非洲猪瘟的研究进展及风险分析

刘建利，李　宏，曹琛福，孙　洁，杨俊兴，张彩虹，陈泽华，花群义，吕建强

（1.深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心，广东 深圳 518405；2.伊金霍洛旗兽医局，内蒙古 鄂尔多斯 017000）

非洲猪瘟的研究进展及风险分析

刘建利1，李宏2，曹琛福1，孙洁1，杨俊兴1，张彩虹1，陈泽华1，花群义1，吕建强1

（1.深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心，广东 深圳 518405；2.伊金霍洛旗兽医局，内蒙古 鄂尔多斯 017000）

1　传播历史和地理分布

非洲是非洲猪瘟（ASF）的发源地，1921年肯尼亚首次报道ASF疫情。此后，ASF从非洲的东部、南部穿过非洲中部向西部蔓延到非洲绝大部分国家［1］，并且向外传播至印度洋岛。1998年传到了马达加斯加。2007年传到了距马达加斯加800公里的毛里求斯［2］。

1957年ASF第一次传入欧洲葡萄牙后，ASF相继在西班牙、意大利、法国、马耳他、比利时、安道尔、荷兰、德国、俄罗斯、乌克兰（2012年）、白俄罗斯（2013年）［3］等国家流行暴发。2007年，处于欧亚接壤的高加索地区的亚美尼亚、格鲁吉亚暴发ASF，并向邻近的阿塞拜疆和俄罗斯联邦车臣边境地区、北奥赛梯、印古什共和国、奥伦堡等多地传播。2015年OIE又报道ASF暴发于立陶宛、波兰、拉脱维亚和爱沙尼亚。ASF已经蔓延到整个波罗的海地区。

1971年，ASF首次传入南美洲大陆的古巴，此后多米尼加共和国、海地、巴西相继出现ASF疫情。目前其他大陆还没有发生疫情的报道，但有继续向世界各国蔓延的趋势。

2　分子流行病学

ASFV是在细胞质内复制的复杂的双链DNA大病毒。ASFV基因组大小在170～192 kbp之间，编码多达165个基因。已被鉴定的结构蛋白有28种，在被感染的巨噬细胞中能产生超过150余种蛋白质，并且这些抗原有许多具有免疫原性［4］，其中至少50种能与感染猪或康复猪的血清反应，40种能与病毒粒子相结合。

通过研究基因型差异，分析毒株在全球的分布以及流行趋势。对B646L基因（该基因高度保守，它能编码一个主要的结构蛋白VP72）部分测序鉴定出ASFV至少有22个基因型，且每个基因型之间差异很小，其中有20个基因型仅存在于非洲东部和南部［5］。这些在不同地理区域发现和分离到的不同的毒株的异同与3种不同的ASFV传播途径的存在有关。通过分析B602L开放阅读框里面的中部可变区域CVR（如E183L编码的P54蛋白，CP204L编码的P30蛋白），区分出了基因型里一些亚群［6-8］。以此用来追踪疾病的暴发。

ASFV的有些基因型仅具有地方特异性，而有些毒株却能跨域传播［5］。ASFV-II型基因型很可能是从莫桑比克传到马达加斯加，此后这个病毒在马达加斯加一直保持其独特的基因型［9-10］。在毛里求斯分离到的病毒也被认为是属于另一种ASFV-II型基因型。而在非洲西部和中部分离到的所有的ASFV均属于ASFV-I型基因型［9］。在非洲东部和南部的丛林宿主体内也能分离到相同的ASFV-I型基因型毒株［5，11］。马拉维和赞比亚流行基因型VIII型，高加索和俄罗斯流行基因型II型。Gallardo C等［12］从4头临床上感染ASFV的野猪体内取样进行遗传特征分析，从立陶宛和波兰得到的ASFV病毒内包含p72 II型基因型，与从欧洲东部获得的ASFV序列具有100%的同源性。这个基因型自2007年传入至格鲁吉亚后一直流行于欧洲东部国家。

3　疫苗

2014年靳雯雯等［13］以巨细胞病毒极早期启动子和经水泡性口炎病毒G蛋白修饰过的pFastBacI杆状病毒为载体构建了ASFV VP73基因杆状病毒载体疫苗，该重组杆状病毒能够介导ASFV VP73蛋白在哺乳动物细胞中表达。2014年Lacasta A等［14］构建DNA疫苗（编码了3个融合在泛素中的ASFV抗原：p54、p30和胞外域血细胞凝集素），包含4 000多个质粒克隆的表达文库，每一文库都随机包含有一个病毒基因组的Sau3AI限制性片段。用强毒E75株攻毒用基因文库免疫的猪场能够获得60%的保护率。2014年Blome S等［15］分别用佐剂PolygenTM和Emulsigen（®）-D制备ASFV病毒灭活疫苗“亚美尼亚08”，并免疫6头断奶仔猪，用ASFV同源强毒株攻毒，结果6头猪都发生了严重的致死性的ASF，表明现代的佐剂不能提高制备的非洲猪瘟灭活疫苗的功效。

