不同频率电针对抑郁模型大鼠血清BDNF及CRH含量的影响

王敏丹，燕 平

（山西中医学院，山西太原030024）

不同频率电针对抑郁模型大鼠血清BDNF及CRH含量的影响

王敏丹，燕 平

（山西中医学院，山西太原030024）

目的：研究“解郁方”的不同频率对抑郁模型大鼠血清脑源性神经营养因子（BDNF）和促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）含量的影响，探讨抑郁症的机制。方法：清洁级SD雄性大鼠40只随机分为空白对照组（A组）、模型对照组（B组）、针刺干预组（设3组，分别编号C组、D组、E组）5组，每组8只。除A组外，其他各组动物接受21 d各种不同的应激，造模的同时分别对针刺干预组进行不同频率电针干预。21 d后测定5组血清中BDNF和CRH含量。结果：与A组比较，B、C、D、E组BDNF含量均降低，CRH含量均升高，表明造模成功；与B组比较，C、D、E组BDNF含量升高，CRH含量降低；D、E组与C组BDNF及CRH含量比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：针刺频率2 Hz效果最好，其作用机制可能与针刺调节下丘脑-垂体-肾上腺（HPA轴）的功能有关。

抑郁症；解郁方；针刺；脑源性神经营养因子；促肾上腺皮质激素释放激素

抑郁症是一种以持久的情绪低落，活动能力减退，思维与认知功能迟缓为主要临床特征的一类心理障碍，其主要症状包括焦躁情绪、快感缺失、睡眠障碍、负罪感和反复自杀念头等，是一种严重影响人类身心健康的精神性疾病。普通人群中抑郁症的年发病率约为200/10万，且发病率呈逐年上升趋势，目前中国的抑郁症患者已超过2 600万［1-2］。由于抑郁症表现多样，病因、发病机制错综复杂，药物治疗是目前主要的治疗方法，但药物治疗的副作用较大，疗效不佳以及治疗费用昂贵等限制了其临床应用。中医药，尤其是针灸在治疗该病种上优势突出，特色明显。本文在前期实验“解郁方”（百会、神门、太冲）的基础上，研究“解郁方”的不同频率电针对抑郁模型大鼠血清BDNF及CRH含量的影响，进一步探讨抑郁症的机制，为临床研究和治疗抑郁症提供依据。

1 材料和方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 清洁级SD大鼠［合格证号SCXK-（军）2007-004］40只，雄性，体重（220～240）g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司。

1.1.2 试剂与仪器 促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）ELISA试剂盒（批号10-42-513）、脑源性神经营养因子（BDNF）ELISA试剂盒（批号10-42-514），均购于美国Becton，Dickinson and Company公司。LH-202型HANS电针治疗仪、毫针、离心机、酶标仪、恒温培养箱。

1.2 实验方法

1.2.1 分组与造模 40只SD大鼠随机分为空白组（A组）、模型组（B组）、针刺干预组（设3组，分别编号C组、D组、E组）。除A组外，其他各组动物接受21 d各种不同的应激，包括束缚（3 h）、冰水游泳（4℃，5 min）、热应激（45℃，5 min）、夹尾（3 min）、禁水（24 h）、禁食（24 h）和昼夜颠倒等，用随机软件每天安排一种应激，平均每种刺激使用3次［3］。同时配合单笼饲养。

1.2.2 针刺方法 A组不予任何干预措施，B组虽经抓取、固定，但不做针刺，其他处理同针刺组。针刺干预组于造模第1天开始取百会、神门、太冲穴（参照《实验针灸学》［4］大鼠穴位定位方法取穴），各组穴位常规消毒，选用华佗牌0.25 mm×25 mm针灸针进行针刺，百会向前平刺2 mm，神门直刺1 mm，太冲斜刺1 mm。连接到LH-202型HANS电刺激仪。刺激强度以大鼠微颤为准，每次电针20 min，每日上午9时进行，共21 d。C组电针刺激频率设置为2 Hz，D组为30 Hz，E组为100 Hz。

1.2.3 指标检测 21 d后腹腔注入1%戊巴比妥钠（40～50 mg/kg体重）将动物麻醉，麻醉后开腹充分暴露腹腔，腹主动脉取血，按BDNF及CRH试剂盒方法要求分离血清，采用ELISA法测定BDNF和CRH。

1.3 统计学方法

所得数据使用SPSS17.0统计软件进行统计，计量资料用单因素方差分析。

2 结果

与A组比较，B、C、D、E组BDNF含量均降低，CRH含量均升高，表明造模成功。与B组比较，C、D、E组BDNF含量升高，CRH含量降低。D、E组与C组BDNF含量降低、CRH含量升高，差异有统计学意义（P＜0.05），表明针刺频率2 Hz效果最好。结果见表1。

表1 各组大鼠血清BDNF、CRH含量比较 （ng/L，x±s）

3 讨 论

前期实验探讨了针灸治疗抑郁症的选穴配伍，确立了最佳组方百会、神门、太冲，命名“解郁方”［5］。本实验建立在前期实验的基础上，研究“解郁方”的不同频率对抑郁症的影响，进一步探讨抑郁症的机制，为临床研究和治疗抑郁症提供依据。

BDNF是在脑内合成的一种蛋白质，它广泛分布于中枢神经系统内，在中枢神经系统发育过程中，对神经元的存活、分化、生长发育起重要作用，并能防止神经元受损伤死亡、改善神经元的病理状态、促进受损伤神经元再生及分化等生物效应，而且也是成熟的中枢及周围神经系统的神经元维持生存及正常生理功能所必需。充足的BDNF能够使大脑不断重写覆盖痛苦的记忆，并在重写的过程中建立信心和安全感。大脑自然分泌BDNF，能够起到调节痛苦和恐惧的作用，BDNF缺乏会导致创伤后压力紊乱，继发加重抑郁症。BDNF属于神经营养素家族，对发育过程中神经元的存活、分化以及成年神经元的存活和功能起重要作用。近年来研究表明，神经营养因子尤其是BDNF在抑郁症发病和治疗中起着重要作用，神经营养不足可引起脑区功能受损，抗抑郁治疗可以上调BDNF并翻转这种损害［6］。

