生物梅里埃肠道细菌药敏试验试剂盒ATB G（-）5临床应用局限性分析

肖亚雄，朱波，沈伟，刘影

（宜宾市第一人民医院检验科，四川644600）

生物梅里埃肠道细菌药敏试验试剂盒ATB G（-）5临床应用局限性分析

肖亚雄，朱波，沈伟，刘影

（宜宾市第一人民医院检验科，四川644600）

目的探讨生物梅里埃肠道细菌药敏试验试剂盒ATB G（-）5在临床应用中存在的缺陷，并提出补救（解决）方案。方法以《美国临床和实验室标准化协会（CLSI）M100-S23-表2A肠杆菌科细菌抑菌圈直径和最低抑菌浓度解释标准》（简称CLSI标准）提供的肠杆菌科细菌对应抗菌药物拐点作为标准，对生物梅里埃药敏试验试剂盒ATB G（-）5抗菌药物覆盖情况与各抗菌药物拐点质量浓度进行对比分析。结果试剂盒ATB G（-）5不包括CLSI标准推荐的氯霉素类、磷霉素及硝基呋喃类抗菌药物；试剂盒ATB G（-）5提供的19种抗菌药物拐点均与CLSI标准推荐的抗菌药物拐点不一致或不包含，从而可能导致临床药敏试验报告出现假敏感或假耐药情况。结论以现行CLSI标准作为参考标准，单独使用试剂盒ATB G（-）5进行肠杆菌科细菌药敏试验将产生较大误差，甚至错误，必须用其他药敏试验进行修正方可发出报告。

肠杆菌科；微生物敏感性试验；生物梅里埃；局限性

肠道细菌药敏试验试剂盒ATB G（-）5为法国生物梅里埃（简称梅里埃）公司所生产。由于该试剂盒操作简单（公司提前将诸多试验药物固定在一塑料反应小孔内，进行药敏试验时只需将配置好的菌悬液加入药敏试验反应孔内、35～37℃孵育16～24 h即可，详见试剂盒说明书）、判读方便（根据反应孔内细菌生长抑制情况即可进行药敏试验结果判读）、无需特殊仪器（判读时可采用肉眼判读或仪器判读），因此，较传统微量肉汤稀释法或药敏试验纸片法更适合于临床应用。尤其对于标本量不大的基层医院该试剂具有很大的吸引力，但是由于试剂盒提供的反应孔内抗菌药物质量浓度是固定的，同一种抗菌药物包括一个低质量浓度孔（用于敏感的判读）和一个高质量浓度孔（用于耐药的判读），有的仅有一个判读敏感的质量浓度孔。因此，一旦抗菌药物敏感、耐药判读拐点发生变化时则有可能导致判读结果错误，对临床用药产生误导。本研究以《美国临床和实验室标准化协会（clinical and laboratory standards institute，CLSI）M100-S23-表2A肠杆菌科细菌抑菌圈直径和最低抑菌浓度解释标准》[1]（简称CLSI标准）作为参考标准，对肠道细菌药敏试验试剂盒ATB G（-）5所包含的抗菌药物覆盖情况、对应最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration，MIC）等在临床应用中的局限性进行分析，以期引起使用该试剂盒的同仁注意，以更好地为临床抗菌药物的合理应用提供正确的指导。

1 材料与方法

1.1 材料肠道细菌药敏试验试剂盒ATB G（-）5（生物梅里埃公司生产）。

1.2 方法以CLSI标准（中华检验医学杂志CLSI临床检验标准编译小组2013年出版）作为参考标准。对梅里埃公司生产的肠道细菌药敏试验试剂盒ATB G（-）5所提供的19种抗菌药物覆盖范围、试剂盒提供的19种抗菌药物对应拐点情况与CLSI标准进行对比分析，查找差异并分析其在临床应用中可能出现的误差或错误。