2013年Abrams C C等［16］从ASFV弱毒株OUR T88/3基因组中剔除两个基因DP71L和DP96R，形成重组基因后的病毒OUR T88/3ΔDP2。用病毒重组体OUR T88/3ΔDP2和亲代病毒OUR T88/3免疫两组猪，然后用强毒株OUR T88/1攻毒。接种病毒重组体的一组中有4头猪（66%）被保护，而接种亲代病毒的一组的保护力为100%。从OUR T88/ 3毒株中删除DP71L和DP96R基因能够降低了猪对强毒株的防范能力，表明从强毒株中删除这些基因能够减少ASFV对家猪的毒性。2015年O′，Donnell V等［17］构建重组病毒（ASFV-G-ΔMGF），删除了MGF360和MGF505基因的ASFV-G对猪的毒性减弱并且对其亲代病毒也能产生防御保护作用。2015年O′，Donnell V等［18］构建一种重组ASFV，删除了毒性相关基因9GL（B119L）的ASFV-G。当使用较低剂量时，该病毒对猪的毒性减弱并诱导猪对该病毒的同源病毒产生有效的保护力。

4　检测技术

2014年曹琛福等［19］纯化ASFV p54蛋白作包被抗原，建立检测ASFV p54抗体的间接ELISA方法，结果具有良好的特异性、敏感性。2014年靳雯雯等［20］以基因工程表达的ASFV VP73蛋白作为包被抗原，建立检测猪血清中抗ASFV VP73蛋白的抗体的间接ELISA方法。该方法对ASF标准阳性血清的检测灵敏度可以达到1∶2 560。2014年张鑫宇等［21］纯化出重组蛋白pK205R、pE183L、pA104R和pB602L，间接ELISA筛选最佳诊断抗原，发现pK205R、p54和pB602L血清学反应良好，可用于ASFV感染后早期或中后期血清学诊断。2014年张鑫宇等［22］建立ASFV p54抗体的胶体金检测方法。显示在ASFV感染早期，胶体金试纸优于OIE推荐间接ELISA检测方法。2015年张彩虹等［23］以ASFV VP73融合蛋白作为抗原免疫蛋鸡，制备抗非洲猪瘟病毒VP73蛋白的特异性IgY抗体。该抗体可与非洲猪瘟病毒VP73蛋白发生特异性反应，具有免疫反应原性。

2010年John McKillen等［24］建立了MGB PCR检测方法，该方法能够检测全血、脾脏和肉浆里面的ASFV，其灵敏性与OIE推荐的Taq Man PCR的灵敏性相似，比OIE推荐的常规PCR灵敏性高10倍。2010年James H E等［25］针对拓扑异构酶II基因建立的检测ASFV的环介导等温扩增方法，最低可以检测到330个拷贝DNA的病毒。2011年杨吉飞等［26］基于ASFV VP72基因设计引物，建立的PCR方法能够成功扩增非洲猪瘟病毒17个分离株的基因组，其敏感性与OIE参考的方法相当。2012年崔尚金等［27］采用纳米金颗粒作为热导介子，建立ASFV的高效纳米PCR检测方法，可以同时检测ASFV等7种病毒细菌。2013年苗富春［28］针对ASFV p72蛋白部分基因序列，采用简并碱基提高检测范围建立TaqMan模式的并联荧光定量PCR方法。检测灵敏度均可达到103ng/ μL。2015年Grau F R等［29］建立了能同时鉴别ASFV、CSFV和FMDV的多重实时荧光PCR方法，ASFV在接种后第3天就能被检测到，早于出现临床症状2～3 d。

5　风险分析

我国尚未见有非洲猪瘟病例的报道，但ASF一旦侵入，将对我国猪及其产品的生产带来毁灭性的打击。从我国周边ASF的流行状况、ASF的传播媒介和我国与世界交流三个方面分析，ASF传入我国的风险性在不断地加大。

首先处于欧亚接壤的高加索地区和俄罗斯联邦多地已暴发ASF，我国与俄罗斯有着漫长的边境线，存在携带ASFV的野猪跨境传播病毒到我国无疫病区的可能；其次我国横跨寒、温、亚热和热带地域，气候条件多样，具有ASF媒介蜱的生存条件。我国西南、华东和华中等地区为软蜱高发生区［30］，动物与蜱接触机会较多，具有ASF传播的媒介条件；再者我国与世界的贸易往来和人员交流日益频繁，很可能将污染的猪肉、猪肉制品或饲料产品通过机场、海港等渠道将ASFV带到国内。

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S852.65+1

A

0529-6005（2016）04-0077-03

2015-06-11

国家高技术研究发展计划（863计划）（2012AA101-301）

刘建利（1982-），男，兽医师，硕士生，从事动物检疫工作，E-mail：56546521@qq.com

吕建强，E-mail：312899963@qq.com