血清CRH为神经垂体及下丘脑中含有的能刺激促肾上腺皮质激素释放的物质，在垂体门脉血液及末梢血中发现也有此类因子。其合成部位尚不太清楚。由于其不太稳定，影响了纯化过程。主要作用于促垂体的促肾上腺皮质细胞受体，通过cAMP系统促进促肾上腺皮质激素的合成与释放。其活性以下丘脑正中隆起最高。电刺激杏仁核区下丘脑结节部、乳头部，可引起促肾上腺皮质激素释放。各种传入性影响主要通过改变下丘脑CRH的合成和释放来改变腺垂体-肾上腺皮质的功能，组成下丘脑-腺垂体-肾上腺皮质轴（HPAA）。电刺激杏仁核可引起CRH释放，而刺激海马则抑制CRH释放。调节CRH的兴奋性递质主要有乙酰胆碱和5-羟色胺，抑制性递质为儿茶酚胺和γ-氨基丁酸。电针能够使慢性应激抑郁大鼠的CRH水平明显下降，起到抑制或治疗抑郁症的效果。

目前研究结果表明，抑郁症的病理生理和发病机制不限于神经递质和神经肽及其受体数量和密度异常等神经生物化学的改变［7］，同时与下丘脑-垂体-肾上腺（HPA轴）之间的功能、海马发生结构和功能改变等有着密切的交互作用。抑郁症的神经内分泌研究开始于20世纪80年代，研究发现抑郁症患者HPA轴存在功能亢进。近年来对于内分泌系统疾病如皮质醇增多的研究中发现抑郁症患病率明显增高，进一步提示神经内分泌系统的功能改变可能同抑郁症存在某些相关性，尤其是HPA轴功能损害［8］。HPA轴具有调节食欲、睡眠、性欲和对应激的适应等功能，这些功能障碍与抑郁症的症状密切相关。临床研究显示约有50%的抑郁症患者有明显的昼夜节律改变［9］，有半数以上的抑郁症患者呈现HPA轴功能亢进［10］。本研究显示，抑郁症大鼠血清BDNF含量低于正常对照组，血清CRH含量高于空白组，这说明抑郁症大鼠的HPA轴存在明显的功能亢进。据本研究推断抑郁症可能与HPA轴的失衡有关。

［1］毛庆秋，黄真.中药治疗抑郁症的作用机制研究进展［J］.中国中药杂志，2007，23（10）：877.

［2］姚李吉，沈洪.抗抑郁中医方药的实验研究进展［J］.光明中医，2008，23（5）：696.

［3］许晶，李晓秋.慢性应激抑郁模型的建立与评价［J］.中国行为医学学科，2003，23（5）：14-17.

［4］李忠仁.实验针灸学［M］.北京：中国中医药出版社，2003：360.

［5］乔瑞瑞，燕平，刘明菲，等.电针“百会”“神门”“太冲”穴对慢性应激抑郁模型大鼠血清ACTH、CORT的影响［J］.世界中西医结合杂志，2014，9（2）：156-158.

［6］Chen B，Dowlatshahi D，MacQueen G M，et al.Increased hip-pocampal BDNF immunoreactivity in subjects treated with antide-pressant medication［J］.Biol Psychiatry，2001，50（4）：260-265.

［7］彭桂军.脑源性神经营养因子与抑郁症的研究进展［J］.国外医学·精神病学分册，2004，31（3）：152-154.

［8］阳琼，李萍，关靖，等.难治性抑郁症与HPA轴的关系研究［J］.临床医学工程，2013，20（7）：815-816.

［9］崔青，孙丽亚，肖红，等.抑郁症患者神经内分泌节律变化的对照研究［J］.中华行为医学与脑科学杂志，2010，19（1）：33-35.

［10］Holsboer F.Prospects for antidepressant drug discovery［J］.Biol Psy-chol，2001，57（1-3）：47.

（编辑：翟春涛）

Effect of different frequency electric acupuncture on the content of BDNF and CRH in serum with depressed model rats

Wang Mindan，Yan Ping
（Shanxi college of TCM，Taiyuan Shanxi 030024）

Objective：To research the effect of different frequency electric acupuncture on the contents of BDNF and CRH in serum with depressed model rats so as to explore the mechanism of depression.Methods：40 SD male rats were divided into blank control group（A group），model group（B group）and acupuncture intervening group（C、D、E group）with 8 rats in each group.Except A group，other groups were accepted the different stress and acupuncture intervening group were intervened by using different frequency electric acupuncture at the same time.After 21 days，the contents of BDNF and CRH in serum were measured.Results：Compared to A group，the content of BDNF were decreased and the content of CRH were increased in B、C、D、E group.Compared to B group，the content of BDNF were increased and the content of CRH were decreased in C、D、E group.The content of BDNF and CRH in C group had significant difference comparing with D、E group.Conclusion：The electric acupuncture have an effect on the depression，especially the 2 Hz.It is possible relationship with HPA axis function regulated by acupuncture.

depression；antideprssion prescription；acupuncture；BDNF；CRH

R245

A

1671-0258（2015）01-0021-03

山西省自然科技基金资助项目（2012011041-3）

王敏丹，在读硕士，E-mail：867094585@qq.com

燕平，教授，硕士研究生导师，E-mail：yanp83@sina.com