PCV2、HCV和PRRSV混合感染的诊治

代振江，刘 钊，曾智勇，汤德元，梁海英，王伟丞

（贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025）

PCV2、HCV和PRRSV混合感染的诊治

代振江，刘 钊，曾智勇*，汤德元，梁海英，王伟丞

（贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025）

猪圆环病毒病是指以2型圆环病毒（PCV2）为主要病原、单独或继发或混合感染其他致病微生物的一系列疾病的总称，其临床症状特征主要为体质下降、消瘦、贫血、黄疸、生长发育不良、腹泻、呼吸困难、母猪繁殖障碍、内脏器官及皮肤的广泛病理变化，特别是肾、脾脏及全身淋巴结的高度肿大、出血和坏死。本病还可导致猪群产生严重的免疫抑制，从而容易导致继发或并发其他传染病。猪瘟（HC）是由猪瘟病毒引起的猪的一种急性或慢性、热性和高度接触性传染病，其特征为发病急、高热稽留和细小血管变性，引起全身泛发性小点出血，脾脏梗死。猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由病毒引起的猪的一种繁殖障碍和呼吸系统的传染病，其特征为厌食、发热、怀孕后期发生流产，产死胎和木乃伊胎；幼龄仔猪发生呼吸系统疾病和大量死亡。

2014年8—11月以来，贵州某猪场先后已有3批保育猪，发病率约60%，病死率约30%～40%。该猪场发病猪皆为保育猪，多于45日龄前后发病，发病猪体温升高、嗜睡、皮肤发红、食欲废绝、喘气、被毛粗乱、精神沉郁、衰弱、喜卧。剖检可见病猪全身淋巴结肿大出血；肺脏呈对称性实变，部分区域出血、肉变与胸腔粘连；肾脏表面凹凸不平，蜡黄质脆；其余脏器未见明显病变。根据上述情况，初步诊断为PCV2、HCV和PRRSV的单独或多重感染。为了进一步确诊，对上述病原进行了实验室核酸检测，结果显示该猪场发病猪存在PCV2、HCV和PRRSV的三重感染，现将检测过程报道如下。

1  材料

1.1 病料

系分别采自3头发病仔猪的组织病料（肝、肾、肺、淋巴结和脾脏等脏器）。

1.2 主要试剂

TaKaRa MiniBEST Viral RNA/ DNA Extraction Kit Ver.4.0、PrimeScript One Step PT-PCR Kit VER.2.0、DL2000；其他化学试剂均为国产分析纯。

2  方法

2.1 病料的处理及核酸的提取

分别取适量剖检病猪的肝、肾、肺脏、淋巴结和脾脏进行碾磨匀浆，反复冻融3次后，12 000 r/min离心10 min，取上清，用TaKaRa MiniBEST Viral RNA/ DNA Extraction Kit Ver.4.0试剂盒进行核酸的提取。

2.2 病原核酸检测

分别用HCV、PRRSV和PCV2的特异性引物，以提取的核酸为模板，参照一步法RT-PCR试剂盒说明书，对HCV、PRRSV进行核酸检测，其反应总体系为50μL：2×1 StepBuffer 25μL，模板7.0μL，上下游引物各1.0μL，PrimeScript 1 Step Enzyme Mix 2μL，RNase Free H2O 14μL；参照PCR试剂盒说明书，对PCV2进行核酸检测，其反应总体系为50μL：ddH2O 10μL，2×GC BufferⅠ25μL，dNTP 8.0μL，上下游引物各2.0μL，模板2μL，Taq酶1μL。上述反应程序均为：95 ℃5 min；94 ℃ 30 s，57 ℃ 30 s，72 ℃30 s，35个循环；72 ℃ 10 min。扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测。

3  结果

病原核酸检测结果表明该猪场送检发病猪体内存在HCV、PRRSV和PCV2的多重感染 （图1）。

图1 病原检测结果

4  结果分析与讨论

据了解，该猪场仔猪于2日龄PRV滴鼻免疫，21日龄断奶后2 d首免猪瘟疫苗2头份，45日龄左右进行猪瘟疫苗二免。该猪场之前的抗体水平监测结果表明，断奶仔猪的猪瘟、蓝耳病抗体阳性率分别为100%、80%，45日龄左右的保育猪猪瘟、蓝耳病抗体阳性率分别为20%、40%，分析可能是由于该猪场在断奶2 d后即进行猪瘟免疫，此时猪瘟母源抗体效价较高，中和了疫苗中的抗原，导致猪瘟的免疫效果不理想；同时，45日龄左右蓝耳病抗体阳性率为40%，表明该阶段已有部分仔猪出现野毒感染，这与病原检测结果一致。

病原检测结果表明发病猪群存在3种病毒的多重感染，鉴于猪场未对PRRSV、PCV2进行免疫且HCV免疫失败，故建议待发病猪群稳定后及时补免HCV和PRRSV疫苗，种猪积极做好PCV2的疫苗免疫；对种猪及仔猪做系统的抗体检测，以掌握母源抗体的消长规律，调整优化免疫程序。此外，值得注意的是剖检时发现发病猪肾脏存在因用药导致的损伤，故建议暂停发病猪群的药物保健，同时在饲料或饮水中适当添加电解多维，饲喂优质饲料。同时，进一步加强饲养管理，进行严格彻底的清洁和消毒以减轻感染压力。

2014-11-21)

“携带遗传标记的猪圆环病毒反向遗传操作平台的构建”，省校合作计划项目，黔科合LH字[2014]7670号

代振江（1991—），男，在读硕士，研究方向：动物传染病病原分子生物学。

曾智勇（1978—），男，教授，博士，硕士生导师，从事动物传染病病原分子生物学研究。