气相色谱–质谱法测定食品中葡萄糖酸-δ-内酯*

张协光，刘文丽，曾泳艇，郑彦婕

(深圳市计量质量检测研究院，广东深圳 518000)

葡萄糖酸-δ-内酯是一种多功能食品添加剂，在人体内，它能与含有醇、醛、酚和巯基等基团的有毒物质结合，形成无毒或低毒的配合物并由肾脏排出。在食品工业中将葡萄糖酸-δ-内酯作为凝固剂、胶凝剂、改良剂、防腐剂、酸化剂［1］等，广泛用于肉类、糕点、饮料等食品中。葡萄糖酸-δ-内酯在水溶液中不稳定，易开环转变成葡萄糖醛酸［2］。

目前葡萄糖酸-δ-内酯的检测分析方法主要有比色法［3-8］、气相色谱法［9］和高效液相色谱法［10-13］。比色法操作复杂且灵敏度低，气相色谱法与高效液相色谱法则容易产生干扰物。鉴于上述几种检测方法在实际检测中的缺陷与不足，开发一种方便、灵敏、无干扰的分析方法具有重要的意义。乙酰法是常用的衍生法，可以改变目标物极性或降低其沸点，采用气相色谱分析可减少样品干扰，降低检出限，该方法测定葡萄糖酸-δ-内酯尚未见报道。笔者采用乙酰衍生，三氯甲烷提取，气相质谱联用仪测定，建立了一种准确方便的检测食品中葡萄糖酸-δ-内酯含量的方法，该法检出限低，干扰少，应用范围广。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

气相色谱质谱联用仪：7890A-5975C型，配有EI源，美国Agilent公司；

葡萄糖酸-δ-内酯标准品：纯度100%，美国Sigma公司；

超纯水器：Milli-Q型，美国Millipore公司；

实验所用其它试剂为分析纯；

实验用水为超纯水。

1.2 样品制备

1.2.1 样品提取

称取5.0 g样品，置于100 mL 烧杯中，加50 mL去离子水，煮沸，冷却，转移到100 mL容量瓶中，用乙腈定容。振荡摇匀，转移部分溶液到50 mL离心管中，以4 000 r／min转速离心5 min，取上清液20 mL至蒸馏瓶中，旋转蒸发至近干，于105℃烘干。

1.2.2 样品衍生

加2 mL吡啶到蒸馏瓶中，再加2 mL乙酸酐，于135℃下反应1.5 h。取出蒸馏瓶，放至室温，加5 mL水，10 mL三氯甲烷，涡漩混合30 s，使两相分离。取下层有机相，加少量无水硫酸钠振摇，放置15 min以上，将有机相过滤后上机测定。若样品含量超过标准曲线范围，可稀释后再上机测定。

1.2.3 空白样制备

将样品用去离子水代替，其它操作同1.2.2。

1.2.4 标准溶液配制

(1)葡萄糖酸-δ-内酯标准储备液配制。称取葡萄糖酸-δ-内酯标准品0.100 g(精确到0.000 1 g)，用纯水溶解，加热煮沸，冷却后定容至100 mL，此标准储备液中葡萄糖酸-δ-内酯含量为1 000 mg／L。

(2)葡萄糖酸-δ-内酯标准工作溶液配制。分别吸取葡萄糖酸-δ-内酯标准储备液0.10，0.20，0.50，1.00，5.00，10.0 mL，用乙腈-水(50∶50)定容至100 mL，此系列标准工作溶液葡萄糖酸-δ-内酯的质量浓度为1.0，2.0，5.0，10，50，100 mg／L。

1.3 仪器工作条件

1.3.1 色谱条件

色谱柱：J&W DB-35MS型石英毛细管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm，美国Agilent公司)；进样口温度：250℃；传输线温度：240℃；程序温度：70℃保持1 min，以20℃／min升至190℃，然后以10℃／min升至250℃，保持5 min；载气：氦气，恒流，流量为1.0 mL／min；不分流进样；进样体积：1 μL。

1.3.2 质谱条件

电离模式：电子轰击源(EI)，能量为70 eV；离子源温度：250℃；溶剂延迟时间：6 min；扫描方式：选择离子扫描方式，选择特征离子为m／z 142，184，226。

1.4 样品测定

以m／z 142为定量离子，m／z 184，226离子辅助定性，外标法定量。以标准溶液的色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线并计算回归方程。依据测定的待测样品的色谱峰面积，在标准曲线上查出(或通过回归方程计算)样品中葡萄糖酸-δ-内酯的含量。

2 结果与讨论

2.1 样品处理条件的选择及优化

样品煮沸后，葡萄糖酸-δ-内酯转化成葡萄糖酸，在水溶液中达到平衡。添加乙腈沉淀蛋白，除掉大部分干扰物，衍生完毕后用去离子水除掉多余的乙酸酐。

衍生时间分别采用0.5，1.0，1.5，2.0 h进行试验，发现1.5 h后衍生达到平衡，色谱峰面积稳定。

图1 葡萄糖酸-δ-内酯标准物质(10 mg／L)峰面积变化趋势图

采用肌醇作为内标，部分样品出现肌醇或糖类干扰峰，因此采用外标法，可以达到满意效果。

2.2 色谱条件的优化

葡萄糖酸乙酰化后产物呈中等极性，采用DB-35MS柱比较合适，采用15 m色谱柱可能出现糖醇干扰峰，因此采用30 m色谱柱，虽然测试时间增加，但是干扰峰明显减少。葡萄糖酸-δ-内酯标准物质分子特征提取色谱图见图2，样品色谱图见图3。

图2 葡萄糖酸-δ-内酯标准物质分子特征提取色谱图

2.3 质谱定性

葡萄糖酸乙酰化产物质谱图见图4。样品的保留时间与标准品保持一致，定性离子的相对丰度与标准品的相对丰度一致，m／z 142为最高峰，m／z 184相对丰度允许偏差为20%，m／z 226相对丰度允许偏差为50%，则可说明该样品含有葡萄糖酸-δ-内酯。

2.4 线性方程、线性范围与检出限

按实验方法测定1.2.4系列标准工作溶液色谱峰面积(Y)，以峰面积对葡萄糖酸-δ-内酯的质量浓度(X)进行线性回归，得线性方程、线性相关系数见表1。在优化的实验条件下，对不同浓度的标准样品进行分析，当信噪比S／N=3时对应的目标化合物含量为方法的检出限，结果见表1。

2.5 精密度试验

对9份不同的样品重复测定6次，进行精密度试验，结果见表2。

表2 方法的精密度试验结果(n=6) %

由表2可见，方法相对标准偏差在2.0%以下，精密度满足分析方法要求。

2.6 回收试验

对3份不同的样品进行测定后，向样品中加入不同含量的葡萄糖酸-δ-内酯进行回收试验，回收试验结果见表3。

表3 精密度试验结果 %

由表3可见，回收率在80%～107%之间，说明方法具有较高的准确度，满足分析方法的要求。

3 结语

采用气相色谱-质谱(GC-MS)法实现食品中葡萄糖酸-δ-内酯的测定。样品经衍生后，利用质谱定性，减少干扰物质，保证结果的准确性。本方法简便快速、准确高效、灵敏度高，为食品添加剂葡萄糖酸-δ-内酯的含量监测提供了有效的技术手段，可满足国内外法规的限量要求。

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