用T-SPOT.TB试验诊断活动性肺结核的效果探析

郑 宏 袁 瑛 王肇华 明湘虹

（江苏省南通市第六人民医院 江苏 南通 226011）

我国是活动性肺结核的高发国家之一。相关的调查数据显示，近年来，活动性肺结核在我国的发病率呈逐年上升的趋势，严重威胁患者的身体健康及生命安全。过去，传统的结核诊断技术如痰结核菌检查等均存在一定的局限性。近年来，随着临床诊断技术的不断发展，T-SPOT.TB试验在诊断活动性肺结核方面的应用越来越广泛。为了进一步探讨用T-SPOT.TB试验诊断活动性肺结核的临床效果，我们对近年来我院收治的300例疑似活动性肺结核患者的临床资料进行回顾性研究。现介绍如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本次研究的对象为2011年1月～2016年6月期间我院收治的300例疑似活动性肺结核患者。在这些患者中，排除临床资料不完整的患者，排除在进行T-SPOT.TB试验前3周内接受过抗结核治疗的患者，排除非自愿参与此项研究的患者。其中，男女患者分别有193例和107例，其年龄区间为22～81岁，平均年龄为（48.69±11.21）岁。

1.2 研究方法 我们对这300例患者均进行T-SPOT.TB试验与综合诊断（X线片检查、痰结核菌检查等），然后将进行T-SPOT.TB试验与综合诊断的结果进行比较，评估用T-SPOT.TB试验诊断活动性肺结核的临床效果。同时，我们采用单因素分析法与多因素logistic回归分析法对影响T-SPOT.TB试验结果的因素进行分析和总结。对这300例患者进行T-SPOT.TB试验的具体方法是：①抽取患者清晨空腹的外周静脉血10ml，在血液标本中加入10ml的肝素进行抗凝处理。在血液标本中加入FICOLL淋巴细胞分离液后进行离心处理，分离出外周血单个核细胞（PBMCS），然后用细胞培养基对PBMCS进行细胞培养[1]。②在培养板上的每组条孔中加入50μl的细胞培养基，将其当作空白对照。在培养板上的每组条孔中加入50μl的植物血凝素，将其当作阳性对照。在培养板上的每组条孔中加入50μl的结核分枝杆菌特异性抗原ESAT-6与50μl的CFP-10，将其当作刺激原。最后，在培养板上的每组条孔中加入100μl的PBMCS悬液[2]。③完成上述操作后，将培养板放置于37℃的恒温孵育箱中进行培养，等待16～20h后，将培养板取出，并用PBS缓冲液进行4次的冲洗，冲洗结束后，加入第二抗体（二抗），将二抗用碱性磷酸酶进行标记，将加入二抗的培养板在2℃～8℃的条件下进行孵育，孵育的时间为1h。④用PBS缓冲液对培养板进行冲洗，在培养板上滴入50μl的显色液，在室温条件下静置7min后再用PBS缓冲液对培养板进行冲洗，待培养板的反应终止后，将其放在室温条件下静置2h，最后记录空白对照孔上的斑点数。

1.3 判定T-SPOT.TB试验结果呈阳性的标准 符合下述两项中的一项条件：①培养板空白对照孔上的斑点数为6～10个，同时，抗原1孔、抗原2孔的斑点数≥空白对照孔的斑点数×2。②培养板空白对照孔上的斑点数为0～5个，同时抗原1孔、抗原2孔的斑点数≥空白对照孔的斑点数+6[3]。即可判定进行T-SPOT.TB试验的结果呈阳性。

1.4 统计学方法 用SPSS17.0软件对本研究中的所有数据进行处理，计量资料采用均数±标准差（±s）表示，用t检验，计数资料采用（%）表示，用χ²检验。同时采取单因素分析法和多因素logistic回归分析法对影响T-SPOT.TB试验结果的因素进行分析，当自变量的单因素分析结果显示P＜0.2时，对该自变量进行多因素分析，进行多因素分析的结果显示P＜0.05时，表示差异有统计学意义[4]。

2 结果

2.1 对这300例患者进行综合诊断的结果 对这300例患者进行综合诊断的结果显示，有114例患者患有活动性肺结核，其余的186例患者均未患有活动性肺结核。

2.2 对这300例患者进行T-SPOT.TB试验的结果在114例被确诊患有活动性肺结核的患者中，进行T-SPOT.TB试验的结果呈阳性的患者有95例，呈阴性的患者有19例，进行T-SPOT.TB试验的真阳性率为85.71%。在186例未患有活动性肺结核的患者中，进行T-SPOT.TB试验的结果呈阴性的患者有149例，呈阳性的患者有37例，进行T-SPOT.TB试验的的真阴性率为89.78%。这表示进行T-SPOT.TB试验的敏感度为87.02%，特异度为89.78%。

2.3 影响T-SPOT.TB试验结果的因素 对T-SPOT.TB试验的结果进行单因素分析和logistic多因素回归分析显示，年龄、性别及基础疾病等因素均与T-SPOT.TB试验的结果无关。详见表1、表2。

表1 导致进行T-SPOT.TB试验的结果呈假阴性的影响因素[n（%）]

表2 导致进行T-SPOT.TB试验的结果呈假阳性的影响因素[n（%）]

3 讨论

相关的调查数据显示，我国目前约有500万活动性肺结核患者。临床研究表明，活动性肺结核患者越早得到确诊，其治愈率就越高。过去，临床上常采用痰液涂片检查和TST检查等方法诊断活动性肺结核，但诊断的敏感度和特异度较低。近年来，随着临床诊断技术的不断发展，T-SPOT.TB试验在诊断活动性肺结核中得到了广泛的应用，且取得了良好的效果。

本次研究的结果证实，用T-SPOT.TB试验诊断活动性肺结核的临床效果显著，具有较高的敏感度和特异度，且受患者的性别、年龄和基础疾病等因素的影响较小。

[1] 卢青纯,唐小燕,熊恬园,黄骥翀,杨旻,童翔,范红. T-SPOT.TB试验在活动性结核诊断中的价值及其影响因素分析[J]. 中国循证医学杂志,2014,05:522-526.

[2] 蔺咏梅,江自成,皇甫彤,候轩,张久聪,辜依海. T细胞斑点试验AB抗原检测结果对结核感染患者诊断意义探讨[J]. 临床和实验医学杂志,2014,20:1674-1678.

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[4] 阮琰,严红梅,林伟,唐伟伟,熊丽君,林剑东,陈晓红. 结核感染T细胞斑点试验、PPD、CRP在儿童结核诊治的临床意义[J].中外医疗,2016,20:1-5.