维吾尔族静脉血栓栓塞症与凝血酶原G20210A和凝血因子V Leiden 突变的相关性研究

维吾尔族静脉血栓栓塞症与凝血酶原G20210A和凝血因子V Leiden 突变的相关性研究

胡雪梅， 艾力曼·马合木提， 夏玉宁， 古丽尼格尔·吾布力， 古丽米热·吐尼牙孜

(新疆医科大学第一附属医院心脏中心心力衰竭科, 乌鲁木齐830011)

摘要：目的探讨凝血酶原基因G20210A(FⅡG20210A)和凝血因子V基因Leiden 突变(FVL)单核苷酸多态性(SNP)及活化蛋白C抵抗(APCR)与维吾尔族(维族)静脉血栓栓塞症(VTE)的关系。方法选择2008年1月-2013年6月在新疆医科大学第一附属医院住院的维族VTE患者178例(病例组)及本院同期同民族住院体检者217例(健康对照组)。采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-PFLP)技术检测FⅡG20210A和FVL多态性，应用凝固法于SYSMEX CS-2000型全自动血液凝固仪检测APCR，并分析FⅡG20210A和FVL多态性及APCR与VTE的关联性。结果(1)所有受检对象均未检出FⅡG20210A基因突变，其变异频率为0。(2)健康对照组中只有GG基因型，而未见GA和AA基因型，A等位基因频率为0。病例组中FVL多态性GG型与GA/AA型分布频率差异有统计学意义(P=0.018)，且A等位基因分布频率差异亦有统计学意义(P=0.018)。(3)病例组APCR阳性率较健康对照组高(11.24%与4.60%)，其差异有统计学意义(P<0.05)。但VTE患者FVL多态性各基因型间APCR阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。(4)非条件logistic回归分析后，肥胖(OR=1.599，95%CI 1.383～1.849，P=0.000)、高脂血症(OR=1.087，95%CI 1.035～1.141，P=0.001)和APCR阳性(OR=1.922，95%CI 1.880～5.561，P=0.033)是VTE患者的独立危险因素。结论凝血酶原G20210A基因突变在新疆维族VTE患者及正常人群中罕见甚至缺如。APCR及FVL多态性是维吾尔族VTE患者的危险因素，但FVL多态性不是引起APCR的主要因素。

关键词：静脉血栓栓塞症； 凝血因子V； 凝血酶原基因G20210A； 维吾尔族； 活化蛋白C抵抗

中图分类号：R543.2文献标识码：A

doi:10.3969/j.issn.1009-5551.2015.01.009

[收稿日期：2014-02-24]

Association of polymorphism gene G20210A mutation or factor V Leiden mutation and

activated protein C resistance in Uyghur patients with Venous thromboembolism

HU Xuemei， Ailiman Mahemuti， XIA Yuning， Gulimire Tuniyazi， Gulinigeer Wubuli

(HeartCenter,FirstAffiliatedHospital,XinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China)

Abstract：ObjectiveTo investigate the association between the G20210A mutation of Prothrombin gene (FII G20210A), factor V Leiden mutation (FVL) and activated protein C resistance (APCR) in Uyghur patients with venous thromboembolism (VTE) in Xinjiang. Methods178 Uyghur ethnic diagnosed with VTE were admitted by First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University between January 2008 and June 2013, and 217 healthy Uyghur were studied as controls. Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) was applied to detect the polymorphism of FVL, FII G20210A and coagulation assay were adopted to determine APCR, and the association of FVL and APCR with VTE was analyzed. ResultsThe mutation of G20210A prothrombin gene were not detectable between any of the VTE patients and controls in Uyghur population. In VTE groups, FVL polymorphism GG and GA/AA gene types distribution frequency had significant differences (P=0.018), and A allele frequency difference was also significant (P=0.018). The mutation of FVL were not detectable in controls. The APCR positive rate in VTE groups were higher than that in controls (11.24% vs. 4.60%;). And there were significant differences in APCR positive rate between VTE patients and control groups (P<0.05). However, there were no significant differences in APCR positive rate of the FVL genotypes in VTE patients (P>0.05). Multifactor logistic regression analysis showed that, obesity (OR=3.189, 95%CI 1.255-8.102，P=0.015), hyperlipidemia (OR=6.430, 95%CI 1.370-30.190, P=0.018) and APCR (OR=1.922, 95%CI 1.880-5.561, P=0.033) were independent risk factors for Uygur ethnic with VTE. ConclusionThe mutation of G20210A prothrombin gene were not detectable between any of the VTE patients and controls in Uyghur ethnic. APCR and FVL mutation were independent risk factors for VTE patients, but FVL mutation may not be an independent factor for APCR.

