肿瘤患者红细胞的血红蛋白释放实验初步研究

韩丽红闫 斌高丽君秦良谊秦文斌*

（1 包头医学院血红蛋白研究室，内蒙古 包头 014010；2 包头医学院第一附属医院普外二科，内蒙古 包头 014010）

肿瘤患者红细胞的血红蛋白释放实验初步研究

韩丽红1闫 斌2高丽君1秦良谊1秦文斌1*

（1 包头医学院血红蛋白研究室，内蒙古 包头 014010；2 包头医学院第一附属医院普外二科，内蒙古 包头 014010）

目的在已建立“血红蛋白释放试验HRT”的基础上，研究肿瘤患者的HRT情况。方法同时比较研究全血中红细胞和从中分离出来红细胞的HRT（简称“两种红细胞的HRT”），做淀粉-琼脂糖混合凝胶电泳。第1次电泳后停电一段时间，再进行第2次或更多次电泳。观察红细胞中血红蛋白的释放情况，同时加入了定量因素。结果各种肿瘤标本都有“两种红细胞的HRT”，梯带强度可有不同。本次标本中，游离红细胞梯带相对最强的是肝癌、胰腺癌、胃癌，最弱的是鼻咽癌、甲状腺癌、皮肤癌。全血红细胞的梯带强度普遍较弱，变化相对较小。结论肿瘤患者标本中的血浆因素可能影响全血中红细胞的梯带释放。不同肿瘤其血浆因素可能不一样，具体机制有待深入研究。

肿瘤；血红蛋白释放试验/HRT；红细胞

2007年，本研究组在研究1例轻型β-地中海贫血病例的红细胞电泳过程中偶然发现，该患者红细胞第1次电泳后，比正常人红细胞电泳原点残留有更多的红色物质（加样量相等）；在停电一段时间后再次电泳，该患者标本从原点电泳出来红色物质（后经证实为血红蛋白）比正常成人的多许多：连续多次停电再通电后，轻型β-地中海贫血患者红细胞释放多条血红蛋白区带（称梯状带或竹节带）。在停电一段时间后再次电泳，该患者标本从原点释放出较多的血红蛋白，从而开始创建血红蛋白释放试验（HRT）[1]。在这一现象的启示之下，我们开始研究其他临床标本的血红蛋白释放情况。我们建立HRT，发现地中海贫血时梯带释放增强[2]，现在想看肿瘤患者与正常对照之间红细胞膜或红细胞内血红蛋白存在状态的差异，同时探讨其机制和意义。

1 材料与方法

1.1 材料：全部肿瘤患者血液都来自包头医学院第一附属医院，抗凝剂有肝素、EDTA和柠檬酸盐。

1.2 方法

1.2.1 HRT：两种红细胞的HRT（两种红细胞的双向梯带电泳）。第一向：用患者的全血或由此全血分离出来的红细胞，分别做淀粉-琼脂糖混合凝胶电泳[1-2]，电势梯度6 V/cm，通电15 min、停电15 min，交替进行，共3 h。第二向：到时转90°，电势梯度6 V/cm，通电1.5 h，中间不停电。染色：先染丽春红，再染联苯胺，此时血红蛋白呈蓝黑色，其他蛋白显红色。

1.2.2 梯带定量：使用BAND SCAN软件，每个丽春红标本都扫描定量梯带中血红蛋白A2右上方的第一个血红蛋白区带（Hb1），以及血红蛋白A2右下方的CA（碳酸酐酶）区带，计算：Hb1/CA=梯带强度。游离红细胞梯带强度测定值=X，全血红细胞梯带强度测定值=Y，二者比值Z=X/Y。

