枳实薤白桂枝颗粒对异丙肾上腺素所致心肌缺血大鼠血液流变学和抗氧化作用的影响

韩玉生 侯志涛 宫鑫梅 田 明

1.黑龙江中医药大学，黑龙江哈尔滨 150040；2.黑龙江省旅游职业技术学院，黑龙江哈尔滨 150040

枳实薤白桂枝颗粒对异丙肾上腺素所致心肌缺血大鼠血液流变学和抗氧化作用的影响

韩玉生1侯志涛1宫鑫梅2田 明1

1.黑龙江中医药大学，黑龙江哈尔滨 150040；2.黑龙江省旅游职业技术学院，黑龙江哈尔滨 150040

目的 研究枳实薤白桂枝颗粒对心肌缺血模型大鼠血流变指标和抗氧化作用的影响，为新药开发和临床应用提供药效学依据。方法经标准II导联心电图筛选合格的雄性SD大鼠，随机分成正常组、模型组、枳实薤白桂枝颗粒高剂量组、中剂量组和低剂量组、阳性对照组。各组先连续7天灌胃给予相应药物，从第5天开始，除正常组外其余各组同时腹腔注射异丙肾上腺素（5 mg/kg），连续3 d，制备心肌缺血模型。检测大鼠血液流变学指标变化，分光光度法检测血中MDA、SOD、GSHPx和NO水平。结果与正常组相比，模型组大鼠的全血粘度、血浆粘度和纤维蛋白原水平明显升高，MDA和GSH-Px水平显著升高，SOD、NO水平明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；与模型组相比，各治疗组上述指标均有不同程度改善，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 枳实薤白桂枝颗粒可能通过清除氧自由基、提高机体抗氧化能力，从而改善心肌缺血大鼠血液粘浓凝聚的状态，起到保护心肌的目的。

枳实薤白桂枝颗粒；心肌缺血；血液流变学；抗氧化

枳实薤白桂枝汤是东汉张仲景治疗胸痹名方，由枳实、薤白、桂枝、瓜蒌、厚朴5味药组成，具有通阳开结，泄满降逆功效。现代临床上已广泛用于心血管、呼吸和消化系统疾病的预防及治疗，疗效显著[1-3]。在前期工作中，将枳实薤白桂枝汤其改良为颗粒剂型[4]，解决了传统水煎剂服用剂量上难以控制、储存和携带不便等缺点。该研究采用异丙肾上腺素复制心肌缺血大鼠模型，观察不同剂量的枳实薤白桂枝颗粒对模型大鼠血流变指标和抗氧化作用的影响，进一步探讨枳实薤白桂枝颗粒对心肌缺血的保护作用与机制。

表1 枳实薤白桂枝颗粒对心肌缺血大鼠的血液流变学的影响(，n=8)

表1 枳实薤白桂枝颗粒对心肌缺血大鼠的血液流变学的影响(，n=8)

注：与正常组比较*P＜0.05，与模型组比较#P＜0.05。

组别 全血粘度高切（mpa.s） 全血粘度中切（mpa.s） 全血粘度低切（mpa.s） 血浆粘度(mpa.s) 纤维蛋白（g/L）正常组模型组高剂量组中剂量组低剂量组阳性药组4.39±0.78（7.05±0.53）*（4.60±0.36）#（5.12±0.29）#（6.11±0.65）#（5.62±0.43）#7.04±0.96（9.71±1.78）*（7.77±0.79）#（8.20±0.73）#8.63±1.25（7.79±1.15）#14.55±0.99（18.19±1.08）*（15.42±1.04）#（16.59±0.77）#（17.21±0.89）#（15.89±0.86）#1.34±0.05（1.49±0.08）*（1.34±0.05）#（1.36±0.07）#（1.42±0.06）#（1.39±0.05）#2.26±0.40（3.29±0.25）*（2.58±0.30）#3.08±0.16 2.99±0.43（2.72±0.42）#

1 材料与方法

1.1 实验动物与仪器

清洁级雄性SD大鼠，体重（220±20）g，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供（实验动物生产许合格证号：SCXK黑2008004）。实验期内，大鼠均自由饮水。