Key words: pulmonary embolism; Factor V; Prothrombin gene; Uygur nationality; APCR

大量的国内外研究表明，凝血酶原基因G20210A(FⅡG20210A)多态性导致凝血酶原水平增高和凝血因子V Leiden,FVL突变引起的活化蛋白C 抵抗(Activated protein C resistance，APCR)是西方白种人静脉血栓形成(Venous Thromboembolism ，VTE)的遗传危险因素[1]。然而影响白种人群静脉血栓形成的主要遗传缺陷FⅡG20210A 和FVL突变与APCR在非洲、亚洲、美洲、大洋洲人群中均很少见[2-3]，目前为止尚无新疆地区维吾尔族(维族)VTE人群与FⅡG20210A 、FVL及APCR的相关研究报道。由于特殊的地理及人文环境，维族人群形成了长期进食羊肉、羊油、高盐和高糖饮食类的独特饮食习惯，近年来伴随着人们生活水平的逐渐提高，相应的运动量减少等，导致肥胖、糖尿病以及血栓栓塞性疾病的发生率较其他民族高。近期已有研究发现维族、哈萨克族等少数民族中高血压[4]、冠心病[5]、房颤[6]等动脉血栓性疾病的发病危险因素分布存在民族异质性。本课题组前期研究发现维族VTE患者的危险因素及亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)MTHFR C677T、C-反应蛋白(CRP)1059G/C等基因多态性分布与汉族人群不同[7-8]，提示应对维族患者在VTE发病机制方面进行进一步深入研究。本研究利用新疆地区独特的民族资源，采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术检测FⅡG20210A 、FVL多态性，用改良的凝固法于SYSMEX CS-2000型全自动血液凝固仪检测APCR，旨在探讨维族FⅡG20210A、FVL多态性与APCR等遗传性危险因素与VTE的相关性，从分子流行病学思路多角度探讨维族VTE患者基因缺陷，识别高危人群。

1资料与方法

1.1研究对象选择2008年1月-2013年6月在新疆医科大学第一附属医院心内科、呼吸科、血管外科、急诊科以及重症监护室等住院患者为观察对象，连续收治有完整资料的维族VTE患者178例(病例组)，男性88例，女性90例，平均年龄为(53.09±14.32)岁。病例组患者中深静脉血栓形成(Deep Vein Thrombosis，DVT)患者58例(32.58%)，肺血栓栓塞症(Pulmonary thromboembolism，PTE)患者84例(47.19%)，DVT合并PTE 患者36例(20.23%)。选择本院同期同民族住院体检者217例为健康对照组，男性109例，女性108例，平均年龄为(52.54±13.60)岁。VTE诊断标准参照欧洲心脏学会2008年指南[9]。本研究通过新疆医科大学第一附属医院医学伦理委员会审查，所有研究对象在纳入研究前均已签署知情同意书。

