜牧兽医站，四川南充 637100）

［摘 要］免疫胶体金技术起源于20世纪80年代，是一种新式免疫标记技术，凭借成本低、反应快的优点在兽医临床上获得了广泛的应用。本文结合免疫胶体金技术的基本原理，探讨了在兽医临床上的应用。

［关键词］免疫胶体金兽医临床技术应用

免疫胶体金技术具有简便、灵敏、无污染的优点，是现代临床医学上常用的免疫标记技术。免疫胶体金技术在医学检验中的应用主要是借助免疫层析法（CGEIA）和斑点免疫金渗滤法（DIGFA），检测肝脏表面的抗原和绒毛膜促性腺激素等，该技术不断发展的过程中，临床应用也越来越广泛，具有较大的发展潜力。

1　免疫胶体金技术概述

1.1免疫胶体金技术的基本原理

在实际应用中，免疫胶体金技术以胶体金为重要的示踪标志物，在抗原抗体反应中加以应用。氯金酸（HAuCl4）在高效还原剂的作用下逐渐凝聚成金颗粒，形成一种疏水胶溶液，这种疏水胶溶液会带有负电荷。疏水胶溶液在静电的作用下成为一种更加稳定的胶体状态，称为胶体金。在弱碱环境下，胶体金会带有明显的负电荷，而动物体内的蛋白质分子带有明显的正电荷基团，两者牢固结合后不会影响蛋白质原有的生物特性。胶体金离子会对蛋白质分子形成较强的吸附作用，可以和免疫球蛋白、糖蛋白、抗生素和激素等形成非共价结合物，用于临床疫病等的检验，在实际试验中较高的价值。

免疫胶体金的标记方法主要是应用金颗粒的电子密度特性，在显微镜下观察，蛋白质的结合位置会呈现出明显的黑褐色颗粒，这些标记物大量聚集后，呈现出红色或粉红色的斑点，可以进行快速免疫检测［1］。

1.2免疫胶体金技术的制备方法

化学还原法被广泛应用于免疫胶体金制备中，在一定浓度的金溶液中加入还原剂，在还原剂的作用下，金离子变成金原子。通过对还原剂种类和剂量的控制，可以制备出不同大小颗粒的胶体金颗粒。实际应用中，主要的制备方法有白磷还原法、柠檬酸三钠还原法等。以柠檬酸三钠为例，在制备时控制氯金酸溶液的浓度为0.01%，之后将溶液加热至沸腾，快速搅拌，加入浓度为1%的柠檬酸三钠水溶液，加热后变为澄清透明的红色溶液，这种方法简便可靠，形成的胶体金颗粒大小较为均匀。

1.3免疫胶体金检测技术

常用的免疫胶体金检测技术有快速免疫层析法（CGEIA）和斑点免疫金渗滤法（DIGFA），两种检测方法的相同之处是，在抗原或者抗体中加入一定量的待检验标本，在毛细管或者渗滤的作用下，两者会牢固结合，之后再应用胶体金标记。在DIGFA应用中，微孔滤膜会吸附蛋白质，在渗滤和标记的过程中与抗原和抗体结合，免疫反应的速度将会逐渐加快，胶体金的颜色变化也更加明显。在CGEIA应用中，借助免疫层析条，免疫层析条中包含玻璃纤维膜、硝酸纤维膜等，将它们按照一定的顺序粘贴在支持物上，切成条状后可以用于检测。在检测过程中，将层析条插入待检液，观察颜色变化。其主要原理为：液体中的抗原与免疫层析条发生反应，形成一种复合物，复合物在毛细作用下达到硝酸纤维膜，形成新的检验区。该方法简便快捷，具有较高的敏感性，应用十分广泛。

2　免疫胶体金技术在兽医临床上的应用

2.1免疫胶体金技术用于家禽疫病诊断

利用免疫胶体金试验，对病死鸽棉试子样品进行检测，判断鸽群的发病原因，排除禽流感病原，进一步鉴定后发现鸽群患副黏病毒病。针对禽Ⅰ型副黏病毒感染的鹅群，应用免疫胶体金试验诊断，结果表现为禽流感阴性，结合实际临床症状和病变的情况，对病毒进行分离和鉴定，实现了对副黏病毒病的快速鉴别诊断。选择15nm的胶体金颗粒进行诊断，作为标记物后，植被出鸡减蛋综合征病毒检验试条，可以快速检验出鸡减蛋综合征病毒。采用胶体金标记纯化的羊抗鼠IgG，应用加强免疫胶体金检测技术判断鸡传染性支气管炎病毒，具有快速、敏感、简易的特点。应用免疫胶体金试膜检测传染性法氏囊病毒，可以快速识别出不同的毒株，为病毒检测开辟了新的路径［2］。

2.2免疫胶体金技术用于犬病毒诊断

应用柠檬酸三钠法制备出胶体金颗粒，对纯化的犬细小病毒的单克隆抗体进行可靠标记，将犬细小病毒多克隆抗体加在玻璃纤维膜上，制作成犬细小病毒的快速诊断试条，研制出犬细小病毒抗原的快速诊断方法，对犬粪便进行检测，与血凝试验的结果相比，试条检验结果表现为阳性，试条与犬瘟热病毒和肝传染性病毒并没有出现交叉反应，试条保存一段时间后，检测结果与之前的检测结果相比具有较高的重复性。另外，应用柠檬酸三钠还原的方法植被出免疫胶体金颗粒，对狂犬病毒的单克隆抗体进行可靠标记，制作成免疫层析试条，在实际研究中发现，诊断试条与狂犬病毒的抗原产生特异性反应，不会与肝传染性病毒产生交叉反应。与酶联免疫法相比，该诊断试条对可疑狂犬病毒检测后的重复率为90%，该诊断试条适用于狂犬病毒抗原的检测。

3　结束语

目前，兽医临床检测中以血清检测方法为主，但是该方法耗时较长、操作过程中复杂，适用性较低。免疫胶体金技术具有方便快捷、灵敏度高的优点，在近代医学上受到了广泛的关注，在动物疾病诊断过程中，免疫胶体金检测技术具有较高的应用价值。在不同标记方法不断发展的过程中，免疫胶体金检测技术的灵敏度也在不断提高，同时也会实现多元化检测，增强了在兽医临床方面的应用价值。

参考文献

［1］ 张凤珍.免疫胶体金技术的基本原理及其在兽医临床中应用的研究进展［J］.畜牧兽医科技信息，2012，（1）：7.

［2］ 蔺俐仲，徐春志，靳朝，等.免疫胶体金技术及其在兽医临床上的应用［J］.动物医学进展，2012，28（2）：10.

作者简介：许丽（1979-），女，四川省南充市高坪区人，大专学历，助理兽医师，现在四川省南充市高坪区长乐畜牧兽医站从事畜牧兽医工作。