BL-420F生物机能实验系统，HX-200动物呼吸机；全自动血液流变分析仪；756PC型紫外可见分光光度计。

1.2 药品与试剂

枳实薤白桂枝颗粒：由黑龙江中医药大学实验中心提供（批号：20110906）；复方丹参片；盐酸异丙肾上腺素注射液；戊巴比妥钠、肝素钠；丙二醛（MDA）、总超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、一氧化氮试剂盒（NO）。

1.3 实验方法

1.3.1 模型制备及分组给药 实验于2014年4月—7月进行，取健康大鼠 72只，腹腔注射1%戊巴比妥钠（40 mg/kg）麻醉，采用BL-420F生物机能实验系统检测标准II导联心电图，筛选出正常心电图大鼠60只进行实验。随机分成6组，每组10只，即正常组、模型组、枳实薤白桂枝颗粒高剂量组、中剂量组和低剂量组、阳性对照组（复方丹参片）。

枳实薤白桂枝颗粒高、中和低剂量组及阳性对照组给药浓度分别为1.2 g/kg、0.6 g/kg、0.3 g/kg和0.15 g/kg，按10 mL/kg灌胃给予相应药物，正常组及模型组灌服同体积蒸馏水，每天1次，连续 7 d。第5天开始，除正常组腹腔注射同体积生理盐水外，其余各组参照文献[5]均于灌胃给药后1 h腹腔注射异丙肾上腺素（ISO）注射液（5 mg/kg）连续注射3 d，时间间隔均为 24 h。

1.3.2 指标检测 末次腹腔注射异丙肾上腺素6小时后，各组大鼠用1%戊巴比妥钠40 mg/kg腹腔麻醉，腹主动脉取血，分别用肝素钠和枸橼酸钠抗凝，测定血流变指标及纤维蛋白原。另取血2 mL，3 500 r/min-1离心15 min，分离血清。用756PC型紫外可见分光光度计检测MDA、SOD、GSH-Px和NO，按试剂盒说明书操作。

1.4 统计方法

采用SPSS18.0统计软件对数据进行分析处理，计量资料以（）表示，组间比较用t检验。

2 结果

2.1 枳实薤白桂枝颗粒对心肌缺血大鼠的血液流变学的影响

与正常组相比，模型组全血粘度、血浆粘度和纤维蛋白原显著升高（P＜0.05）；与模型组相比，枳实薤白桂枝颗粒高剂量组、中剂量组与阳性对照组上述指标显著降低（P＜0.05）。提示，枳实薤白桂枝颗粒能使心肌缺血大鼠异常升高的全血粘度、血浆粘度和纤维蛋白原水平明显降低，改善血液粘浓凝聚的状态。见表1。

2.2 枳实薤白桂枝颗粒对心肌缺血大鼠氧自由基的影响

与正常组相比，模型组MDA含量显著升高，SOD、NO含量明显降低，GSH-Px活性显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；与模型组相比，各治疗组上述指标均有不同程度改善，差异有统计学意义 （P＜0.05）。表明枳实薤白桂枝颗粒能通过清除氧自由基、提高机体抗氧化能力，从而改善心肌缺血状态，起到保护心肌的目的。见表2。

表2 枳实薤白桂枝颗粒对心肌缺血大鼠MDA、SOD、GSH-Px及NO的影响(，n=8)

表2 枳实薤白桂枝颗粒对心肌缺血大鼠MDA、SOD、GSH-Px及NO的影响(，n=8)

注：与正常组比较，*P＜0.05，与模型组比较，#P＜0.05。

组别MDA（nmol/mL）SOD（U/mL）GSH-Px（酶活力单位）NO (μmol/L)正常组模型组高剂量组中剂量组低剂量组阳性药组4.07±0.57（7.02±0.74）*（4.44±0.62）#（4.59±0.63）#（5.19±0.67）#（4.39±0.53）#161.88±11.64（120.93±7.89）*（154.26±6.20）#（148.24±9.96）#（140.73±7.94）#（154.47±10.52）#672.38±70.09（507.18±43.30）*（634.76±81.57）#（616.94±75.66）#（588.55±58.29）#（624.89±92.29）#45.44±2.75（30.67±4.39）*（44.99±3.97）#（42.41±3.26）#（38.39±3.16）#（44.18±3.49）#