1.2研究方法收集一般临床资料如姓名、年龄、性别、有无肥胖、吸烟、饮酒史、家族史、有无异族通婚史、近期有无口服抗凝药物史等。清晨空腹12 h抽外周静脉血10 mL，5 mL用于生化检查，采用本院Olympuse公司(日本)2700型全自动生化分析仪检测空腹血糖、甘油三酯(Triglyceride，TG)、总胆固醇(Total Cholestrol，TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、血尿酸(UA)、肌酐(Cr)等。另5 mL静脉血EDTA-Na抗凝，-80℃冰箱保存备用。

1.3外周血白细胞提取DNA使用中量血液基因组DNA提取试剂盒(北京天根生化科技有限公司)提取基因组DNA。

1.4聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)(1)引物设计及合成(上海生物工程有限公司)：FVL F：5′-AGTTCAACCAGGGGAAACCT-3′，R：5′-TCTGAAAGGTTACTTCAAGGACAA-3′；FⅡF：5′- AGAGTAGGGGGCCACTCATAT TCT-3′，R：5′- ATAGCACTGGGAGCATTGAGG-3′。(2)PCR反应体系：在20 μL反应体系中含上游与下游引物各 0.5 μL、dNTP 10 μL、基因组DNA 2 μL、10×PCR缓冲液 7 μL及DNA聚合酶(博迈德)1 U。置于PCR仪(美国Bio-Rad公司)中。循环条件为： 95 ℃预变性3 min，95℃变性30 s，退火温度56℃，30 s，72℃延伸1 min，共30个循环，最后72℃延伸5 min。

1.5限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism，RFLP)在20 μL反应体系中含有PCR产物10 μL、ddH2O 7 μL、酶切Buffer 2 μL、内切酶1 μL(FVL反应体系加入MnlI，FⅡ反应体系加入Hind Ⅲ，酶均出自Fermentas 公司)，37 ℃ 水浴16 h，3%琼脂糖凝胶-核酸染料(北京博迈德科技发展有限公司)，110 V电泳45 min，紫外线下观察、摄影。将PCR产物及酶切产物与DNA片段长度标准物进行比较，以鉴定基因型。

1.6APCR检测用APCR测定试剂盒(凝固法)在SYSMEX CS-2000型全自动血液凝固仪(SYSMEX公司)检测，试剂盒由希森美康医用电子有限公司提供。其结果正常范围为0.69～1.56，超出范围的均视为APCR。

1.7统计学处理所有数据输入Excel表格进行处理，采用SPSS17.0统计软件包进行统计学处理。正态分布计量资料用均数±标准差(±s)描述，两组间比较采用t检验。计数资料采用χ2检验。研究对象及Hardy-Weinberg平衡的符合程度采用χ2检验，基因型分布及等位基因频率由于存在频数≤5，采用Fisher确切概率法。综合评价各因素与VTE的相关性采用多因素Logistic回归分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1病例组与对照组一般临床资料比较病例组与对照组年龄、性别的差异无统计学意义(P>0.05)，病例组体质指数、吸烟、高血压、糖尿病及血脂紊乱等水平均高于对照组，且差异有统计学意义(P<0.05)(表1)。

2.2FⅡG20210A多态性和FVL多态性的SNP分型病例组和对照组基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡，表明研究对象来自同一群体，具有较好的代表性。

2.2.1FVL多态性分析本研究的特异PCR产物是一个载有突变位点1691G→A(即Leiden突变)的220 bp的DNA片段。酶切后基因型有3种：GG型(116 bp、67 bp和37 bp野生型)、GA型(153 bp、116 bp、67 bp和37 bp杂合突变)、AA型(153 bp、67 bp纯合突变)。由于37 bp片段分子量较小,难以在琼脂糖凝胶中显示清楚，因此受检个体正常个体为116、67 bp 2条电泳条带(图1)。随机选择部分样本进行PCR产物克隆测序，测序结果和酶切分析结果一致(图2)。

表1　维族病例组和对照组一般资料比较/[例(%), ±s]

表1　维族病例组和对照组一般资料比较/[例(%), ±s]

