新城疫病毒的最新研究进展

肖华平黄 忍魏 培杨瑞峰范建华

（1.山东畜牧兽医职业学院，山东潍坊 26104；2.中国农业科学院家禽研究所，江苏扬州 225125）



新城疫病毒的最新研究进展

肖华平1黄 忍1魏 培1杨瑞峰1范建华2

（1.山东畜牧兽医职业学院，山东潍坊 26104；2.中国农业科学院家禽研究所，江苏扬州 225125）

［摘 要］本文从新城疫病毒的理化特性、生物学特性，以及目前主要的诊断、鉴定方法等多方面进行了综述，为今后进一步开展该病毒的防控技术研究，提供了科学的参考和依据。

［关键词］新城疫病毒理化特性生物学特性

新城疫（Newcastledisease，ND）也称亚洲鸡瘟，是由血清1型禽副黏病毒（即新城疫病毒）引起禽类的一种以呼吸道、消化道黏膜出血为主要病变特征的高度接触性、急性败血性传染病。除家禽外，至少有236种鸟可以自然或实验室感染，是危害养禽业最重要的传染病之一，被世界动物卫生组织（OIE）列为必须报告的传染病，我国农业部在2008年颁布的动物疫病病种目录中，也将其列为一类动物疫病。

1　理化特性

新城疫病毒属于副黏病毒科、副黏病毒亚科、腮腺炎病毒属的成员，是Ⅰ型禽副粘病毒的代表株。

1.1形态结构

病毒颗粒在电镜下呈多形性，直径为100～250 nm，常见有横断面100 nm左右的细丝。囊膜上的纤突长约8 nm，纤突能刺激宿主产生中和抗体。核衣壳直径为17～18 nm，呈多盘绕的竹状结构，围绕中央孔中心轴呈螺旋对称排列，主要成分是病毒、RNA及与其相连的蛋白质，其中RNA位于核衣壳中央。

1.2抵抗力

一般来说新城疫病毒对理化因素的抵抗力较强，37℃可存活7～9d，鸡粪内病毒50℃可存活5个半月，鸡肉内的病毒15℃可存活98d，骨髓内病毒可存活134d。NDV对酸、碱的耐受力较强，在pH2和pH10条件下可存活数小时；在ND爆发后经28周仍能从蛋壳、羽毛和鸡舍及鸡舍内物品中分离到NDV。3%～5%来苏尔、酚和甲醛等化学试剂5min可将裸露的病毒粒子灭活，在37℃孵化器内，0.1%福尔马林熏蒸6h便可将其灭活。

1.3培养特性

新城疫病毒易在9～11日龄鸡胚绒毛尿囊膜上或尿囊腔中生长，特别是SPF鸡胚经常用来分离和复制病毒。因毒力不同，新城疫病毒致死鸡胚的时间差异较大，强毒株常在24～72 h内致死鸡胚，呈现全身性出血性病变及脑炎。

2　生物学活性

2.1血凝性

由于新城疫病毒其囊膜表面的HN糖蛋白与红细胞表面的受体结合，新城疫病毒可凝集所有两栖类、爬行类、禽类及小鼠、豚鼠的红细胞，但凝集牛、绵羊、猪、马及人O型血红细胞的能力则随毒株或血清型的不同而异。

2.2神经氨酸酶活性

神经氨酸酶是HN蛋白的一部分，该酶的明显作用是将病毒逐渐从红细胞上洗脱下来。有研究指出该酶还可作用于受体位点，使F蛋白充分接近细胞而发生病毒与细胞膜的融合。根据病毒凝集的鸡红细胞洗脱率可将新城疫病毒分离株分为快洗脱型和慢洗脱型。

2.3细胞融合与溶血活性

新城疫病毒和其他副粘病毒可通过同一机制引起红细胞溶解或细胞融合。在病毒复制时，病毒囊膜附着于细胞表面的受体位点，进而引起病毒囊膜与细胞膜的融合，进而导致两个或多个细胞的融合。僵硬红细胞膜常因与病毒之间的膜融合而导致溶解。同血凝活性一样，细胞融合与溶血活性也可被特异性抗血清所抑制。