3 讨论

缺血性心脏病是冠状动脉粥样硬化性心脏病 (coronary heart disease，CHD)的简称，在我国CHD的发病率及死亡率呈现逐年递增的趋势，是危害人类健康的主要疾病之一。CHD属中医学“胸痹”和“心痛”范畴，中医药在抗心肌缺血和防治冠心病方面具有独特的优势日益受到学者的重视。

枳实薤白桂枝汤出自汉代张仲景《金匮要略》，是治疗胸痹证的名方，后世医家用来治疗冠心病心绞痛疗效显著。研究表明，枳实薤白桂枝汤可明显降低高脂血症大鼠血脂水平，改善血液流变学指标和抗氧化作用[6-7]；并发现枳实薤白桂枝汤中橙皮苷、新橙皮苷和圣草酚具有心肌细胞保护作用，而圣草酚的活性最强，且呈良好的量效关系[8]。临床研究表明枳实薤白桂枝汤可进一步改善不稳定型心绞痛患者MMP-9、TIMP-1水平及其基因表达，促进粥样斑块的稳定性[9]。

心肌急剧的暂时性缺血与缺氧导致冠状动脉供血不足，是冠心病基本的病理生理过程，改善心肌缺血状态是防治冠心病的关键。血液粘滞性的增加是使冠脉血流量减少的重要因素之一，全血粘度是反映血液流变性的最重要的指标。血液流变学的异常改变可导致红细胞携氧能力减弱，血流阻力增加，因而加重心肌缺血缺氧，促进心律失常的发生。该研究结果表明模型组全血粘度、血浆粘度和纤维蛋白原显著升高；枳实薤白桂枝颗粒能使心肌缺血大鼠异常升高的全血粘度、血浆粘度和纤维蛋白原水平明显降低，从而改善了血液粘浓凝聚的状态。

此外，CHD的病因与氧自由基的生成、代谢密切相关。研究证实，机体脂质过氧化水平增高与冠心病发病率呈正相关，而机体抗氧化水平与CHD发病率呈负相关[10]。NO是一种血管活性物质，具有扩血管活性作用，在缺血过程中起到重要的的调节作用[11]。内皮来源的NO能调节心血管系统，对缺血心肌具有保护作用[12]。心肌缺血状态下引起中性粒细胞大量聚集于缺血区，使氧自由基过量堆积，机体脂质过氧化作用增强，引起细胞膜的结构和功能损害，从而加剧缺血组织损伤[13-14]。该研究结果显示：模型组大鼠血清中MDA含量明显升高，SOD、NO和GSH-Px活力明显降低，说明异丙肾上腺素使大鼠体内氧自由基代谢发生障碍，脂质过氧化作用增强，与相关文献结果一致[13-14]；而枳实薤白桂枝颗粒高、中和低剂量均能使心肌缺血模型大鼠血清MDA含量明显降低,血清SOD、NO和GSH-Px活力显著提高，尤其以高剂量组作用最为明显。提示枳实薤白桂枝颗粒具有明显的抗氧化作用,可能通过提高机体清除氧自由基的能力来防治CHD的发生与发展。

综上所述,枳实薤白桂枝颗粒不仅能改善心肌缺血引起的血液流变学的异常状态,还可以提高机体的抗氧化能力,抑制脂质过氧化物的产生，对CHD的发生具有很好的治疗作用。

[1]王金锁．枳实薤白桂枝汤治疗窦性心动过缓45例疗效观察[J].实用全科医学，2005，3（1）：86.

[2]顾庆华，黄栋．枳实薤白桂枝汤加味治疗气滞痰阻型反流性食管炎临床观察[J]．中国中医急症，2012，21（1）：140-141.

[3]魏慧渊，陈浩，苏蕾，等．枳实薤白桂枝汤治疗不稳定性心绞痛30例[J]．中国中医急症，2011，20（3）：462-463.

[4]张楠.枳实薤白桂枝颗粒的制备工艺研究及质量标准研究[D].哈尔滨：黑龙江中医药大学，2012.