项目病例组(n=178)对照组(n=217)P值性别(男/女)88(49.40)/90(50.60)109(50.23)/108(49.77)0.932年龄/岁53.09±14.3252.54±13.600.765体质指数/(kg/m2)28.39±4.3123.97±2.780.000吸烟93(52.21)161(74.25)0.001饮酒52(29.21)41(18.93)0.068高血压78(43.84)101(46.51)0.706糖尿病112(62.93)95(43.88)0.007肌酐/(μmol/L)78.41±31.2881.89±31.890.408尿酸/(μmol/L)285.63±113.76296.54±137.520.528甘油三酯/(mmol/L)2.43±1.721.81±1.860.010总胆固醇/(mmol/L)4.86±1.524.23±1.060.000高密度脂蛋白/(mmol/L)3.29±1.541.61±1.310.033低密度脂蛋白/(mmol/L)2.40±0.812.59±0.860.103肌酸激酶/(U/L)74.75±36.0881.86±38.430.452肌酸激酶同工酶/(U/L)24.53±6.3022.10±11.430.295乳酸脱氢酶/(U/L)200.03±133.71205.68±210.750.821

M：DNA Marker；1：PCR产物；2、3：GG型；4、5：GA型

图1FVL突变PCR产物各基因型酶切片段电泳结果

2.2.2FⅡG20210A多态性分析PCR产物为345 bp的DNA片段。所有PCR扩增有目的DNA片段的被检者，PCR扩增产物经Hind Ⅲ消化后电泳均只出现1条345 bp的DNA带(图3)，提示所有被检者均为FⅡG20210G型即无突变基因者。

2.3FⅡG20210A多态性和FVL多态性基因型分布和等位基因频率分析全部样本均未检出FⅡG20210A基因突变者。对照组中FVL多态性均为野生基因型，未发现纯合型突变和杂合基因型。病例组与对照组FVL各基因型频率分布差异有统计学意义(P=0.018)(表2)。

2.4FVL多态性与APCR的关系病例组与对照组APCR阳性率的差异有统计学意义(χ2=6.120，P<0.05)(表3)。病例组FVL多态性各基因型间APCR阳性率差异无统计学意义(P>0.05)(表4)。

图2　FVL突变PCR产物测序图(箭头所指为突变位置碱基)

M：DNA Marker；1～3：PCR产物：4～7：酶切产物

组别例数基因型频率GGGA+AAG等位基因频率GA对照组217217(100.00)0(0.00)*434(100.00)0(0.00)*病例组178173(97.19)5(2.81)351(98.60)5(1.40)

注：与病例组比较， *P<0.05。

注：与对照组比较， *P<0.05。

2.5VTE患者危险因素分析为排除混杂因素的影响，以有无VTE作为因变量，年龄、性别、是否患有高血压、糖尿病病史，是否吸烟、饮酒、高脂血症，肥胖、APCR及FVL多态性基因型为自变量引入模型进行二项逐步Logistic回归分析。结果提示，肥胖、高脂血症和APCR阳性是维族VTE患者的独立危险因素(表5)。

3讨论

VTE是由环境因素和遗传因素共同作用的一种多因素复杂性疾病。凝血酶原基因G20210A突变和凝血因子V G1691A(Leiden)突变是重要的血栓性疾病遗传危险因子，且在不同地域、不同种族间的分布存在显著差异。欧美白种人VTE患者G20210A的变异率显著高于亚裔人群和非裔人群。Martinelli等[10]报道了高加索人群G20210A多态性的发生率及其与VTE的相关性，发现G20210A突变使VTE发生的危险性增加。Kobayashi等[11]在日本PTE患者中没有发现凝血酶原基因G20210A多态性。Lijfering等[3]报道欧洲 788例有血栓形成倾向的患者亦无凝血酶原基因突变。然而郑红等[12]对中国676例正常中国人和500例高加索正常人群的FⅡG20210A的分布情况进行比较，结果提示FⅡ G20210A在中国人群中分布频率极低，在血栓形成过程中的作用可能很小。本研究结果与Kobayashi等[11]及郑红等[12]、王秉林等的[13]研究结果一致，凝血酶原基因20210G/A突变在新疆维族的VTE患者及正常人群中为稀有突变甚至缺如，其变异频率为0。由此推断凝血酶原基因20210G/A多态性分布存在种族、地域的差异，其分布频率在中国人中非常少见，更不是新疆地区维族VTE患者的独立危险因素。

