固相萃取–气相色谱法测定甘草中的六六六、滴滴涕含量

张海燕

（新疆库尔勒出入境检验检疫局，新疆库尔勒 841000）

甘草，气微，味甜而特殊［1］，是一味传统中药材，也是新疆重要的进出口商品，主要用于药品、食品、化妆品及香烟类行业。六六六、滴滴涕（DDT）等有机氯农药，化学性质稳定，脂溶性大，残效期长，易在脂肪组织中蓄积，造成人体慢性中毒，严重危及身体健康［2］。尽管我国已在1983 年禁止使用六六六、滴滴涕等有机氯农药，但这些农药至今在土壤、地下水等环境中仍有残存［3］。随着中草药国际贸易的日益频繁，甘草质量越来越受到重视，建立甘草中六六六、滴滴涕农药残留量的快速检测方法十分必要。

目前关于测定上述两种农药残留量的报道较多，但对甘草中六六六、滴滴涕农药残留检测进行研究的报道不多［4–6］。此类农药的前处理方法主要有硫酸磺化法［7］、全自动凝胶净化法(GPC)［8–9］、Quchers法［10］、固相微萃取法［11］等。以上方法检测周期长，操作步骤相对繁琐，试剂消耗量较大，提取效率不高，难以满足大批量、多批次检测的需求［12］。

笔者采用固相萃取法以Florisil 柱净化，气相色谱–电子捕获检测器经DB–1 毛细管柱分析，建立了甘草中农药六六六、滴滴涕残留量的测定方法，该方法简便、省时、准确可靠，完成全部分析仅需15 min。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

气相色谱仪：7890A型，配63Ni电子捕获器(ECD)，美国Agilent 公司；

涡旋混合器：ms3型，德国IKA公司；

超声波清洗器：SB5200型，必能信超生（上海）有限公司；

腕式振荡器：WX 51100–35型，美国Burrell公司；

氮吹仪：N–EVAP 112型，美国Organomation Associates公司；

离心机：CF16RXII型，日本HITACHI公司；

固相萃取装置：美国Waters公司；

旋风磨：CYCLOTEC 1093型，丹麦Foss公司；

电子天平：XP205型，瑞士Mettler Toledo公司；

固相萃取小柱：弗罗里硅土柱（Florisil），1 000 mg／（6 mL），美国Agilent 公司；

α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、P,P’-DDE（滴 滴 伊）、P,P’-DDD（滴 滴 滴）、O, P-DDT、P,P’-DDT标准物质：纯度分别不小于97.5%，97.5%，98.5%，99.6%，98.0%，99.5%，98.5%，99.5%，Dr. Ehrenstorfer 公司；

氯化钠：分析纯，天津风船化学试剂科技有限公司；

正己烷、乙腈、丙酮：色谱纯，美国Burdick & Jackson公司；

实验用水为超纯水。

1.2 色谱条件

色谱柱：DB–1型弹性石英毛细管色谱柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；进样口温度：220℃；检测器温度：320℃；进样方式：脉冲不分流；载气：高纯氮（纯度不小于99.999%），流量为1.0 mL／min；尾吹气：氮气，流量为60 mL／min；进样体积：1 μL；程序升温：初始温度为70℃，保持1 min后，以20 ℃／min升至250℃，保持5 min，再以20℃／min升至270℃。

1.3 样品处理

1.3.1 提取

将甘草样品切断后置于旋风磨中粉碎，准确称取1.00 g甘草粉碎制品，加入10 mL水浸泡30 min，再加入20 mL乙腈，于旋涡仪上涡旋混匀1 min，超声20 min，震荡20 min，加入2.00 g NaCl进行盐析，以10 000 r／min离心5 min，取上清液10 mL (相当于0.5 g样品)，用N2吹干，加入2 mL正己烷，溶解，待净化。

1.3.2 净化

将Florisil小柱置于固相萃取装置上，小柱先用5 mL丙酮–正己烷（1∶9）活化，用正己烷5 mL平衡，然后加入上述2 mL待净化样品液，用8 mL丙酮–正己烷(1∶9)分4 次洗脱，每次2 mL，收集全部洗脱液于10 mL刻度试管中，用氮气吹干后加入1 mL正己烷溶解，定容，上机，以气相色谱法测定。以保留时间定性，色谱峰面积外标法定量。

1.4 标准溶液配制

农药标准储备液：精密称取0.01 g(精确至0.1 mg)标准物质于10 mL容量瓶中，用丙酮–正己烷(1∶9)定容，配制成约1 000 μg／mL单标标准储备液，于–18 ℃保存。