[5]阎艳丽,于永军,宋晓宇,等.当归芍药散及煎剂对异丙肾上腺素所致大鼠心肌缺血的影响[J].辽宁中医杂志，2006，33（9）：1203-1204.

[6]夏寒星，张业.枳实薤白桂枝汤对高脂血症大鼠血脂及血管内皮功能的影响[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(10):224-226.

[7]夏寒星，张业.枳实薤白桂枝汤对高脂血症大鼠血液流变学指标及抗氧化作用的影响[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(11):170-172.

[8]王程,张玉峰,赵筱萍.枳实薤白桂枝汤抗心肌细胞损伤活性成分的发现研究[J].中国中药杂志,2013,38(10):1601-1605.

[9]戴飞,陆曙,苏伟,等.枳实薤白桂枝汤对不稳定型心绞痛患者MMP-9/ TIMP-1的影响[J].中国实验方剂学杂志，2013,19(14):307-310.

[10]Dem acker PN,et al.Indications for the presence of circulating peroxidized low density lipoproteins in WHHL rabbits treated with antioxidants[J].A thero sclerosis,1993,102(1):691.

[11]Ziche M，Morbidelli L，Choudhuri R，et al.Nitric oxidesynthase lies downstream from vascular endothelial growth factor-induced but not basic fibroblast growth factor induced angiogenesis[J].Journal of Clinical Investigation，1997，99(11)：2625.

[12]TokoH，Zou YZ，M inam ino T，et al.Ang ions in II type 1a receptor is involved in cell infiltration，cytokine production，and neovascularization in infarcted myocardium[J].Arterioscler Throm b Vasc Biol，2004，24 (4)：664-670.

[13]Zweior J L.Mwasurement of superoxide derived free radieal in the reperfused heart,Evidence for a free radical mechanism of reperfusion injury[J]．BiolChem，1988,262(12):1353．

[14]Rao P S,Cohen M V，Mueller H S.Production of free radicals and lipid peroxides in early experimenta myocardial ischemia[J]．J Mol Cell Cardiol，1983,15(10):713．

Effect of Zhishi Xiebai Guizhi-Tang on Hermorrheology and Oxygen Free Radicals in Acute Myocardial Ischemia Induced by Isoproterenol in Rat

Han yusheng1Hou zhitao1Gong xinmei2Tian ming1★
1 Heilongjiang University of Chinese Medicine;2 Heilongjiang Vocational College of Tourism,Haerbin,Heilongjiang province, 150040，China

Objective To investigate the effects of Zhishi Xiebai Guizhi Tang on hermorrheology and oxygen free radicala in Acute Myocardial Ischemia Induced by Isoproterenol in Rat.Methods The health SD rats were randomly divided into blank group，model group，three dose groups of Zhishi Xiebai Guizhi Tang.Myocardial injury model was induced by subcutaneous injection of isoproterenol(5 mg·kg-1).The electrocardiogram ECG was recorded，were detected，Then indexes of hermorrheology，levels of MDA, SOD,GSH-Px and NO in the blood were assayed.Results Compared with the blank group，the whole blood viscosity and plasma viscosity in the model group were increased，the levels of MDA and GSH-Px were increased，the level of SOD and NO were decreased obviously.Compared with model group，the level of the whole blood viscosity and plasma viscosity in Zhishi Xiebai Guizhi Tang group were decreased，the level of MDA and GSH-Px were decreased，the level of SOD and NO were increased.Conclusion The Zhishi Xiebai Guizhi Tang can improve hermorrheology，clean oxygen free radical in rat with Acute Myocardial Ischemia Induced by Isoproterenol.

Acute Myocardial Ischemia;blood rheology;antioxidatio;Zhishi Xiebai Guizhi Tang

R4

A

1674-0742（2015）01（b）－0159-03

2014-09-28）

韩玉生（1973-），男，山东曹县人，硕士，高级实验师，主要从事中医药防治心脑血管病基础研究。

田明(1963-)，男，黑龙江牡丹江人，学士，教授，硕士研究生导师，主要从事中药制剂工艺和质量标准研究。