表5　多因素非条件Logistic回归分析结果

FVL突变无可质疑地奠定了白种人群VTE的遗传基础[14]。Arsov等[15]报道了欧洲人群FVL突变纯合子基因型频率为21.10%。Biswas等[16]对日本25例PTE患者及110例正常对照者的研究结果显示，FVL突变在日本为罕见突变。郑红等[12]同时对中国676例正常中国人和500例高加索正常人群FVL的分布情况比较，结果发现均不存在凝血因子FVL突变。冯秀丽等[17]对新疆地区60例维族、57例哈萨克族、50例蒙古族和82例汉族健康人群进行FVL突变检测，其研究结果均未检出FVL突变类型。徐艳萍等[18]对新疆地区82例汉族健康人群进行FVL突变分析，亦未检出FVL突变。以上这些研究仅对新疆地区维族及汉族健康人群FVL突变进行了一定的研究，但均未涉及维族VTE患者。本研究显示维族正常对照组没有发现FVL突变以及A等位基因的分布。VTE患者FVL多态性GG型173例中，5例GA型，没有发现纯合型；G等位基因频率为98.60%，携带A等位基因频率为1.40%。维族VTE组与对照组比较FVL各基因型频率分布差异有统计学意义(P=0.018)。结果表明维族VTE人群存在FVL多态性，且纯合子罕见，多以杂合子存在。维族VTE患者FVL多态性GA型以及A等位基因的分布频率较健康人群发生率高，提示FVL多态性在维族VTE人群较健康人群更容易引起静脉血栓形成，进一步证实了FVL多态性的分布存在民族差异。

已有大量文献报道白种人群APCR及FVL突变和静脉血栓存在关联，90%～95%的APCR由FVL突变所致[19-20]。然而影响白种人群VTE的主要遗传缺陷FVL突变及APCR的检出率在非洲、亚洲、美洲等人群中发生率很低。Adeyemo等[21]研究发现APCR在尼日利亚人群的发生率仅为2%，未进行FVL突变检测。近年来我国学者(包括台湾地区)对汉族VTE患者的遗传危险因素进行了大量的研究，结果显示在汉族健康人群中，APCR检出率为3%～6%，未发现FVL突变[22-24]。邢颜超等[25]对新疆地区98例汉族、67例维族和54例哈萨克族健康个体进行研究分析，结果哈萨克族人群中检出2例FVL 1691G→A突变杂合子；而汉族和维族人群中均未发现该突变类型，但未检测APCR。以上研究仅对新疆地区维、汉族健康人群APCR和FVL突变进行了一定的研究，结果提示新疆不同民族APCR的发生存在种族异质性，然而到目前为止，尚无有关维族VTE患者相关报道。本研究结果显示，维族VTE患者APCR阳性率为11.24%，正常人群APCR的阳性率为4.60%，两组APCR阳性率比较差异有统计学意义，提示APCR阳性的发生可能是导致VTE的危险因子。此外，VTE患者中，FVL多态性各基因型间APCR阳性率差异无统计学意义。这与文献[19-20]报道的欧美国家APCR阳性患者中有90%系FVL突变所致的结果显然不同，而与文献[23-25]报道的结果相似，进一步表明在中国人的APCR中，FVL可能不是主要原因，提示可能存在其他类型的FV基因突变，具体机制有待进一步研究。