混合农药标准溶液：各取适量体积的对应农药标准储备液于10 mL容量瓶中，用正己烷稀释定容，配制成10 μg／mL混合标准中间液。临用前用正己烷逐级稀释配制成对应浓度的混合农药标准溶液。

2 结果与讨论

2.1 提取溶剂的选择

常用的提取溶剂有乙腈、丙酮和乙酸乙酯。丙酮提取过程中会将大量色素同时提取出来，影响后续净化；乙酸乙酯与水不混溶，不易渗入植物细胞，不利于农药萃取［13］；乙腈作提取溶剂，渗透性好，在盐饱和状态下可以与水完全分离，应用于气相色谱分析有很好的适用性。故选择乙腈作为提取溶剂。

考察加水与不加水条件下农药的回收率，试验结果表明加水浸润提取的回收率高于不加水提取的回收率，这可能是因为浸润后水分子能减少样品颗粒之间的吸附力，可使提取溶剂更好地浸入样品，有利于样品内农药的释放，从而增大提取效率。因此在用有机溶剂提取前向甘草样品中加适量水浸润。

2.2 固相萃取柱的选择

N-丙基乙二胺(PSA)主要去除糖类、脂肪酸、有机酸、酚类和亲脂性色素等极性物质；C18柱是QuEChERS 方 法［14］(Quick，Easy，Cheap，Effective，Rugged，Safe)最为重要的净化剂，除去脂肪、维生素、色素、甾醇效果较好。相对于弗罗里硅土(Florisil )，C18和PSA对农药的回收率影响很小，但它们对色素的净化效果均不理想。石墨化炭黑(GCB)主要去除色素等物质，但在多残留农药的检测中会导致回收率下降，因此在无颜色或者浅颜色的基质中使用较少。Florisil主要用于分离氯化杀虫剂，在美国分析化学家协会（AOAC）和美国环保署（EPA）等推荐方法中也多用它［15］，基于上述原因和目标物的特性，选择弗罗里硅土固相萃取柱为净化柱。

2.3 洗脱溶剂

洗脱剂的选择关系到测定结果的准确度。若洗脱剂极性太强，会洗下一些强保留的杂质组分；若洗脱剂极性太弱，则有些待测组分难以被完全洗脱［16］。用丙酮–正己烷(1∶9)调节洗脱剂的极性效果较好，因此选择丙酮–正己烷(1∶9)为洗脱剂，洗脱剂的用量为8 mL，流量为2.0 mL／min。

2.4 标准曲线和检出限

将10 μg／mL混合农药标准中间液稀释成1.0 μg／mL的混合标准溶液，并以此分别配制质量浓度为0.005，0.01，0.02，0.05，0.10，0.20，0.50 μg／mL的系列混合标准工作溶液，进样分析。各组分浓度均为0.1 μg／mL混合标准溶液的色谱图见图1。以色谱峰面积(y)对农药质量浓度(x)进行回归，计算得相应农药的回归方程。以3倍信噪比时的添加浓度作为方法检出限，以被测组分的信号值大于基线平均噪音10倍时的浓度为定量限，线性范围、线性回归方程及相关系数见表1。

图1 混合农药标准溶液色谱图

表1 线性范围、线性回归方程、相关系数和检出限

2.5 方法精密度和回收率

称取空白甘草样品2.00 g，按标准加入法添加相当于含量0.05，0.1，0.5 mg／kg 3个水平的BHC，DDT 混合标准溶液，按1.3方法处理样品，在1.2色谱条件下测定，每个添加水平重复5 次，得2 种农药共计8 种同分异构体的回收率。空白样品及加标样品的色谱图分别见图2、图3。回收率和相对标准偏差结果见表2。

图2 空白样品色谱图

图3 加标样品(添加0.05 mg／kg)色谱图

表2 空白甘草样品中六六六、滴滴涕农药的回收试验结果(n=5) %

由表2可知，在3个添加水平下，六六六、滴滴涕8个异构体，除P，P’-DDT 的回收率为60.1%外，其余回收率在71.4%～122.2%之间，相对标准偏差(RSD)为2.3%～15.1%，方法的精密度和准确度均符合残留分析的要求。

3 结语

建立了甘草中六六六、滴滴涕农药及异构体的多残留气相色谱检测方法。样品以乙腈为提取剂，水浴超声辅助震荡提取，弗罗里硅土固相萃取柱净化，DB–1 毛细管色谱柱分离，电子捕获检测器检测。该方法的灵敏度和准确度均满足实际样品检测的需要，方法简便，测定快速。

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