2 结 果

2.1 HRT图例：见图1～图2。

2.2 一些癌症HRT定量结果：见表1。

表1 一些癌症HRT定量结果

图1 皮肤癌

图2 胆管癌

3 讨 论

HRT的建立开始于地中海贫血的检测，后来研究过普通外科患者血液标本，尿毒症、高血糖与血液流变学的关系[1-8]，本文开始研究癌症患者红细胞的血红蛋白释放情况。现在看来，各种癌症的血液标本都有再释放，但程度不尽相同，而且每个标本的两种红细胞的梯带关系也有差异。在游离红细胞方面（参见附表中的X），梯带最强的是肝癌、胰腺癌、肺癌、胃癌等，最弱的是鼻咽癌、甲状腺癌、皮肤癌等。在全血红细胞的梯带释放普遍较弱（参见附表中的Y），这说明血液标本中的血浆成分对其中红细胞的再释放有抑制作用，但抑制程度也不尽相同（参见附表中的Z），例如，胆管癌的抑制程度不大，直肠癌肝转移及肝癌抑制较大，皮肤癌抑制最大。梯带抑制程度的大小与血浆成分有关，血浆中成分很多，什么成分影响红细胞再释放，这是一个新的有趣的大课题，研究继续进行中[9-11]。

[1]秦文斌,高丽君,苏燕,等.血红蛋白释放试验与轻β-地中海贫血[J].包头医学院学报, 2007,23(6):561-563.

[2]Su Y,Shao G,Gao LJ,et al.RBC electrophoresis with discontinuous power supply – a newly established hemoglobin release test[J]. Electrophoresis,2009,30(6):3041-3043.

[3]韩丽红,闫斌,高雅琼,等.普通外科患者血红蛋白释放试验的比较研究[J].临床和实验医学杂志,2009,8(7):67-69.

[4]高雅琼,王彩丽,高丽君,等.尿毒症患者低渗血红蛋白释放试验的初步结果[J].临床和实验医学杂志,2010,9(1):12-13.

[5]张晓燕,高丽君,高雅琼,等.血糖浓度和血红蛋白释放试验的比对研究[J].国际检验医学杂志,2010,31(6):524-525.

[6]王翠峰,高丽君,乌兰,等.血红蛋白释放试验与血液流变学检测结果相关性的研究[J].中国医药导报,2010,7(4):64-66.

[7]宝勿仁必力格,王翠峰,高丽君,等.肝硬化患者血红蛋白释放试验明显异常[J].临床和实验医学杂志,2011,10(24):1915-1917.

[8]Su Y,Shen J,Gao LJ,et al.Molecular interaction of re-released proteins in electrophoesis of human erythrocytes[J].Electrophoresis, 2012,33(9/10):1042-1045.

[9]Su Y,Gao LJ,Ma Q,et al.Interactions of hemoglobin in lived red blood cells measured by the electrophoesis release test[J].Electropho resis,2010,31(17):2913-2920.

[10]秦文斌.活体红细胞内血红蛋白的电泳释放[J].中国科学-生命科学,2011,41(8):597-607.

[11]Su Y,Gao LJ,Qin WB.Interactions of hemoglobin in lived red blood cells measured by the electrophoesis release test[J].Methods Mol Biol,2012,869(3):393-402.

The Experimental Study of Hemoglobin Release Test in Different Cancer Patients

HAN Li-hong1, YAN Bin2, GAO Li-jun1, QIN Liang-yi1, QIN Wen-bin1*
(1 Department of Hemoglobin Laboratory, Baotou Medical College, Baotou 014010, China; 2 General Surgery, the First Affiliated Hospital of Baotou Medical College, Baotou 014010, China)

ObjectiveTo study the hemoglobin release test in different cancer patients on the basis of hemoglobin release test.MethodsComparative study of red blood cells in whole blood and extracted from red cell HRT(referred to as the "two red cell HRT")was carried out with starch-agarose mixed gel electrophoresis. After first run of electrophoresis, the power was cut down for a while, the second run of electrophoresis was then performed. Observe the release of hemoglobin in red blood cells with the quantitative factors.ResultsThere are "two red cell HRT" in all tumors, and maybe have different ladder intensity. The ladder intensity of free erythrocyte in liver cancer, pancreatic cancer, gastric cancer and nasopharyngeal carcinoma are strongest. The weakest is thyroid cancer, skin cancer. The ladder intensity of red blood cells is generally weak, and has small changes.ConclusionThere are some plasma factor specimens in cancer patients affect red cells in blood ladder release. Different tumor plasma factors may not be the same, the mechanism need to be further studied.

Cancer; Hemoglobin release test/HRT; Red blood cell

R446.1；R446

B

1671-8194（2015）08-0012-02

*通讯作者