多耐药基因在乳腺癌组织中的表达及价值

多耐药基因在乳腺癌组织中的表达及价值*

林慧梅1，安玉芳2，张凡3

(1.河北省崇礼县妇幼保健院，河北崇礼076350

2.河北省万全县医院，河北万全076250

3.河北北方学院附属第一医院病理科，河北张家口075000)

摘要：目的：观察多药耐药基因(MDR1)及其编码的糖蛋白(P-gp)在乳腺癌组织中的表达及临床价值。方法：选取病历资料完整的乳腺癌根治术乳腺组织标本84份，使用S-P法免疫组化法染色检测P-gp、谷光甘肽S转移酶(GST-π)及热休克蛋白(HSP70)、p53的表达情况，采用Kendall's taub相关性分析P-gp、p53、GST-π、及HSP70、p53之间协同表达关系。结果：P-gp表达阳性率为50%(42/84)，HSP70表达阳性率为61.9%(52/84)，p53表达阳性率为52.4%(44/84)，GST-π表达阳性率为40.5%(34/84)；相关性分析显示，GST-π与P-gp无协同表达(r=0.146，P>0.05)，HSP70与p53有协同表达(r=0.626，P<0.05)，p53与P-gp有协同表达(r=0.763，P<0.05)；P-gp表达对对乳腺癌10年生存率有明显影响。COX模型乳腺癌预后多因素分析表明，年龄因素、GST-π表达均不具有独立的预后意义；临床分期、组织学分级、P-gp表达、p53表达、HSP70表达均具有独立的预后意义。结论：同时检测MDR1、HSP7、p53和GST-π的表达，可为乳腺癌临床耐药性的判断提供更为全面的信息。

关键词：乳腺癌；耐药；MDR1；HSP70；GST-π；p53

文章编号：1006-6233(2015)10-1588-03

基金项目：*国家十一五科技支撑项目，(编号：2008BA157B00)

文献标识码：B

The Expression and Clinical Significance of Multidrug

Resistance Gene in Breast Cancer Tissues

LINHuimei,etal

(The Maternal and Child Health Hospital of Chongli County, Hebei Chongli 076350, China)

Abstract:Objective: To observe the expression of multidrug resistance gene (MDR1) and its encoding glycoprotein (P-gp) and clinical value in breast cancer. Methods:Selected the complete medical records of breast cancer radical mastectomy of breast tissue specimens of 84 copies, using S-P method of immunohistochemical staining to detect P-gp, GST-π and heat shock protein(HSP70), the expression of p53, using the Kendall's Taub correlation analysis between P-gp, p53,GST-π, and HSP70, a PI the relationship between the expression of p53. Result: The positive rate of P-gp expression was 50%(42/84), the positive rate of HSP70 expression was 61.9%(52/84), the positive rate of p53 expression was 52.4% (44/84), GST-class expression positive rate was 40.5%(34/84); correlation analysis showed that GST-π and P-gp, PI no synergistic expression (r=0.146, P>0.05), HSP70 and p53 have synergistic expression (r=0.626, P<0.05), p53 and P-gp have synergistic expression(r=0.763, P<0.05); the expression of P-gp of breast cancer 10 years survival rate has obvious effect. Multivariate prognostic models of human breast cancer COX analysis showed that the factors of age, GST-π, PI expression do not have independent prognostic significance; clinical staging, tissue have independent prognostic significance grading, P-gp expression, p53 expression, HSP70 expression. Conclusion: At the same time, the expression of MDR1, HSP7, p53 and GST-π, for clinical drug resistance of breast cancer judgment to provide more comprehensive information.

Key words:Breast cancer;Drug resistance;MDR1；HSP70；GST-π；p53

乳腺癌为临床常见恶性肿瘤，早期发病即可出现全身转移，严重威胁女性生命健康[1]。目前，临床的治疗方案大多是围绕手术而进行放、化疗治疗[2]。化疗在乳腺癌治疗中占重要地位，而肿瘤细胞对治疗药物产生耐药性，是影响治疗效果及患者生存率的重要原因[3]。有研究发现，MDR1及P-gp与乳腺癌耐药产生关系密切[4]。本研究为探讨MDR1及P-gp在乳腺癌组织中的表达及耐药机制，现将结果报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料:选取北方学院附属第一医院收治病历资料完整的乳腺癌根治术后乳腺组织标本84份，入选标本均来源自女性患者，并完成6个周期CAF方案化疗，年龄28～75岁，平均年龄47.8±2.3岁。所选标本均经病理学检查明确诊断，其中浸润性小叶癌6例，浸润性导管癌66例，粘液癌8例，腺癌4例；临床分期Ⅰ期10例，Ⅱ期56例，Ⅲ期14例，Ⅳ期4例；组织学分级Ⅰ级10例，Ⅱ级48例，Ⅲ级26例。

1.2检测方法:采用免疫组化S-P法进行P-gp、GST-π、HSP70、p53检测，采用Kendall's taub相关性分析P-gp、p53、GST-π、HSP70、p53之间协同表达关系，抗GST-π单克隆抗体、抗HSP70多克隆抗体、抗P-gp单克隆抗体、抗p53单克隆抗体均购自美国ZYMED公司。入选标本常规固定、包埋、切片，分别行HE及S-P免疫组织化学染色，并选取已知阳性切片标本作为阳性参照。