2 结果

2.1 试剂盒ATB G（-）5抗菌药物种类覆盖情况分析试剂盒ATB G（-）5共包含19种抗菌药物，具体为阿莫西林、阿莫西林/克拉维酸、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、替卡西林、替卡西林/克拉维酸、头孢噻吩、头孢呋辛、头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、美罗培南、亚胺培南/西司他丁钠（泰能）、庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星、奈替米星、环丙沙星、复方新诺明等。上述19种抗菌药物覆盖了青霉素类，β-内酰胺类，β-内酰胺酶抑制剂及其复方制剂，第1、2、3、4代头孢菌素类，碳青霉烯类，氨基糖苷类，喹诺酮类等抗菌药物；CLSI标准对于肠杆菌科细菌药敏试验所选药物除要求覆盖上述各类抗菌药物外，还要求包括氯霉素类、磷霉素及硝基呋喃类抗菌药物，其余各类抗菌药物均有至少一种代表药物。CLSI标准还规定对于粪便分离的沙门、志贺菌需常规测试并报告氨苄西林药敏试验结果，对于肠道外分离的沙门菌需测试并报告氯霉素药敏试验结果[1]；硝基呋喃类为CLSI标准推荐的U组抗菌药物，主要用于泌尿道分离的肠道细菌药物敏感试验，而试剂盒ATB G（-）5无氨苄西林、氯霉素、硝基呋喃类抗菌药物。

2.2 试剂盒ATB G（-）5与CLSI标准推荐抗菌药物拐点比较试剂盒ATB G（-）5提供的19种抗菌药物拐点与现行CLSI标准拐点均存在差异，具体表现为阿莫西林被氨苄西林所取代，根据CLSI标准氨苄西林拐点：敏感小于或等于8 μg/mL、耐药大于或等于16 μg/mL，可以根据氨苄西林药敏试验结果推测阿莫西林药敏试验结果，但是否可反推CLSI标准未明确；其余的青霉素类（替卡西林）、β-内酰胺类（哌拉西林）、β-内酰胺酶抑制剂及其复方制剂（除阿莫西林/克拉维酸外）、第1代头孢菌素（头孢噻吩）、第2代头孢菌素（头孢呋辛）、氨基糖苷类、复方新诺明等试剂盒说明书拐点仅有敏感的拐点，而无耐药的拐点，可导致将部分中介而未达耐药的抗菌药物误判为耐药；环丙沙星、头孢吡肟CLSI标准耐药的拐点较试剂盒说明书高，从而会导致假耐药的错误判读；其余抗菌药物（头孢噻肟、头孢他啶等）CLSI标准拐点较试剂盒说明书低，从而可导致将部分本来为中介或耐药的抗菌药物误判为敏感，见表1。

3 讨论

CLSI标准制订的抗微生物药物敏感试验操作方法与判断标准是目前国内临床细菌检验遵循的行业标准。由于该标准的制订需要投入大量人力、财力和物力，所以，国际上大多数国家包括中国在内均未建立自己的标准而依赖CLSI的方法和标准。常规临床检验指标，如血糖、血脂、血细胞计数相对较稳定，因此，一个标准或参考值可以沿用多年。而细菌耐药性检测与上述检验指标不同，因为细菌耐药性与临床抗菌药物的合理或不合理应用[2-3]及细菌本身耐药基因[4-5]的变异等诸多因素直接相关，因此，对于细菌耐药、敏感判读的拐点相对上述其他临床检验指标而言变异较大，故CLSI标准需每年更新，临床微生物实验室通常采取当年或上一年颁布的标准作为参照，其中本研究参照的CLSI标准为2013年颁布的。

表1 试剂盒ATB G（-）5与CLSI标准拐点比较

肠杆菌科细菌是临床血液[6]、尿液[7-8]、呼吸道、脓液[9]等标本中分析率最高的细菌，其中大部分属于致病菌或条件致病菌，因此，需要出具药敏试验报告以供临床医生用药参考。生物梅里埃肠道细菌药敏试验试剂盒ATB G（-）5将众多抗菌药物固定在塑料板孔上，将传统复杂的微量肉汤稀释法进行了简化，且判读简单，因此，深受临床微生物工作者的青睐，在国内有较高的市场占有率。但由于该产品源自法国，而我国目前普遍采用的美国CLSI标准，因此，试剂盒提供的抗菌药物标准与我国采用的CLSI标准不一致。从抗菌药物覆盖范围来看，该试剂盒提供的抗菌药物较CLSI标准缺少氯霉素类、磷霉素及硝基呋喃类抗菌药物，其中针对沙门菌氯霉素通常为临床要求报告的一类抗菌药物，磷霉素主要针对泌尿道分离的大肠埃希菌，通常对于泌尿道分离的肠杆菌科细菌要求报告一种硝基呋喃类抗菌药物。因此，在临床医生提出需求时需要用其他方法，如纸片法或其他覆盖该类抗菌药物的试剂盒补充进行药敏试验。