本研究采用非条件Logistic多元回归模型，在纠正混杂因素后，结果显示肥胖(OR=1.599)、高脂血症(OR=1.087)和 APCR阳性(OR=1.922)是维族VTE患者的独立危险因素,而基因多态性以及等位基因频率均未进入模型。此结果与本课题组前期对我院2004—2010年住院的516例PTE患者获得性危险因素构成及临床特点回顾性分析研究结果[26]一致，表明肥胖、高脂血症、APCR阳性与维族VTE的发生独立相关。具体机制可能与多年来，由于特殊的地理环境及文化背景，维族人群形成了以羊肉、羊油、高盐和高糖饮食为主的独特饮食习惯，加上近年来生活水平的不断提高、运动减少等，肥胖、糖尿病以及血栓栓塞性疾病的发生率较其他民族高相关。因此在VTE的防治方面对这类人群的生活习惯早期干预特别重要。

综上所述， 肥胖、高脂血症和APCR阳性是维族VTE人群的独立危险因素，可能参与VTE的发生、发展。维吾尔族VTE人群中携带FVL多态性GA型和A等位基因的频率明显高于正常人群，故可以认为FVL突变是VTE患者的独立危险因素。维族VTE和健康人群均存在APCR，但大约90%的具有APCR表型的个体并未携带 FVL突变，表明在新疆维族人群的APCR中，FVL可能不是主要原因，可能存在其他类型的FV基因突变，具体机制有待进一步研究。FⅡG20210A突变在新疆维族VTE患者及正常人群中罕见甚至缺如，且不是维族VTE的独立危险因素。对新疆地区不同民族VTE患者开展常规的遗传危险因素筛查，对预测和干预高危人群具有重大的临床意义。

参考文献:

[1]Sucker C, Kurschat C, Hetzel GR, et al. The G1691A mutation of the factor V gene (factor V Leiden) and the G20210A mutation of the prothrombin gene as risk factors in thrombotic microangiopathies[J]. Clin Appl Thromb Hemost,2009,15(3):360-363.

[2]Kalkanli S, Ayyildiz O, Tiftik N, et al. Factor V Leiden mutation in venous thrombosis in southeast Turkey[J]. Angiology, 2006, 57(2):193-196.

[3]Lijfering WM, Middeldorp S, Veeger NJ, et al. Risk of recurrent venous thrombosis in homozygous carriers and double heterozygous carriers of factor V Leiden and prothrombin G20210A[J]. Circulation, 2010,121(15):1706-1712.

[4]Liu F, Ma YT, Yang YN, et al. Current status of primary hypertension in Xinjiang:an epidemiological study of Han, Uygur and Hazakh populations[J]. Chin J Med, 2010, 90(46):3259-3263.

[5]Yang SL, He BX, Liu HL,et al. Apolipoprotein E gene polymorphisms and risk for coronary artery disease in Chinese Xinjiang Uygur and Han population[J]. Chin Med Sci J,2004,19(2):150-154.

[6]Yao J, Ma Y, Xie X, et al. Association of rs1805127 polymorphism of KCNE1 gene with atrial fibrillation in Uigur population of Xinjiang[J]. Chin J Med Genet, 2011, 28(4):436-440.

[7]张鹏，艾力曼·马合木提. IL-6基因启动子区多态性与静脉血栓栓塞症相关性研究[D].新疆医科大学, 2011.

[8]凯丽比努尔·阿布都热合曼，艾力曼·马合木提，夏玉宁，等. 维吾尔族亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性及血浆同型半胱氨酸水平与静脉血栓栓塞症的相关性[J].中华心血管病杂志,2012,40(12):1030-1036.

[9]Torbicki A, Perrier A, Konstantinides S, et al. Guidelines on the diagnosis and management of acute pulmonary embolism:the Task Force for the Diagnosis and Management of Acute pulmonary Embolism of the European Society of Cardiology(ESC) [J]. Eur Heart J, 2008, 29(18):2276-2315.

