桉树组培厂季节性污染及防控

谢颖苑,廖飞扬,李天卓,杜翔鹰,吴婷婷,容卫冰

(广东省湛江市林业科学研究所,广东 湛江 524000)

桉树组培厂季节性污染及防控

谢颖苑,廖飞扬,李天卓,杜翔鹰,吴婷婷,容卫冰

(广东省湛江市林业科学研究所,广东 湛江 524000)

摘要:总结了多年组培苗生产经验,根据不同月份的温度、湿度及接种手操作等数据,提出了组培桉树污染随温度、湿度和操作人员的不同而产生变化,防控污染的措施应该随实际情况而调整。

关键词:桉树组培厂;污染率;温度;湿度;接种手;防控

1引言

桉树是世界四大速生栽培树种,具有速生丰产、适应性强、生产周期短和用途广泛等特点。桉树组培培养技术的日益成熟推动了我国南方地区桉树林业的快速发展。但是桉树组织培养中的污染是影响组培生产的最大障碍之一,直接影响生产成本和珍贵科研材料的保全。有研究表明:污染率每升高5%,试管苗繁殖速度递减40%,室内直接生产成本递增10%,污染率越高,成本递增越大,当污染率达30%时,成本将增至106.5%[1]。本研究以广东省湛江林业科学研究所桉树组织培厂培养车间的桉树组织污染物为对象,明确温度、湿度对污染影响及接种手不规范操作导致污染等规律,为桉树组织培养工作控制污染发生提供一定的理论和实践依据。

2材料与方法

(1)供试材料。对湛江市林业科学研究桉树组培厂培养室2009~2014年污染情况进行收集记录。

(2)桉树组培厂污染随室内温度和湿度的变化。每月定时、定点在培养室中放置温度计和湿度计收集记录数据。

(3)桉树组培厂污染季节性变化。每月定期统计组培厂生产情况,通过组培污染瓶苗数据反映出污染随月份而产生变化。

(4)桉树组培厂细菌污染受不同接种手操作产生的影响。通过接种手A和B使用同一台无菌工作台和同一套接种工具,定期定点对接种手细菌污染率数据统计,得出接种手的不规范操作导致污染增加,规范操作是保证质量的重要环节之一。

3结果与分析

3.1　桉树组培中温度和湿度对污染的影响。

从图1看到,组培培养车间内污染率是随室内温度升高而增高,最低值为1月份6.54%,7月份达到最高值21.49%,其中6、7、8月份为污染高峰期:1、2、3、4月份为低峰期。

图1　温度对污染率的影响

从图2看出,湿度对污染影响并不直接,3月份湿度达到最高值66.05%rh,但污染率仅为6.6%,2月份湿度66.0%rh,污染率也只是6.45%,两者低污染率。但在7月温度27.56℃、湿度53.01%rh,时污染率达到最高峰21.49%,6月温度27.3℃、湿度49.7%rh,污染率也达到比较高的17.94%。

图2　湿度对污染率的影响

从图1和图2比较看出,污染率随温度升高明显增大,但随湿度升高污染率变化并不很明显,两个最高污染数值都是在高温且较高的湿度时产生。说明要控制污染主要是降低温度,控制一定的湿度。

3.2　桉树组培厂污染季节性变化

组培瓶苗的污染率月份间相差也很大,一年中6、7、8月份真菌污染率较高,与当时的高温和相对较高的湿度有关。其它月份污染以细菌为主,而1、2、3、4月份组培污染相对较轻,总菌量较少(图3)。

图3　月份对污染率的影响

3.3　桉树组培厂细菌污染受不同接种手操作的影响

组织培养中的细菌污染主要是由于组培苗污染或者是人工操作污染引起,表现为培养材料周围出现白色晕圈、脓状物症状。

从表1可以看到,接种手A平均污染率为6.2%,最高时为9.77%;接种手B平均污染率为9.13%,最高时为16.96%,说明了A的污染率较稳定,B的稳定性较差。

表1　不同接种手对污染率的影响

从图4可以看到虽然有2个月份接种手A污染率比接种手B稍高,说明了接种手操作也有一定随机性,但总体来说接种手A污染率是较低,说明了细菌污染主要是通过接触污染和操作不当造成。接种过程中有瓶苗细菌鉴别环节,带细菌继代分化苗无论是再分化,或者是做生根苗,都会引起细菌再次交叉污染,所以在接种手操作培训中,如何鉴别细菌是较重要的一个环节,因此加强人员操作培训、规范操作流程是有效减少污染发生的重要途径。

图4　接种手A和接种手B污染率对比

4结语

在桉树组培厂生产中,6、7、8月份是是污染最高的季节,污染物多为真菌,因真菌传播、快繁殖快,主要是空气传播,难控制,用酒精和新洁尔消毒效果差,甲醛熏蒸可使组培环境空气中真菌减少87%~100%[2],因此要用高锰酸钾1月空气熏蒸灭菌一次,甲醛用量4~6mL/m3,高锰酸钾3~66mL/m3[3],并且此季节为需求淡季,应减少生产。在11、12、1、2月份产苗高峰期,培养室内尽量少用甲醛+高锰酸钾消毒,因为甲醛在灭菌过程中也会对瓶苗造成一定伤害,造成继代苗生长缓慢甚至少部份苗干枯,这期间污染源主要为细菌,要经常用70%酒精喷雾和2%新洁尔溶液擦洗培养室地面、门窗、培养架和培养瓶表面。其他月份消毒方式可以酌情处理。

防控细菌污染是另一重要环节,加强接种手操作培训,制定严格的操作流程,严格执行操作程序也是有效减少污染发生的有效途径。污染物发生存在应温度及湿度变化而变化,根据其发生规律,制定各月份不同的消毒流程和消毒时间,即可以减少消毒药剂对人员、组培环境的毒害[4],同时又能有效地预防和降低污染的发生。因此在植物组织培养过程中,注重温度和湿度的调节,减少接种操作环节污染,可以有效减少培养物的污染率。

参考文献:

[1] 田郎,谢发成,郑炎诚,等.香蕉试管苗生产的成本分析及其控制对策[J].热带作物科技,1998,23(2):4446.

[2] 汪一婷,王连平.工厂化生产组培苗的污染及其控制研究[J].安徽农业科学,2005,33(12):2357~2358.

[3] 杜雪玲,张振霞.植物组织培养中的污染成因及其预防[J].草业科学,2005,2(1):24~27.

[4] 方丽,王连平,茹水江,等.植物组培过程中污染微生物种类及其季节性的变化[J].浙江农业学报,2013,25(2):284~287.

中图分类号:S723.1

文献标识码:B

文章编号:1674-9944(2015)01-0034-02

作者简介:谢颖苑(1985—),女,广东湛江人,助理工程师,主要从事林木组培繁育方面的工作。

收稿日期:2014-12-12