1.3结果判定:P-gp阳性表达主要分布于胞浆与胞膜，呈棕黄色颗粒；GST-π阳性表达分布于胞浆，呈棕黄色颗粒，可伴见少数细胞核染色；p53阳性呈棕黄色颗粒，主要分布于细胞核；HSP70阳性细胞呈棕黄色颗粒，主要分布于细胞核或细胞浆。判断标准：阴性：未检出阳性细胞；阳性：阳性细胞计数>10%；+：阳性细胞计数>25%；++：阳性细胞计数为25～50%；+++：阳性细胞计数>50%。

1.4统计学方法:所得数据录入统计学软件SPSS10.0处理，GST-π、P-gp、HSP70、p53之间协同表达关系采用Kendall's taub进行相关性分析，耐药相关标志表达对总生存期影响采用多变量COX回归分析，P<0.05为有统计学意义。

2结果

2.1基因表达情况及P-gp不同表达患者10年生存率比较:本组标本中P-gp表达阳性率为50.0%(21/42)；HSP70表达阳性率为61.9%(26/42)；p53表达阳性率为52.4%(22/42)，GST-π表达阳性率为40.5%(17/42)。COX模型生存分析显示P-gp具有预后意义，P-gp表达阳性患者生存期低于P-gp表达阴性患者(P<0.01)；相关性分析发现P-gp表达与年龄无关(r=0.061，P>0.05)，与组织分级无关(r=0.184，P>0.05)，与临床分期无关(r=0.258，P>0.05)，与ER有关(r=0.447，P<0.05)，与PR无关(r=0.061，P>0.05)；HSP70表达与年龄无关(r=0.122，P>0.05)，与组织分级无关(r=0.221，P>0.05)，与临床分期有关(r=0.3，P<0.05)；p53表达与年龄无关(r=0.087，P>0.05)，组织分级无关(r=0.229，P>0.05)，与临床分期无关(r=0.171，P>0.05)；GST-π表达与年龄无关(r=0.122，P>0.05)，与组织分级无关(r=0.020，P>0.05)，表达与临床分期无关(r=0.169，P>0.05)。P-gp阳性患者10年生存率为38.1%，P-gp阴性患者为85.7%，P-gp阳性患者10年生存率显著高于P-gp阴性患者(P<0.01)，结果见表1。

表1　P-gp不同表达患者10年生存率比较(n)

注：*P<0.01

2.2相关性分析:本组标本P-gp、p53、GST-π、HSP70免疫组织化学表达结果用Kendall's taub法相关性分析显示，GST-π与P-gp无协同表达(r=0.146，P>0.05)；HSP70与p53有协同表达(r=0.626，P<0.05)，p53与P-gp有协同表达(r=0.763， P<0.05)。

2.3多变量COX回归分析:年龄、GST-π、PR均不具有独立的预后意义(P>0.05)。临床分期、组织分级、P-gp(P<0.01)、p53阳性表达、HSP70阳性表达均具有独立的预后意义(P<0.05)。

3讨论

有研究表明[5]，细胞的耐受程度与药物在细胞内蓄积水平呈负相关。细胞在获得MDR后短时间即可将治疗药物泵出胞外；而药敏细胞外输药物的能力相对较弱，故能提高药物在胞内停留时间[6]。MDR表型涉及的亲脂类的化疗药物，主要来自抗肿瘤抗生素及天然的植物碱类抗肿瘤药物，如5-氟脲嘧啶(5-Fu)、柔红霉素、丝裂霉素、长春新碱、阿霉素等[7]。然而，以往研究结果多来源自恶性细胞系，而非肿瘤标本，与临床实际情况有一定差距，难以为临床提供指导性作用。

本研究中患者选用CAF为化疗方案，该方案所使用的药物为阿霉素即为P-gp耐药药物。研究结果显示，P-gp阳性患者10年生存率显著低于P-gp阴性患者(P<0.05)，提示P-gp耐药是影响化疗效果及患者生存率的主要原因，因此，P-gp表达又可作为乳腺癌的预后指标。另有研究认为[8]，乳腺癌耐药为多基因、多步骤耐药，原发耐药的机理是异常复杂，单机制和多机制可以同时存在，涉及p53、HSP70及GST-π等。有学者认为，在乳腺癌耐药产生的早期阶段GST-π所起作用更为重要，GST-π非特异性的结合作用可协助药物通过P-gp形成的药物排流泵。本研究结果显示，GST-π与P-gp无协同表达，提示GST-π和P-gp是否参与了肿瘤的形成还值得进一步研究。HSP70在肿瘤发生发展中充当分子伴侣，可防止异常蛋白积聚，维持细胞的自稳态，使细胞维持增生状态免于凋亡，参与了肿瘤细胞的增殖、分化及转移，在肿瘤的发生发展过程中起着重要的作用。本组实验结果显示，HSP70与p53有协同表达，与文献报道相符。本研究结果显示，p53与P-gp有协同表达。其原因与p53基因可明显激活MDR1基因的促进因子有关。预后因素分析中发现，临床分期、组织分级，P-gp、p53、HSP70阳性表达均具有独立的预后意义，提示肿瘤大小、病理分级、临床分期、淋巴结转移等传统预后指标应与分子指标相结合，可提供更多的预后信息。

参考文献:

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