关于一株鸭源沙门氏菌的分离鉴定

2015-12-26闫迎光张学新

畜牧兽医科技信息 2015年9期

关键词：蓬莱市恒温箱革兰氏

闫迎光，张学新

（山东省烟台市蓬莱市动物卫生监督所，山东烟台 264000）

关于一株鸭源沙门氏菌的分离鉴定

闫迎光1，张学新2

（山东省烟台市蓬莱市动物卫生监督所，山东烟台 264000）

本试验对蓬莱市某发病鸭场送检的病死鸭进行了细菌常规分离与鉴定，通过培养特性和革兰氏阴性细菌鉴定该菌为沙门氏菌。

沙门氏菌；鸭；生化试验

沙门氏菌病（Salmonellosis）是公共卫生学上颇具重要意义的人畜共患病之一，其病原沙门氏菌为直杆菌，大小为0.7～1.5μm×2.0～5.0μm，革兰氏染色阴性，兼性厌氧，菌落直径一般为2～4mm。

1 方法

1.1 细菌的分离

在超净台上将送检鸭头露出脑组织，把经过灼烧灭菌的接种环刺入脑组织取菌，并将细菌接种在胰蛋白胨大豆琼脂血清培养基上分离培养。37℃恒温箱中培养24～48h后观察结果。

1.2 培养特性的检测

挑取TSA血清培养基上纯化的单个菌落，分别接种在两组普通琼脂培养基、麦康凯培养基、TSA血清培养基和血液琼脂培养基上。一组放于37℃恒温箱中进行有氧培养，另一组置于厌氧条件下培养，24 h后，观察结果。

1.3 细菌的染色与镜检

挑取TSA血清培养基上纯化的单个菌落涂布于滴有生理盐水的载玻片上，制备成细菌涂片，然后进行火焰固定，再进行革兰氏染色，置于显微镜油镜下观察待测细菌的形态特征。

1.4 革兰氏阴性细菌鉴定系统的鉴定

取出2～8℃避光保存的试剂盒。用灭菌接种环挑取TSA血清培养基上适量的菌苔于生理盐水中，充分混匀，制成菌悬液。按照革兰氏阴性细菌鉴定系统使用说明书要求，用微量移液器分别向OPNG、精氨酸（ADH）、赖氨酸（LDH）、鸟氨酸（ODC）、柠檬酸（CIT）、硫化氢（H2S）、脲酶（URE）、乳糖（LAC）、吲哚（IND）、VP、明胶（GEL）、葡萄糖（GLU）、甘露醇（MAN）、肌醇（INO）、山梨醇（SOR）、鼠李糖（RHA）、蔗糖（SAC）、蜜二糖(MEL)、苦杏仁甙(AMY)、阿拉伯糖(ARA)等生化管中加入100μL菌悬液。其中，CIT为固体斜面培养基，需沿斜面加入。吸取200～ 300μL无菌液体石蜡覆盖ADH、LDH和ODC的瓶口，用封口膜将其它的安瓿瓶封口。置于37℃恒温箱培养18～24h，GEL恒温培养18～24h后转冰箱2～8℃30min。取出避光纸中保存的氧化酶试纸条，使用移液器取0.85%NaCl生理盐水100μL于试纸条的一端，用灭菌接种环挑取TSA血清培养基上的单菌落涂抹在浸湿的试纸条上，1min内观察并记录结果。

向VP管内加6滴甲液和2滴乙液后，摇匀，置于37℃恒温箱继续培养30min后取出，培养基变红为阳性，反之为阴性；向IND管内加1～2滴吲哚试剂，摇匀，2min内出现粉红色环为阳性，反之为阴性；GEL液态为阳性，固态为阴性；其余生化反应管的结果则按照博检革兰氏阴性菌鉴定系统判读表进行判断。