2.4其他生物学活性

新城疫病毒不仅有诱导干扰素生成的作用，还具有抗肿瘤免疫、引起细胞凋亡的特性。因此这使NDV在肿瘤治疗及有关衰老机理的研究等方面备受重视。

3　新城疫的诊断与鉴定

3.1血清学诊断

引起家禽传染病的某些病毒，例如鸡新城疫病毒、A 型禽流感病毒，由于具有血凝素，可以使鸡或其他一些动物的红细胞发生凝集，称为红细胞凝集现象。如果在这些病毒悬液中先加入特异性的免疫血清，则病毒凝集红细胞的作用被抑制，称为红细胞凝集抑制现象。红细胞凝集试验常用于测定病毒的含量，例如常用于新城疫病毒初步诊断的HA和HI试验。

3.2单克隆抗体技术

Alexander 等应用针对表面糖蛋白的单克隆抗体来进行强毒株的鉴定和分型，以及区别抗原性的变异。曹殿军等用单克隆抗体对强、弱毒株的鉴定进行了研究。他们所建立的单克隆抗体1F10、6G2、2A7及1F1与中国标准强毒F48E9、6 株分离的黑龙江强毒株及Ⅰ系毒呈强阳性反应，而与LaSota 和V4 等弱毒株呈阴性反应，证明所建立的单抗是具有强毒特异性的单抗。于圣青、陈昌海和卢建红等建立了从临床样品中快速诊断NDV 强毒感染的单抗夹心ELISA。吴红专等在单抗夹心ELISA 和单抗PEG2ELISA 的基础上首次建立了快速诊断NDV 强毒感染的EL ISA 试剂盒。单克隆抗体试剂盒能快速确定鸡群中是否存在强毒感染而不进行病毒分离和生物学试验，且操作方便。因此，它在非典型新城疫的确诊、强毒感染检测及新城疫流行病学研究等方面具有广阔应用前景。

3.3RNA 指纹图谱法

Mcmillar 等首先用RNA 指纹图谱法对LaSota 株进行了分析。其方法是用T1Rnase 酶降解病毒RNA，然后在聚丙烯酰胺凝胶上进行二维电泳并放射自显影，得到RNA 各片段的分布图。随后他们又对许多株进行了分析，确定了其图谱和同源性。由此提出，RNA 指纹图谱法可作为NDV 检测和分析的一种手段。

3.4核酸探针技术

JareckiBlack 设计了2 个探针，该探针的长度为21 个碱基，与强毒株的F 蛋白裂解位点基因互补，可与11 个速发性毒株、5 个中发性毒株的RNA 杂交，而不与所有7 个弱毒株的RNA 杂交，说明该探针能将弱毒株从强毒和中毒中区分出来。Angela利用RTPCR 扩增出362 bp 的包括F 蛋白裂解位点序列的片段，制备成了相应的探针，并用PCR 产物同型特异性探针来区分德国流行的强、弱毒株。贺东生等根据F0基因的高度区特异位点，设计并合成了一段含48 bp 的寡核苷酸，经光生物素标记后制备探针，成功地杂交检测了NDV 强毒株和弱毒株。用核苷酸探针方法鉴别NDV 毒株，关键在于被标记的寡核苷酸的设计，要求寡核苷酸处于高变区并与弱毒株的同源性差别大。寡核苷酸探针能特异地鉴别强、弱毒株，在临床诊断和进出口检疫等方面都有较大的潜在用途。

3.5RT-PCR 技术

Kant 等用RT-PCR 对11个新城疫强毒株、4 个新城疫弱毒株进行扩增，该方法与传统方法检测结果基本吻合，且不需要鸡胚接种，节省了时间，24 h 内可出结果，为新城疫毒株的区别诊断提供了手段。阎玉河等根据新城疫毒株基因的结构特点及毒株F0蛋白裂解位点的序列差异设计了2 对引物，建立了快速诊断新城疫并能鉴别新城疫强、弱毒株的RT-PCR 技术；该法不仅可以对鸡胚尿囊液进行检测，还可以直接用病鸡组织匀浆进行检测，并具有较好的特异性和灵敏性。曹殿军等根据新城疫毒株的F 基因的核苷酸序列差异，分别设计合成了两组引物，建立了可以迅速鉴别NDV强、弱毒株的RT-PCR 方法，整个实验过程可在5 h 内完成；他们还进一步建立了直接从组织病料中检测并鉴别强、弱毒株的方法。RT-PCR技术由于灵敏度高，特异性好，能够区别强、弱毒株，在新城疫的诊断和流行病学普查方面颇具潜力。

参考文献

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