[10]Martinelli I, De Stefano V, Mannucci PM, et al. Inherited risk factors for venous thromboembolism[J]. Nat Rev Cardiol,2014, 11(3):140-156.

[11]Kobayashi T, Nakamura M, Sakuma M, et al. Incidence of pulmonary thromboembolism and new guidelines for PTE prophylaxis in Japan[J]. Clin Hemorheol Microcirc, 2006, 35(1-2):257-259.

[12]郑红, 连建华, 贺颖, 等. 中国人群凝血酶原FⅡG20210A和FVLeiden的分布[J]. 郑州大学学报:医学版, 2006, 41(1):102-104.

[13]王秉林, 戈小虎. FⅤ Leiden与FⅡ G20210A突变在不同种族人群易栓症中表达的研究现状[J]. 中国普外基础与临床杂志, 2012, 19(7):793-795.

[14]El-Galaly TC, Kristensen SR, Overvad K, et al. Interaction between blood type, smoking and factor V Leiden mutation and risk of venous thromboembolism:a Danish case-cohort study[J]. J Thromb Haemost, 2012, 10(10):2191-2193.

[15]Arsov T, Miladinova D, Spiroski M. Factor V Leiden is associated with higher risk of deep venous thrombosis of large blood vessels[J]. Croat Med J, 2006, 47(3):433-439.

[16]Biswas A, Bajaj J, Ranjan R, et al. Factor V Leiden:is it the chief contributor to activated protein C resistance in Asian-Indian patients with deep vein thrombosis[J]. Clin Chim Acta, 2008, 392(1-2):21-24.

[17]冯秀丽, 杨忠伟, 梁晓安, 等. 新疆4个民族健康人凝血因子V Leiden 突变的检测[J]. 解放军预防医学杂志, 2009, 27(3):204-205.

[18]徐艳萍, 冯秀丽, 吕继荣, 等. 凝血因子V基因 Leiden 突变检测方法在新疆汉族健康人群中应用[J]. 中国优生与遗传杂志, 2010 (9):27-28.

[19]Oger E, Lacut K, Le Gal G, et al. Is APC resistance a risk factor for venous thromboembolism in patients over 70 years[J]. Thromb Haemost, 2002, 88(4):587-591.

[20]Folsom AR, Cushman M, Tsai MY, et al. A prospective study of venous thromboembolism in relation to factor V Leiden and related factors[J]. Blood, 2002, 99( 8) :2720.

[21]Adeyemo TA, Adediran A, Akinbami AA, et al. Prevalence of activated protein C resistance (Factor V Leiden) in Lagos, Nigeria[J]. Niger J Clin Pract, 2012, 15(2):136.

[22]Yanqing H, Fangping C, Qinzhi X, et al. No association between thrombosis and fact or V gene polymorphisms in Chinese Han population[J]. Throm Haemost, 2003, 89:446-451.

[23]韩轩茂, 任景芳, 郝斌, 等. 静脉血栓栓塞症患者活化蛋白C抗性及凝血因子Ⅴ活性和基因多态性研究[J]. 中国实验血液学杂志,2007,15(3):612-616.

[24]许苗, 马万山. 抗磷脂蛋白抗体, 活化蛋白C抵抗与深静脉血栓形成的关系研究[J]. 医学检验与临床, 2011, 22(1):23-25.

[25]邢颜超, 马爱华, 程维兴, 等. 凝血因子 V169G→A基因突变的研究分析[J]. 中国微循环, 2003, 7(3):140-142.

[26]艾力曼·马合木提, 西艾木西卡买尔·艾合买提, 席勤妹, 等. 516例维、汉两民族住院肺血栓栓塞症患者危险因素构成特点分析[J]. 中国循证医学杂志, 2012, 23(6):520-524.

(本文编辑杨晨晨)