猪奇异变形杆菌的分离与鉴定

刘泽文，袁芳艳，田永祥，周丹娜，杨克礼，段正赢，郭锐

(湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室，湖北武汉430064)

2013～2014年，湖北省江夏某猪场的保育猪发生以体温升高达、食欲废绝、皮肤苍白、继而腹泻、水样粪便中杂有黏液为主要症状的病例。笔者通过临床解剖、病原分离鉴定、生化鉴定，确定为猪奇异变形杆菌感染。

1 材料与方法

1.1 病料采集 从湖北江夏某规模化猪场采集发病猪小肠、盲肠内容物及肠系膜淋巴结、肺脏及肺门淋巴结等。

1.2 培养基 用于分离和鉴定的培养基为TSA琼脂平板、普通营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板、S.S琼脂平板等，按常规方法配制。

1.3 细菌的培养 无菌采取病猪病料，接种TSA琼脂平板，37℃培养18～24 h后，挑选菌落分别接种TSA琼脂平板、普通营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板和S.S琼脂平板，37℃培养18～24 h后，观察细菌在各培养基上的生长情况。

1.4 细菌的鉴定

1.4.1 镜检。挑选S.S琼脂平板培养基上的单个菌落，通过革兰氏染色，显微镜观察细菌形态。

1.4.2 生化试验。将S.S琼脂平板培养基上培养24 h的菌液按常量接种于微量生化管内，37℃培养16～20 h，观察结果。

1.4.3 分离菌株的毒力试验。将分离菌株接种营养肉汤，37℃培养16～20 h，用S.S平板进行细菌计数，然后用生理盐水将菌株肉汤培养物分别稀释成5×107、1×108、1.5×108、2.0×108CFU/ml。每个稀释滴度腹腔注射昆明小鼠5只，每只0.2 ml，另5只小鼠腹腔注射生理盐水0.2 ml/只作为空白对照，注射后观察7 d，根据小鼠的死亡情况确定菌株的毒力。

1.5 药敏试验 将分离纯化的菌株按常规方法进行药敏试验［1］。

2 结果与分析

2.1 细菌的分离及生长特性 将接种病料的TSA琼脂平板放置于37℃恒温培养箱培养18～24 h后，可见细菌在TSA琼脂平板上生长较快，菌落覆盖整个平板。

2.2 菌株的生长特性 将TSA平板上分离的细菌分别接种普通营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板和S.S琼脂平板，37℃培养18～24 h后，细菌在普通营养琼脂平板上生长很快，由细菌接种点向周围迁徙性扩散生长的灰色平铺菌落，且以接种点为中心形成水波纹状圆心圈，覆盖整个平板;分离菌株接种于麦康凯平板中，不形成粉红色菌落;细菌在S.S琼脂培养基上呈单个菌落生长，时间较长后菌落中心呈黑色。

2.3 细菌的形态特征 从S.S琼脂平板上挑选单个菌落，经涂片、革兰氏染色，在油镜下观察可见细菌为革兰氏阴性杆菌，两端钝圆，呈球形或丝状，大小不等，无芽孢和荚膜。

2.4 生化鉴定结果 按照常规方法进行生化鉴定，鉴定结果如表1所示。

2.5 菌株毒力试验结果 不同稀释滴度的分离菌株腹腔注射小鼠后，记录小鼠的死亡情况。由表2可知，每只小鼠腹腔接种3.0×107CFU分离菌株可致小鼠全部发病死亡。

表1 分离菌株的生化鉴定结果

2.6 药敏试验结果 由表3可知，分离的奇异变形杆菌对头孢曲松、头孢噻肟、头孢哌酮和丁胺卡那霉素等高度敏感，临床上可用该药对发病猪进行治疗。

表3 分离菌株的药敏试验结果

3 讨论

(1)奇异变形杆菌是人和动物的一种常见的条件性致病菌，广泛分布于人和动物的体表、黏膜及消化道，其产生的毒素可引起中毒［2］。当机体免疫力下降时，可感染人和动物，引起发病。在我国已有关于奇异变形杆菌导致猪、鸡和犊牛［3］发病的报道。近年来，我国规模化猪场经常发生由奇异变形杆菌单独引起或继发感染病例的发生，该病已成为危害我国养猪业的一种新的细菌性传染病。另外，奇异变形杆菌引起人的原发性和继发性感染，新生儿脐带感染该菌后导致高死亡性的菌血症和脑膜炎，同时也可以污染食物，造成人类食物中毒。因此，对这种猪的新的细菌传染病应引起高度重视。

(2)笔者在2013～2014年从湖北省江夏、咸宁等地区多个发病猪场采集病料，通过病原分离、生化鉴定确定该病是由奇异变形杆菌感染引起的。猪感染奇异变形杆菌后，主要表现为体温升高，有时可高达42℃以上，咳嗽，病猪气喘，肺部听诊，湿性罗音明显。病理剖检发现，病死猪的肺明显肿胀，呈红色肝变，触之坚实，气管和支气管内充以大量白色泡沫样黏液。肺门淋巴结肿胀，充出血，切面湿润，呈大理石样变。

(3)奇异变形杆菌兼性厌氧，对营养无特殊要求，其在普通琼脂平板上可蔓延成波纹状薄膜布满整个培养基表面，也是本属细菌的特征，这一特征也为奇异变形杆菌的分离提供了便利。小鼠腹腔注射3.0×107CFU/只可引起小鼠全部发病死亡，结果表明分离鉴定的奇异变形杆菌对昆明小鼠有较强的致病能力;药敏试验结果表明，该菌株对头孢曲松、头孢噻肟、头孢哌酮和丁胺卡那霉素高度敏感，临床上常用该类药物对发病猪进行治疗。

(4)奇异变形杆菌的防治措施主要包括:①预防措施。养殖场应对猪场环境和每个猪舍进行严格消毒，同时用敏感药物进行拌料或饮水，可以在一定程度上预防该病的发生。②药物治疗。猪奇异变形杆菌容易对临床常用的抗生素产生耐药性［4］，因此在确诊该病病原后应根据细菌的药敏试验结果，选用敏感的头孢类药物、硫酸丁胺卡那霉素等抗菌药物进行预防和治疗。若有严重脱水的仔猪，则另外加服补液盐水和电解多维溶液。

［1］倪语星，尚红.临床微生物学与检验［M］.北京:人民卫生出版社，2007:57－63.

［2］W·A 黑根.家畜传染病［M］.7版.北京:农业出版社，1988:83－84.

［3］刘泽文，袁芳艳，田永详.猪奇异变形杆菌病的研究进展［J］.安徽农业科学，2014，42(12):3578 －3579.

［4］夏修三，宋翠云，金秋平，等.34株奇异变形杆菌的检出及药物敏感试验结果分析［J］.淮海医药，2013，31(3):238－239.