从试剂盒说明书与CLSI标准推荐的抗菌药物拐点质量浓度比较分析发现，试剂盒说明书提供的19种抗菌药物中，除阿莫西林被氨苄西林取代外，其余18种抗菌药物拐点均与CLSI标准拐点不一致，其中哌拉西林、替卡西林等12种抗菌药物仅提供了敏感的拐点，而无耐药的拐点，因此，在判读时这12种抗菌药物可能实际结果为中介而被误判为耐药；而头孢吡肟和环丙沙星则因为CLSI标准耐药拐点的增加，而导致假耐药的错误判读，从而导致临床抗菌药物选择范围变窄；而头孢噻肟、头孢他啶、泰能因CLSI标准拐点降低，临床应用上可能会将实际耐药的细菌误判为敏感或中介，如以泰能为例，假设某临床分离肠道细菌针对该药物MIC值为5 μg/mL，处于试剂盒说明书提供的拐点[（4～8）μg/mL]之间，判读结果为中介，而实际上该拐点已经超过CLSI标准耐药拐点（4 μg/mL）的上限，实际应该判读为耐药才正确，因此，临床根据试剂盒说明书提供的错误中介报告，大剂量使用泰能进行治疗可能是无效的，这不但导致临床应用这些假敏感/中介的抗菌药物而增加患者费用、浪费医疗资源，更为重要的是延误了临床救治患者的时间而引起患者死亡，并且由于抗菌药物的不合理应用将促进更多耐药细菌的产生。

加强抗菌药物的合理应用一直是国内外临床、微生物学专家一直呼吁和关注的问题，在我国已经上升到了国家层面，近年来，国家卫生和计划生育委员会颁布了《合理使用抗生素指南》、《抗菌药物临床应用管理办法》（卫生部令第84号）等文件，可见临床微生物药敏试验报告在抗菌药物合理应用过程中具有举足重轻的作用，因此，选择符合标准的药敏试验试剂盒是保证正确报告的前提。生物梅里埃肠道细菌药敏试验试剂盒ATB G（-）5与新的CLSI标准存在较大差异，如果采用该试剂盒检测结果出报告需要慎重，对于未覆盖的抗菌药物需要补充采用其他实验方法，如药敏试验纸片法进行报告，对于抗菌药物拐点不包含的药敏试验、可能出现假耐药（假敏感）的抗菌药物需要补充采用其他方法给予纠正，以免发出错误报告，误导临床用药。梅里埃公司作为微生物行业的巨头，应该根据中国的行业标准研制出新的药敏试验试剂盒。

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ThelimitationsanalysisofbioMerieuxenterobacteriasusceptibilitytestkitATBG（-）5inclinicalapplication

XiaoYaxiong，ZhuBo，ShenWei，LiuYing
（DepartmentofClinicalLaboratory，theFirstPeople′sHospitalofYibin，Yibin，Sichuan 644600，China）

ObjectiveTo approach the limitations of bioMerieux enterobacteria susceptibility test kit ATB G（-）5 in clinical application and to propose remedies.MethodsIn line with break points of antibacterial agents of enterobacteriaceae provided by（abbreviated as CLSI）M100-S23 as the standard，the coverage condition of antibacterial agents of bioMerieux enterobacteria susceptibility test kit ATB G（-）5 and their quality concentrations of break points were compared and analyzed.ResultsThe kit ABT G（-）5 excluded three antibacterial agents as follows：chloromycetin，fosfomycin and nitrofurans recommend by CLSI；The break points of 19 antibacterial agents in the kit ATB G（-）5 were not inconsistent or did not contain with those recommended by CLSI M100-S23，which may lead to error drug sensitivity tests，false sensitive or false drug resistance.ConclusionUnder the current CLSI reference standards，the sole application of kit ATB G（-）5 forenterobacteriaceae bacteria susceptibility test may came out larger errors or mistakes.Besides，the results must be corrected by other necessary susceptibility tests before the report is issued.

Enterobacteriaceae；Microbial sensitivity tests；BioMerieux；Limitation

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.04.005

：A

：1009-5519（2015）04-0494-03

2014-09-05）

四川省宜宾市科技局重点科技计划项目（2012SF005）。

肖亚雄（1981-），男，四川宜宾人，硕士研究生，主管技师，主要从事临床微生物耐药性的研究；Email：xiaoyaxiong@163.com。